張陽,馬菁菁,喻哲昊,劉雪妮,孫林春

南京醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科 南京市,210008

骨骼是人體的重要組織器官,具有支持、保護(hù)和運(yùn)動功能。骨組織的新陳代謝活躍,始終處于成骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨形成和破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收過程的動態(tài)自我更新和平衡中,即骨的重塑[1]。生理情況下,成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞協(xié)同作用,在骨形成和骨吸收之間形成穩(wěn)態(tài),以維持正常的骨骼細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量和功能[2]。骨代謝過程的任一環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常都會導(dǎo)致代謝性骨病的發(fā)生。代謝性骨病的發(fā)病與營養(yǎng)、藥物、衰老等多種因素有關(guān)。過去的很長時(shí)間里,研究者對骨重塑障礙的關(guān)注點(diǎn)更多集中在破骨細(xì)胞的過度活化。然而近年來,成骨細(xì)胞功能異常在骨重塑障礙和代謝性骨病的研究中越來越受重視[3]。成骨細(xì)胞(osteoblast,OB) 起源于間充質(zhì)細(xì)胞,主要存在于骨外膜的內(nèi)層、骨髓內(nèi)以及穿行于骨內(nèi)的小血管周圍,是骨形成的主要執(zhí)行者。有研究發(fā)現(xiàn),成骨細(xì)胞分泌的骨膠原、骨基質(zhì)、細(xì)胞因子和酶等能激活骨形成過程,并對破骨細(xì)胞的生成、成熟與活化有調(diào)控作用[4]。骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的自我更新活躍度下降和向成骨細(xì)胞分化障礙,會導(dǎo)致骨形成減少,易發(fā)骨質(zhì)疏松、骨折修復(fù)能力低等問題[5]。研究成骨細(xì)胞的生物學(xué)行為及調(diào)控機(jī)制,對于了解代謝性骨病的發(fā)病機(jī)理并以成骨細(xì)胞為切入點(diǎn)尋找治療策略,具有重大價(jià)值。

自噬是一種細(xì)胞在應(yīng)激刺激下的生存機(jī)制,基礎(chǔ)水平的自噬能維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài);當(dāng)機(jī)體遭遇應(yīng)激刺激時(shí),自噬通過降解一些非必需的細(xì)胞器,幫助細(xì)胞以最低的能耗生存下來。近來不斷有研究發(fā)現(xiàn),自噬現(xiàn)象貫穿各類骨細(xì)胞的發(fā)育成熟過程,對骨代謝平衡有調(diào)節(jié)作用,自噬異常可能成為骨代謝疾病新的發(fā)病機(jī)制[6]。通過調(diào)節(jié)自噬改變骨組織結(jié)構(gòu)、改善代謝性骨病病程,已成為骨科領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。骨形成蛋白 (bone morphogenetic protein,BMPs) 是一類重要的骨誘導(dǎo)因子,目前發(fā)現(xiàn)的BMPs 成員有20 多種,BMP9 是BMPs 家族一員,在造血、神經(jīng)元分化發(fā)育、物質(zhì)代謝等過程中都有重要功能[7-8],近來有研究發(fā)現(xiàn)BMP9 能誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞分化,與骨形成有關(guān)[9-10]。P38 MAPK 是BMP9 的一個(gè)下游通路,參與細(xì)胞自噬過程[11]。此外,在腫瘤[12]、干細(xì)胞定向分化[13]、肝臟疾病[14]等的發(fā)生發(fā)展中都有BMP9/P38 MAPK 途徑參與的相關(guān)報(bào)道。P38 MAPK 活化對破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞活化或凋亡有影響,參與骨代謝進(jìn)程[15-16],但具體機(jī)制未完全闡明。本研究中,我們擬探索BMP9/P38 MAPK 信號通路通過調(diào)控成骨細(xì)胞自噬,影響成骨細(xì)胞增殖和凋亡,參與骨形成的過程,揭示其在骨重塑過程中的作用。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞系

將本實(shí)驗(yàn)室長期保種的小鼠成骨細(xì)胞系細(xì)胞系MC3T3-E1,用含10 %胎牛血清和雙抗霉素的α-MEM 培養(yǎng)基,37 ℃,5 % CO2,飽和濕度培養(yǎng)。自噬誘導(dǎo)方法如下: 將成骨細(xì)胞MC3T3-E1 用200 ng/mL 雷帕霉素(rapamycin) 處理24 h,對照組則加入等體積的雷帕霉素稀釋液。

1.2 主要儀器和試劑

雷帕霉素(北京索萊寶科技有限公司)、TRIzol 試劑盒(日本Takara 公司)、SuperReal PreMix Plus 試劑盒(北京天根生化科技有限公司)、Western 印跡兔單克隆抗體(ab207318,美國Abcam 公司) 和羊抗兔多克隆抗體(ab205718,美國Abcam 公司)、真核表達(dá)載體pcDNA3.1 (上海吉?jiǎng)P基因)、siRNA (上海吉瑪基因)、Lipofectamine 2000 轉(zhuǎn)染試劑(美國Invitrogen 公司)、P38 MAPK激活劑和抑制劑(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)、CCK-8 試劑盒和ROS 檢測試劑盒(南京建成生物科技研究所)、Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡試劑盒(美國BD 公司)。

1.3 細(xì)胞分組及處理

pcDNA3.1-BMP9 組(轉(zhuǎn)入pcDNA3.1-BMP9)、BMP9 siRNA 組(轉(zhuǎn)入BMP9 siRNA)、P38 激活組(10 μmol/L 茴香霉素處理)、P38 抑制組 (10 μmol/L SB-202190 處理)、pcDNA3.1-BMP9+P38抑制組 (pcDNA3.1-BMP9+10 μmol/L SB-202190)、BMP9 siRNA+P38 激活組(BMP9 siRNA+10 μmol/L 茴香霉素處理),同時(shí)設(shè)立pcDNA3.1 組(轉(zhuǎn)入pcDNA3.1)、siRNA NC 組(轉(zhuǎn)入siRNA NC) 和對照組(不做處理)。

1.4 pcDNA3.1-BMP9 和BMP9 siRNA 構(gòu)建

根據(jù)NCBI 檢索的基因序列設(shè)計(jì)并合成針對BMP9 開放閱讀框的上下游引物,PCR 擴(kuò)增BMP9開讀框序列,上游引物5′-TTCCTTCAGAGCAAACAGCA-3′,下游引物 5′-GTTGTGCTCAAATCCCCATT-3′,反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)回收、測序無誤后,在序列兩端加上EcoRⅠ和XbaⅠ內(nèi)切酶位點(diǎn),再與用限制性內(nèi)切酶EcoR Ⅰ和XbaⅠ雙酶切后的線性pcDNA3.1 質(zhì)粒大片段按2∶1 摩爾比例,T4 連接酶16 ℃過夜。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸埃希菌感受態(tài)細(xì)胞,長出的克隆用載體特異性上下游引物先將進(jìn)行PCR 鑒定,再測序驗(yàn)證。由上海吉瑪基因公司設(shè)計(jì)并合成3 條BMP9 siRNA 和1 條siRNA NC,引物序列見表1,轉(zhuǎn)染MC3T3-E1 細(xì)胞后,定量PCR 驗(yàn)證其對BMP9 的干涉效果,上游引物為5′-GGACCCGATGCGGTTAGAG-3′,下游引物為 5′-ATCAAGTGGATGCCCCACAG-3′;內(nèi)參基因GAPDH上游引物為5′-GAATGGGCAGCCGTTAGGAA-3′,下游引物為5′-AGGAAAAGCATCACCCGGAG-3′,干涉效率最高的siRNA 用于正式實(shí)驗(yàn)。

表1 BMP9 siRNA 和siRNA NC 引物序列

1.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

將MC3T3-E1 細(xì)胞按105個(gè)/孔接種到6 孔板中,培養(yǎng)過夜。轉(zhuǎn)染前1 h 更換不完全培養(yǎng)液,用Lipofectamine 2000 轉(zhuǎn)染試劑盒,根據(jù)操作說明進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染,放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)6 h 后,更換新鮮完全培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)48 h,收集細(xì)胞檢測轉(zhuǎn)染效率,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.6 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)

收集各組細(xì)胞于EP 管,加入1 mL RIPA 冰浴裂解20 min,低溫高速離心后,將上清轉(zhuǎn)移到新EP 管,煮沸5 min,再次離心后取上清,BCA 法進(jìn)行蛋白定量。聚丙烯酰胺凝膠(8 %分離膠,12 %濃縮膠) 電泳(80 V,20 min;120 V,90 min),轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜(350 mA,90 min)。封閉2 h后洗膜,加入1∶1 000 稀釋后的一抗4 ℃過夜,充分洗膜,再加入1∶2 000 酶標(biāo)二抗,室溫孵育1 h;洗膜,ECL 顯影,用自動凝膠成像分析儀檢測各組細(xì)胞BMP9、P38 MAPK、LC3-Ⅱ、Beclin-1、P62蛋白表達(dá)。

1.7 細(xì)胞增殖檢測

各組細(xì)胞用胰酶消化后調(diào)整濃度為1 ×105個(gè)/mL,按100 μL/孔接種96 孔板,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)46 h;每孔加入10 μL CCK-8 試劑,避免產(chǎn)生氣泡影響讀數(shù),再放回培養(yǎng)箱孵育2 h;取出96 孔板,用全自動酶標(biāo)儀在450 nm 處檢測各孔吸光度,反映細(xì)胞增殖情況。

1.8 細(xì)胞凋亡檢測

將各組細(xì)胞用胰酶消化,用1 ×PBS 制成105個(gè)/mL 的單細(xì)胞懸液,按100 μL/孔加入上樣管中,先加入20 μL FITC,渦旋混勻后,室溫避光孵育20 min;再加入20 μL PI,混勻后再次避光孵育20 min;每管加入500 μL 1 ×PBS 緩沖液,混勻后1 h 內(nèi)上機(jī)檢測。

2 結(jié)果

2.1 篩選有效的BMP9 siRNA

定量PCR 結(jié)果(圖1) 顯示,轉(zhuǎn)染BMP9 siRNA-1、BMP9 siRNA-2 和BMP9 siRNA-3 的細(xì)胞BMP9 mRNA 表達(dá)水平分別為 (0.66 ± 0.12)、(0.53 ±0.10) 和(0.41 ±0.09),均較對照組顯著降低(P＜0.01),BMP9 siRNA-3 的干涉效果最好,故選定BMP9 siRNA-3 為有效siRNA 用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖1 BMP9 siRNA 干涉效果鑒定

2.2 Rapamycin 誘導(dǎo)MC3T3-E1 細(xì)胞自噬

由圖2 可見,Rapamycin 組MC3T3-E1 細(xì)胞LC3-Ⅱ和Beclin-1 蛋白水平較對照組高 (P＜0.05),P62 蛋白水平較對照組低(P＜0.05)。結(jié)果表明Rapamycin 誘導(dǎo)MC3T3-E1 細(xì)胞發(fā)生自噬。

圖2 Rapamycin 誘導(dǎo)的MC3T3-E1 細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平

2.3 Rapamycin 誘導(dǎo)MC3T3-E1 細(xì)胞BMP9 表達(dá)和P38磷酸化

由圖3 可見,Rapamycin 組MC3T3-E1 細(xì)胞BMP9 蛋白水平較對照組升高(P＜0.05);P38 蛋白水平與對照組無差異,p-P38 蛋白水平較對照組升高(P＜0.05)。結(jié)果顯示,Rapamycin 能誘導(dǎo)細(xì)胞BMP9 高表達(dá)和P38 磷酸化。

圖3 Rapamycin 誘導(dǎo)的MC3T3-E1 細(xì)胞BMP9 和P38 蛋白表達(dá)水平

2.4 BMP9/P38 MAPK 對MC3T3-E1 細(xì)胞自噬的調(diào)控

由圖4A 可見,pcDNA3.1-BMP9 組MC3T3-E1細(xì)胞LC3-Ⅱ和Beclin-1 蛋白水平高于對照組(P＜0.05),P62 蛋白水平較對照組低 (P＜0.05);BMP9 siRNA 組細(xì)胞LC3-Ⅱ和Beclin-1 蛋白水平低于對照組(P＜0.05),P62 蛋白水平高于對照組(P＜0.05),pcDNA3.1 組和siRNA NC 組細(xì) 胞LC3-Ⅱ、Beclin-1 和P62 蛋白水平與對照組無差異(P＞0.05)。結(jié)果表明,BMP9 能引起MC3T3-E1細(xì)胞自噬。

圖4 BMP9/P38 MAPK 對MC3T3-E1 細(xì)胞自噬的影響

圖4B 顯示,P38 激活組MC3T3-E1 細(xì)胞LC3-Ⅱ和Beclin-1 蛋白水平高于對照組(P＜0.05),P62 蛋白水平較對照組低(P＜0.05);P38 抑制組LC3-Ⅱ和Beclin-1 蛋白水平低于對照組 (P＜0.05),P62 蛋白水平高于對照組(P＜0.05),提示P38 通路活化能引起MC3T3-E1 細(xì)胞自噬。pcDNA3.1-BMP9+P38 抑制組細(xì)胞LC3-Ⅱ、Beclin-1和P62 蛋白水平與對照組無差異,BMP9 siRNA +P38 激活組LC3-Ⅱ、Beclin-1 和P62 蛋白水平與對照組無差異(P＞0.05) (圖4C),提示BMP9 能通過P38 MAPK 通路調(diào)控MC3T3-E1 細(xì)胞自噬。

2.5 BMP9/P38 MAPK 對MC3T3-E1 細(xì)胞增殖和凋亡的影響

由圖5A 可見,pcDNA3.1-BMP9 組細(xì)胞增殖率為(189 ±13)%,高于對照組(P＜0.05);BMP9 siRNA 細(xì)胞增殖率為(132 ±10)%,低于對照組(P＜0.05);pcDNA3.1 組和siRNA NC 組細(xì)胞增殖率與對照組無差異(P＞0.05),表明BMP9 能促進(jìn)MC3T3-E1 細(xì)胞增殖。

圖5 BMP9/P38 MAPK 對MC3T3-E1 細(xì)胞增殖的影響

P38 激活組細(xì)胞增殖率為(204 ±14)%,高于對照組(P＜0.05);P38 抑制組細(xì)胞增殖率為(121 ±6)%,低于對照組(P＜0.05) (圖5B),表明P38 MAPK 通路能促進(jìn)MC3T3-E1 細(xì)胞增殖。pcDNA3.1-BMP9+P38 抑制組和BMP9 siRNA+P38 激活組細(xì)胞增殖率分別為(145±8)%和(156±6)%,與對照組無差異(P＞0.05) (圖5C),提示BMP9 能通過p38 MAPK 通路調(diào)控MC3T3-E1 細(xì)胞增殖。

pcDNA3.1-BMP9 組細(xì)胞凋亡率為 (6.56 ±1.23)%,低于對照組(P＜0.05);BMP9 siRNA組細(xì)胞凋亡率為(18.45 ±3.54)%,高于對照組(P＜0.05);pcDNA3.1 組和siRNA NC 組細(xì)胞凋亡率與對照組無差異(P＞0.05),表明BMP9 能減少M(fèi)C3T3-E1 細(xì)胞凋亡(圖6)。

圖6 BMP9 對MC3T3-E1 細(xì)胞凋亡的調(diào)控

P38 激活組細(xì)胞凋亡率為(4.12 ±0.87)%,低于對照組(P＜0.05);P38 抑制組細(xì)胞凋亡率為(20.71 ±2.44)%,高于對照組(P＜0.05),表明P38 MAPK 通路能減少M(fèi)C3T3-E1 細(xì)胞凋亡 (圖7A)。pcDNA3.1-BMP9+P38 抑制組和BMP9 siRNA+P38 激活組細(xì)胞凋亡率分別為 (10.04 ±1.78)%和(13.15 ±2.01)%,與對照組無顯著性差異(P＞0.05) (圖7B)。

圖7 BMP9/P38 MAPK 對MC3T3-E1 細(xì)胞凋亡的影響

以上結(jié)果提示BMP9 能通過P38 MAPK 通路影響MC3T3-E1 細(xì)胞的凋亡。

3 討論

近年來,不斷有研究發(fā)現(xiàn)自噬現(xiàn)象貫穿于骨組織及各類骨細(xì)胞的發(fā)育成熟過程。Shi 等[17]發(fā)現(xiàn)糖皮質(zhì)激素能以劑量依賴的方式影響破骨細(xì)胞的生成,隨著劑量的升高,破骨細(xì)胞內(nèi)自噬水平也上調(diào);應(yīng)用自噬抑制劑3-MA 后糖皮質(zhì)激素對破骨細(xì)胞生成的調(diào)控作用消失,證明糖皮質(zhì)激素通過自噬影響破骨細(xì)胞生成;Nollet 等[18]發(fā)現(xiàn)自噬伴隨著成骨細(xì)胞的礦化過程,在敲除自噬基因的成骨細(xì)胞和自噬基因特異性缺陷小鼠中發(fā)現(xiàn),成骨細(xì)胞的礦化能力顯著降低,自噬作用與成骨細(xì)胞的礦化和骨穩(wěn)態(tài)密切相關(guān)。Yang 等[19]研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激能通過誘導(dǎo)成骨細(xì)胞自噬,緩解ROS 對成骨細(xì)胞的氧化損傷,調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞自噬可能對骨質(zhì)疏松癥具有潛在的治療價(jià)值。以上均提示我們自噬通路在骨代謝平衡中有重要的調(diào)節(jié)作用。我們用自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素處理成骨細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),細(xì)胞的自噬蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1 水平明顯升高,同時(shí)發(fā)現(xiàn)BMP9蛋白水平也升高。目前報(bào)道與骨形成有關(guān)的BMP家族成員有BMP2、BMP4、BMP5、BMP7、BMP9等。有研究指出,BMP9 能誘導(dǎo)成骨細(xì)胞ALP 活性和鈣鹽沉積,促進(jìn)裸鼠皮下異位成骨[20]。但關(guān)于BMP9 誘導(dǎo)成骨的機(jī)制研究還很少,尚未見其他報(bào)道。雷帕霉素誘導(dǎo)后,我們還發(fā)現(xiàn),P38 蛋白發(fā)生了磷酸化激活。P38 MAPK 是BMP9 的下游通路,上述結(jié)果提示我們,雷帕霉素誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞內(nèi)發(fā)生了自噬和BMP9/P38 MAPK 信號通路的活化。

通過研究我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),在MC3T3-E1 細(xì)胞中轉(zhuǎn)入外源性BMP9 后,細(xì)胞自噬蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1 表達(dá)均上調(diào),P62 蛋白表達(dá)下調(diào);而轉(zhuǎn)入外源性BMP9 siRNA 后,自噬蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1表達(dá)均下調(diào),P62 蛋白表達(dá)上調(diào),以上結(jié)果表明BMP9 能誘導(dǎo)成骨細(xì)胞發(fā)生自噬。P38 激活劑處理MC3T3-E1 細(xì)胞后,LC3-Ⅱ和Beclin-1 蛋白表達(dá)上調(diào),P62 蛋白表達(dá)下調(diào);相反地,P38 抑制劑處理的MC3T3-E1 細(xì)胞LC3-Ⅱ和Beclin-1 蛋白表達(dá)下調(diào),而P62 蛋白表達(dá)上調(diào),說明P38 MAPK 通路活化能引起成骨細(xì)胞自噬。

目前對調(diào)控骨細(xì)胞自噬過程的相關(guān)蛋白和信號通路的研究較少。已有的研究中,Pantovic 等[21]研究發(fā)現(xiàn),AMPK 通路能通過mTOR 抑制介導(dǎo)的細(xì)胞自噬控制間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化。Song 等[22]發(fā)現(xiàn)PTEN 和Notch 信號通路對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自噬有調(diào)控作用,從而影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成脂分化。用不同濃度NF-κB 信號通路抑制劑SN50 體外誘導(dǎo)小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞自噬水平明顯升高[23]。BMP9 能活化P38 MAPK 信號通路,誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞的定向分化[24];且BMP9和P38 MAPK 信號通路與自噬的關(guān)系已經(jīng)得到諸多研究證實(shí),但目前尚未見BMP9/P38 MAPK 與骨細(xì)胞自噬的研究報(bào)道。我們發(fā)現(xiàn),用P38 抑制劑處理轉(zhuǎn)入了外源性BMP9 基因的MC3T3-E1 細(xì)胞后,細(xì)胞的LC3-Ⅱ、Beclin-1 和P62 蛋白水平均回復(fù)至與對照組相當(dāng)?shù)乃?說明阻斷P38 活化能有效抑制BMP9 高表達(dá)所引起的細(xì)胞自噬;而對轉(zhuǎn)入了外源性BMP9 siRNA 的MC3T3-E1 細(xì)胞用P38 激活劑處理后,細(xì)胞的LC3-Ⅱ、Beclin-1 和P62 蛋白水平也與對照組無顯著差異,即P38 活化能逆轉(zhuǎn)BMP9 低表達(dá)對成骨細(xì)胞自噬的抑制作用,BMP9 通過調(diào)控P38 MAPK 信號通路誘導(dǎo)成骨細(xì)胞發(fā)生自噬。

自噬是細(xì)胞在應(yīng)激條件下的一種自我保護(hù)機(jī)制。自噬與凋亡的平衡對維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要,在骨代謝疾病和恢復(fù)過程中常伴隨成骨細(xì)胞自噬和凋亡的發(fā)生,兩者在功能上既存在聯(lián)系,又有明顯不同。自噬可以發(fā)生在凋亡之前,并啟動細(xì)胞凋亡;也可以保護(hù)細(xì)胞免于凋亡和壞死。我們發(fā)現(xiàn),BMP9 高表達(dá)和P38 MAPK 活化都能促進(jìn)MC3T3-E1 細(xì)胞的增殖,抑制細(xì)胞的凋亡;P38 抑制劑能抑制BMP9 高表達(dá)的MC3T3-E1 細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,而P38 活化劑能促進(jìn)BMP9 低表達(dá)的MC3T3-E1 細(xì)胞增殖,抑制細(xì)胞凋亡。我們的研究結(jié)果表明,MC3T3-E1 細(xì)胞發(fā)生自噬時(shí),細(xì)胞凋亡減少;抑制MC3T3-E1 細(xì)胞自噬時(shí),細(xì)胞凋亡增加,即自噬可能抑制MC3T3-E1 細(xì)胞凋亡,說明自噬活性對成骨細(xì)胞的保護(hù)作用。

綜合以上,BMP9 能通過P38 MAPK 信號通路調(diào)控成骨細(xì)胞自噬和凋亡,這為BMP9/P38 MAPK 通路在骨代謝疾病中的應(yīng)用提供新證據(jù),也為進(jìn)一步揭示細(xì)胞自噬對成骨細(xì)胞的保護(hù)作用的機(jī)制提供新思路,對骨代謝疾病的臨床治療及修復(fù)有積極的意義。