柳旭麗，徐 紅，劉金香，王志強

（1.昌邑市人民醫(yī)院特檢科，山東 昌邑 261300；2.昌邑市人民醫(yī)院檢驗科，山東 昌邑261300 3.濰坊市人民醫(yī)院創(chuàng)傷骨科，山東 濰坊 261041）

高血壓（hypertensive）是我國常見的慢性病。近幾年隨著飲食和生活習(xí)慣的改變，該病呈逐年增長的趨勢[1，2]。高血壓腦出血是發(fā)生在高血壓患者的腦實質(zhì)出血，是高血壓患者常見的并發(fā)癥，是我國常見的腦卒中疾病，病死率較高[3，4]。即使高血壓腦出血患者存活，也會有不同程度的后遺癥，嚴重影響其身心健康。免疫因素、炎癥介質(zhì)的失衡與高血壓腦出血疾病的發(fā)生和繼發(fā)性損傷有關(guān)。腫瘤壞死因子-α誘導(dǎo)蛋白-8-2（TIPE2，TNFAIP8L2）屬于TNFAIP8家族成員，是一種負性免疫調(diào)控蛋白，參與維持機體的免疫穩(wěn)態(tài)，使炎性細胞因子與抗炎因子保持平衡[5]。TIPE2在哮喘、冠心病、腫瘤等疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。近年研究發(fā)現(xiàn)，免疫系統(tǒng)和炎癥因子的紊亂在高血壓發(fā)生中有重要作用[6-9]。TNF-α、IL-1β與高血壓的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[10，11]。TNF-α有157個氨基酸主要參與細胞免疫，由Th1細胞分泌是炎癥的中樞調(diào)節(jié)因子，參與維持機體免疫應(yīng)答反應(yīng)的正常過程[12，13]。IL-1β主要由巨噬細胞合成并分泌，是早期炎癥反應(yīng)主要的促炎因子，參與刺激T細胞和B細胞的增殖，促進炎癥因子的生成[14-16]。目前，TIPE2聯(lián)合TNF-α、IL-1β在高血壓腦出血的報道甚少?；诖?，本研究通過檢測高血壓腦出血患者血清中TIPE2、TNF-α、IL-1β表達水平的變化，探索TIPE2、TNF-α、IL-1β在高血壓腦出血發(fā)生發(fā)展過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月-2020年12月在昌邑市人民醫(yī)院就診并經(jīng)過臨床診斷確診的高血壓腦出血患者45例作為觀察組，另選選同期45例體檢的健康志愿者作為對照組。觀察組男24例，女21例；年齡38～75歲，平均年齡（57.98±9.35）歲；出血量20～75 ml，平均出血量（48.11±16.62）ml。對照組男22例，女23例；年齡40～72歲，平均年齡（60.58±7.88）歲。兩組年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），有可比性。所有患者均對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2 納入和排除標準 納入標準：①觀察組患者均經(jīng)顱腦CT或MRI明確診斷且有高血壓病史，并于24 h內(nèi)住院治療，行常規(guī)脫水、吸氧、止血治療；②對照組患者均無高血壓病史。排除標準：①非高血壓腦出血；②合并腦疝、腦腫瘤；③有其他惡性腫瘤；④近期合并感染；⑤有高脂血癥、糖尿病；⑥合并免疫系統(tǒng)疾病。

1.3 TIPE2、TNF-α、IL-1β檢測 于高血壓腦出血急性期（發(fā)病后7 d內(nèi)）、恢復(fù)期（發(fā)病21 d后）抽取空腹外周靜脈血5 ml，抽取健康志愿者空腹外周靜脈血5 ml，3000 r/min離心15 min后取上清液做好標記，放入-80℃冰箱備用。檢測TIPE2、TNF-α、IL-1β的表達水平時，自冰箱內(nèi)取出血清，冰上解凍，然后2000 r/min，離心15 min，取上清液，按照說明書用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測。試劑盒購買于上海酶聯(lián)生物科技有限公司。使用美國全自動酶聯(lián)檢測儀450 nm讀取OD值，將OD值代入試劑盒標準曲線、公式計算樣品的濃度。

1.4 觀察指標 ①比較觀察組腦出血急性期及恢復(fù)期與對照組血清TIPE2、TNF-α、IL-1β的表達水平；②將觀察組患者分為TIPE2低表達組（≤65 pg/ml），TIPE2高表達組（＞65 pg/ml）；≤60歲，＞60歲；出血量≥40 ml，出血量＜40 ml；血清TNF-α低表達組（≤7 ng/L），TNF-α高表達組（＞7 ng/L）；IL-1β低表達組（≤4 pg/ml），IL-6高表達組（＞4 pg/ml），分析觀察組TIPE2與TNF-α、IL-1β與常用臨床指標的關(guān)系；③分析觀察組TIPE2與TNF-α、IL-1β的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料用（）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗；TIPE2與TNF-α、IL-1β的關(guān)系采用Pearson相關(guān)性分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組TIPE2、TNF-α、IL-1β表達水平比較 觀察組患者治療后4例死亡。觀察組急性期血清TIPE2表達水平低于對照組，TNF-α、IL-1β表達水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組急性期血清TIPE2表達水平低于恢復(fù)期，TNF-α、IL-1β表達水平高于恢復(fù)期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）見表1。

表1 TIPE2、TNF-α、IL-1β表達水平比較（）

表1 TIPE2、TNF-α、IL-1β表達水平比較（）

注：t1，P1表示對照組與觀察組急性期比較；t2，P2表示觀察組急性期與觀察組恢復(fù)期比較

2.2 觀察組TIPE2、TNF-α、IL-1β表達與臨床指標的關(guān)系 觀察組血清TIPE2、TNF-α、IL-1β表達水平分別與年齡、性別無關(guān)（P＞0.05），與出血量有關(guān)（P＜0.05），見表2。

表2 觀察組TIPE2、TNF-α、IL-1β表達與臨床指標的關(guān)系（n）

2.3 觀察組血清TIPE2與TNF-α、IL-1β表達的關(guān)系 觀察組血清TIPE2的表達與TNF-α、IL-1β的表達相關(guān)，見表3。進一步分析發(fā)現(xiàn)，TIPE2表達與TNF-α（r=-0.325，P=0.015），IL-1β（r=-0.278，P=0.032）的表達均呈負相關(guān)，見圖1。

圖1 TIPE2表達與TNF-α、IL-1β的關(guān)系

表3 觀察組血清TIPE2與TNF-α、IL-1β表達的關(guān)系（n）

3 討論

高血壓腦出血多發(fā)生于50～70歲中年人，男性多見，主要因為血壓長期在較高的水平，損壞動脈壁的彈性，損傷血管內(nèi)皮細胞，容易破裂。高血壓腦出血病情進展比較快，致死率、致殘率較高，嚴重威脅居民的身心健康[17]。腦出血造成的病理損傷，主要是因為血腫對周圍腦組織的壓迫，從而損傷腦實質(zhì)[1，17，18]?？傊?，腦出血引起的腦損傷是一個非常復(fù)雜的過程，而導(dǎo)致患者預(yù)后不良的原因與腦出血引發(fā)的腦損傷有主要關(guān)系[19]。近幾年，研究發(fā)現(xiàn)免疫因素、細胞因子和炎癥介質(zhì)與腦出血繼發(fā)腦損傷有一定的關(guān)系。

腫瘤壞死因子（TNF）-α誘導(dǎo)蛋白8（TNFAIP8/TIPE）家族是最近發(fā)現(xiàn)的一個蛋白質(zhì)家族，有4個成員：TNFAIP8、TIPE1、TIPE2和TIPE3。TIPE家族的所有成員都擁有一個共同的TIPE2同源性（TH）結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域可以與一系列磷脂相互作用，從而調(diào)節(jié)磷脂酰肌醇信號傳導(dǎo)。TIPE家族的蛋白質(zhì)主要起調(diào)節(jié)靶向信號通路蛋白磷酸化的作用。TIPE2在人類造血和非造血細胞類型中均表達，可結(jié)合和激活caspase8并促進凋亡。此外，TIPE2主要抑制T細胞受體（TCR）和Toll樣受體（TLR）的激活，調(diào)節(jié)下游信號通路從而維持免疫穩(wěn)態(tài)并抑制腫瘤和炎癥[5]。研究表明，TIPE2顯著抑制小鼠巨噬細胞中單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）和IL-6、IL-1β的表達。TIPE2在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、冠心病和慢性乙型肝炎中異常表達，并參與這些疾病的進展[20，21]。

TNF-α最初被認為是一種引起腫瘤壞死的因子，但最近已被確定能夠參與自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展。TNF-α與兩種不同的受體結(jié)合，啟動信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。這些途徑的激活導(dǎo)致各種細胞反應(yīng)，包括細胞存活、分化和增殖。并且，TNF-α信號的激活與慢性炎癥相關(guān)，并最終可能導(dǎo)致自身免疫性疾病等病理并發(fā)癥的發(fā)展。TNF-α水平升高與多種疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，例如癌癥、糖尿病、高血壓、冠心病等。

白細胞介素-1（IL-1）家族由11種獨特的已知配體和拮抗受體組成，它們參與誘導(dǎo)局部和全身炎癥或誘導(dǎo)抗炎反應(yīng)。IL-1α和IL-1β是最早發(fā)現(xiàn)的白細胞介素，并通過白細胞介素1受體1（IL-1R1）的信號傳導(dǎo)發(fā)揮類似的促炎癥反應(yīng)。IL-1R1信號的生物學(xué)效應(yīng)由白細胞介素1受體拮抗劑（IL-1Ra）內(nèi)源性調(diào)節(jié)，其與IL-1α和IL-1β競爭IL-1R1結(jié)合。IL-1β是一種關(guān)鍵的促炎細胞因子，參與調(diào)節(jié)宿主的免疫反應(yīng)。IL-1β在前述研究中表明，在高血壓腦出血、關(guān)節(jié)炎、哮喘等疾病中出現(xiàn)異常表達[11，14]。

本研究發(fā)現(xiàn)，高血壓腦出血患者血清中TIPE2的表達低于健康人，TNF-α、IL-1β的表達高于健康人，并且這些指標在高血壓腦出血患者急性期與恢復(fù)期的表達也存在差異。說明TIPE2與TNF-α、IL-1β參與了高血壓腦出血的發(fā)生發(fā)展，TIPE2作為維持機體免疫平衡的因子，其異常表達說明高血壓患者存在免疫系統(tǒng)的紊亂。免疫平衡的紊亂引發(fā)的炎癥介質(zhì)的異常表達在高血壓腦出血發(fā)展中起到了一定的作用。本研究還發(fā)現(xiàn)，TIPE2與TNF-α、IL-1β的異常表達在高血壓腦出血患者中與年齡、性別無關(guān)，與出血量有關(guān)，TIPE2的表達與TNF-α、IL-1β的表達變化有關(guān)，并且TIPE2的表達分別與TNF-α、IL-1β的表達呈負相關(guān)。說明TIPE2維持免疫平衡紊亂會影響TNF-α、IL-1β炎癥因子的表達，TIPE2與TNF-α、IL-1β參與免疫平衡相關(guān)。高血壓患者體內(nèi)存在微炎癥的狀態(tài)，炎癥因子的激活可能是高血壓患者器官功能損傷的重要因素。但是TIPE2與TNF-α、IL-1β介導(dǎo)參與的免疫平衡之間的具體機制需要在今后的研究中繼續(xù)去探討。

綜上所述，TIPE2在高血壓腦出血患者中的表達降低，TNF-α、IL-1β表達升高，且TIPE2的表達與TNF-α、IL-1β呈負相關(guān)。