李元慶，付亞寧，張麗娟，王 瑛，葛 莉

（1.昌邑市人民醫(yī)院耳鼻喉科，山東 昌邑 261300；2.昌邑市人民醫(yī)院口腔修復(fù)科，山東 昌邑 261300；3.昌邑市人民醫(yī)院查體中心，山東 昌邑 261300；4.陸軍第八十集團(tuán)軍醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，山東 濰坊 261041；5.濰坊市人民醫(yī)院病理科，山東 濰坊 261041）

鼻息肉（nasal polyps）屬于上呼吸道慢性炎癥性病變，是耳鼻喉科常見的疾病，主要表現(xiàn)為鼻竇粘膜廣泛性水腫、急慢性炎癥等。臨床癥狀與息肉的位置、大小有關(guān)，較小的息肉可無明顯的癥狀，較大的息肉常伴有鼻塞、頭面部脹痛、流涕、嗅覺減退等。臨床治療以手術(shù)切除為主，但術(shù)后的復(fù)發(fā)率較高[1，2]。其發(fā)病率較高且術(shù)后有較高的復(fù)發(fā)率是臨床治療的難點(diǎn)[3]。鼻息肉的發(fā)病可能有鼻腔慢性炎癥、微環(huán)境的改變及多種炎性因子有關(guān)[4]。尋求新的用于指導(dǎo)預(yù)防和診斷鼻息肉的生物標(biāo)記物對(duì)于鼻息肉的基礎(chǔ)研究和臨床預(yù)防、治療有重要的作用。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）可以與血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)的兩種VEGF受體（VEGF受體1和VEGF受體2）相結(jié)合。它是參與血管生成的重要因子[5]。對(duì)于息肉的形成，必須有新生血管提供充足的血液和氧供[6]。研究報(bào)道[7-10]，VEGF在慢性炎癥、息肉、腫瘤的形成過程至關(guān)重要。IL-5由活化亞細(xì)胞群Th2產(chǎn)生，主要介導(dǎo)體液免疫，是參與維持體內(nèi)免疫平衡的重要細(xì)胞因子[11]。IL-5對(duì)B細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞增殖、分化有重要調(diào)節(jié)作用。趨化人嗜酸性粒細(xì)胞，延長(zhǎng)成熟嗜酸性粒細(xì)胞的存活時(shí)間[12]。IL-6可以由淋巴樣和某些非淋巴樣細(xì)胞產(chǎn)生，過量的IL-6會(huì)刺激相關(guān)細(xì)胞，產(chǎn)生VEGF[13]。IL-6與多種疾病的發(fā)生具有明顯關(guān)系，IL-6表達(dá)失調(diào)可引起許多疾病或?qū)е录膊夯?，如自身免疫病、炎癥、腫瘤等[14-16]。VEGF在鼻息肉、變應(yīng)性鼻炎中異常表達(dá)有過相關(guān)報(bào)道[17，18]，說明VEGF與鼻息肉的發(fā)展有一定關(guān)聯(lián)。但VEGF聯(lián)合IL-5、IL-6檢測(cè)在鼻息肉中的報(bào)道甚少，為此，本研究擬分析鼻息肉患者息肉組織中VEGF表達(dá)情況及血清中IL-5、IL-6表達(dá)水平的變化，進(jìn)一步探討VEGF、IL-5、IL-6在鼻息肉形成過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月-2021年12月在昌邑市人民醫(yī)院耳鼻喉科就診并做活檢和/或鼻息肉切除的患者60例，其中鼻息肉者33例作為觀察組；相對(duì)正常粘膜人群27例作為對(duì)照組。兩組性別、年齡、血壓比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），有可比性，見表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者經(jīng)病理活檢確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：①進(jìn)入研究前1個(gè)月內(nèi)使用過全身或者吸入性糖皮質(zhì)激素治療者；②合并高血壓、糖尿病、家族遺傳性疾病；③合并其他免疫系統(tǒng)疾病；④合并其他良惡性腫瘤。本課題經(jīng)過昌邑市人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過，所有納入研究者均知情同意并簽署知情同意書。

表1 兩組一般資料比較（n，）

表1 兩組一般資料比較（n，）

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 組織標(biāo)本采集：經(jīng)手術(shù)切除的鼻息肉及活檢鼻粘膜標(biāo)本放入10%的中性福爾馬林固定12 h。取材后經(jīng)梯度酒精脫水、二甲苯透明行常規(guī)HE染色。血液標(biāo)本采集：分別抽取兩組清晨空腹靜脈血5 ml，放入非抗凝試管，3000 r/min離心10 min后，留血清并標(biāo)記，放入-80℃冰箱。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色及結(jié)果判讀 VEGF兔抗人單克隆抗體（工作液濃度1∶200），購買自武漢三鷹生物科技有限公司。3～4 μm切片，免疫組織化學(xué)方法采用SP法，滴加DAB顯色液觀察顯色。試劑盒購買自北京中杉金橋生物科技有限公司。對(duì)粘膜上皮及血管內(nèi)皮VEGF的染色進(jìn)行判讀。染色陽性的細(xì)胞面積＜5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%，分別計(jì)分0、1、2、3、4分。著色強(qiáng)度標(biāo)記為-、+、++、+++，分別計(jì)分0、1、2、3分。將染色陽性的細(xì)胞面積分?jǐn)?shù)和著色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)相乘，＜6分判讀為低表達(dá)，≥6分判讀為高表達(dá)。

1.2.3 血清IL-5、IL-6的表達(dá)檢測(cè)及結(jié)果判讀 由冰箱內(nèi)取出存放的血清，放在冰上解凍，4℃離心機(jī)離心15 min，2000 r/min，取上清液，按照試劑盒說明書使用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測(cè)。試劑盒購買于武漢賽培生物科技有限公司。使用美國全自動(dòng)酶聯(lián)檢測(cè)儀讀取OD值，將所得OD值參照試劑標(biāo)準(zhǔn)曲線和標(biāo)準(zhǔn)公式計(jì)算數(shù)值所對(duì)的樣品濃度。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較兩組鼻粘膜組織中VEGF及血清IL-5、IL-6表達(dá)水平；②根據(jù)組織VEGF、血清IL-5、IL-6表達(dá)水平和常用臨床指標(biāo)將觀察組分為VEGF低表達(dá)組，VEGF高表達(dá)組；≤40歲，＞40歲；男性，女性；血清IL-5低表達(dá)組（≤55 pg/ml），IL-5高表達(dá)組（＞55 pg/ml）；IL-6低表達(dá)組（≤50 pg/ml），IL-6高表達(dá)組（＞50 pg/ml）；根據(jù)病理類型分組，分為水腫型鼻息肉，腺體增生型鼻息肉。分析VEGF、IL-5、IL-6與臨床病理參數(shù)（年齡、性別、病理分型等）的關(guān)系；③分析VEGF與IL-5、IL-6的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（）表示，行t檢驗(yàn)；VEGF與IL-5、IL-6的關(guān)系使用Pearson相關(guān)性分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組VEGF、IL-5、IL-6表達(dá)水平比較 觀察組鼻息肉組織中上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF和血清IL-5、IL-6的表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組VEGF、IL-5、IL-6表達(dá)水平比較[n（%），]

表2 兩組VEGF、IL-5、IL-6表達(dá)水平比較[n（%），]

2.2 觀察組血清VEGF、IL-5、IL-6表達(dá)與病理參數(shù)的關(guān)系 觀察組血清VEGF、IL-5、IL-6表達(dá)水平與年齡、病理組織分型、性別均無關(guān)（P＞0.05），見表3。

表3 觀察組血清VEGF、IL-5、IL-6表達(dá)與病理參數(shù)的關(guān)系（n）

2.3 觀察組血清VEGF與IL-5、IL-6表達(dá)的關(guān)系 觀察組鼻息肉組織中VEGF表達(dá)水平與血清IL-5（r=0.351，P=0.022）、IL-6（r=0.380，P=0.015）均呈正相關(guān)，見表4。

表4 觀察組血清VEGF與IL-5、IL-6表達(dá)的關(guān)系（n）

3 討論

鼻息肉是贅生于鼻腔或鼻竇黏膜上的良性病變，患者以鼻塞或鼻分泌物增多為常見表現(xiàn)，伴面部疼痛或腫脹感，嗅覺減退或喪失。鼻息肉為鼻部常見病，好發(fā)于成年人。研究發(fā)現(xiàn)[1，2]，鼻息肉與變態(tài)反應(yīng)、炎癥因子、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)等有關(guān)。小的鼻息肉可以用藥物治療，大的息肉需要手術(shù)治療，但手術(shù)切除后易復(fù)發(fā)，其臨床癥狀和術(shù)后易復(fù)發(fā)性影響鼻息肉患者的生活質(zhì)量[3]。

VEGF定位于染色體6p21.3，主要促進(jìn)血管生成[17]。組織的生長(zhǎng)必須依靠新生血管生成來提供足夠的氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來維持。VEGF在腫瘤組織中表達(dá)水平增高，提示預(yù)后不良。前期研究證實(shí)[17，18]，VEGF在鼻息肉組織中出現(xiàn)表達(dá)增多的現(xiàn)象。本研究結(jié)果也提示VEGF在鼻息肉患者組織中的表達(dá)高于對(duì)照組，說明VEGF的參與了鼻息肉的形成。

鼻息肉是常見的鼻部慢性炎癥反應(yīng)性疾病，其病因復(fù)雜，一般認(rèn)為，鼻息肉是鼻粘膜發(fā)生炎癥后，結(jié)締組織的反應(yīng)性生長(zhǎng)，促進(jìn)其生長(zhǎng)的因素有細(xì)胞因子的作用、變態(tài)反應(yīng)和嗜酸性粒細(xì)胞的聚集[4]。IL-5對(duì)B細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞增殖、分化有重要調(diào)節(jié)作用，可趨化人嗜酸性粒細(xì)胞，延長(zhǎng)成熟嗜酸性粒細(xì)胞的存活時(shí)間[12]。過量的IL-6會(huì)刺激相關(guān)細(xì)胞，產(chǎn)生VEGF，進(jìn)一步促進(jìn)血管的形成[13]。前期研究報(bào)道IL-5、IL-6在鼻息肉、鼻竇炎等疾病中出現(xiàn)異常的表達(dá)[19-22]。本研究進(jìn)一步探討了鼻息肉組織中VEGF及血清IL-5、IL-6的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)在鼻息肉組織中VEGF與患者血清中IL-5、IL-6的表達(dá)高于對(duì)照組，說明VEGF、IL-5、IL-6的異常表達(dá)也參與了鼻息肉的形成。

本研究發(fā)現(xiàn)，VEGF、IL-5、IL-6的異常表達(dá)在鼻息肉患者中與息肉組織類型、年齡、性別均無關(guān)，VEGF的高表達(dá)與IL-5、IL-6的表達(dá)變化有關(guān)，并且VEGF的表達(dá)與IL-5、IL-6均呈正相關(guān)。說明VEGF與細(xì)胞因子免疫平衡紊亂有關(guān)，并且與IL-5、IL-6起一定的協(xié)同作用。但是VEGF的異常表達(dá)影響Th1、Th2介導(dǎo)的免疫平衡，Th1、Th2介導(dǎo)的免疫平衡影響VEGF的表達(dá)，這還需要在今后的研究中繼續(xù)探索。

綜上所述，鼻息肉組織中VEGF及患者血清IL-5、IL-6的表達(dá)升高，VEGF的表達(dá)分別與IL-5、IL-6呈正相關(guān)。VEGF、IL-5、IL-6參與了鼻息肉的形成和發(fā)生發(fā)展。