◎ 肖 偉 ，符秋玉

（1.湖南中益食品化工檢測院， 湖南 益陽 413000；2.湖南口味王實業(yè)有限公司，湖南 益陽 413000）

本研究依據(jù)GB/T 5009.176—2003 標準要求及GB/T 32465—2015《化學分析方法驗證確認和內(nèi)部質(zhì)量控制要求》，旨在驗證該分析方法的系統(tǒng)適用性、標準曲線線性、精密度、回收率、檢出限和定量限。可接受的參考標準如下：①系統(tǒng)適用性，各組分之間分離度不低于1.5，溶劑無干擾。②線性R2≥0.995。③加標回收率在80%～110%內(nèi)。④精密度，在重復性條件下獲得的2 次獨立測定結果的絕對差值≤算術平均值×10%或RSD ≤10%。⑤定量限與檢測限LOD ≤0.016 mg/kg，LOQ ≤0.092 mg/kg。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

儀器：Agilent 氣相色譜儀（CN1933A029， 配ECD 檢測器）；OHAUS 電子天平（AR224CN）。標準品信息：正己烷中三氯殺螨醇（100 μg/mL，批號A1905311）；苯；石油醚：沸程30～60 ℃；丙酮、硫酸、無水硫酸鈉，以上試劑均為分析純。

1.2 原理

試樣中的三氯殺螨醇經(jīng)提取，其提取液與標準系列同時用酸凈化后，用配有電子捕獲檢測器的氣相色譜儀測定，根據(jù)色譜峰的保留時間定性，與標準比較定量[4]。

1.3 試驗方法

1.3.1 氣相色譜條件

毛細管柱Agilent HP-5，30 m×0.32 mm（內(nèi)徑）0.25 μm；柱溫240 ℃；進樣口溫度280 ℃；檢測器溫度300 ℃；流速1.0 mL/min；分流比10 ∶1；進樣量1.0 μL。

1.3.2 標準溶液配置

三氯殺螨醇標準使用液：量取正己烷中三氯殺螨醇溶液（100 μg/mL）標準溶液1.0 mL 至20 mL 容量瓶中，以石油醚稀釋至刻度，濃度為5.0 μg/mL。再按照上述標準使用液用石油醚稀釋成0.05～1.0 μg/mL的系列溶液，配制三氯殺螨醇標準系列0.05、0.10、0.20、0.50、1.0 μg/mL 分別各取5 mL，加0.5 mL 濃硫酸酸化，振搖1 min，于1 600 r/min 離心15 min，用吸管把上清液分別移入進樣瓶中，供氣相色譜法測定。

1.3.3 樣品檢測

①預處理：取具有代表性的茶葉試樣100 g，粉碎后混勻稱取約5 g 的試樣（精確至0.01 g），置于125 mL具塞錐形瓶中，加20 mL 石油醚，于超聲波清洗器上振蕩30 min，濾入50 mL 具有刻度比色管中，以15 mL 石油醚分3 次洗滌殘渣，洗液并入比色管中，將石油醚濃縮，最后以石油醚定容至10.0 mL。②凈化：吸取試樣提取液5.0 mL 至10 mL 離心管中，加0.5 mL 濃硫酸，蓋上蓋子。振搖數(shù)次后，打開蓋子放氣，然后振搖1 min，于1 600 r/min 離心15 min，用吸管把上清液分別移入干凈具塞試管中(油試樣需將上清液濃縮至1.00 mL）。③測定：取上述標準系列溶液及樣品濃縮待測液，根據(jù)預先設定的方法及標準曲線，依據(jù)GB/T 5009.176—2003，采用ECD 檢測器進行GC 測定[5]。

2 試驗結果與討論

2.1 系統(tǒng)適用性

選取空白試驗（按照樣品處理流程處理，不稱樣）及標準溶液進樣，以保留時間定性、峰面積定量，通過色譜圖分析計算。其中，空白試驗應無干擾，三氯殺螨醇的理論塔板數(shù)應＞8 000，結果見表1。

表1 三氯殺螨醇GC-ECD 專屬性試驗結果表

結果表明，空白試驗對待測組分沒有干擾，單組分分離度不要求，三氯殺螨醇的理論塔板數(shù)符合要求。

2.2 標準曲線線性

移取1.3.2 標準系列溶液分別自動進樣測定，記錄三氯殺螨醇色譜峰面積，以峰面積為縱坐標，以標準溶液的濃度為橫坐標，外標法峰面積定量繪制標準曲線，結果見表2。

表2 三氯殺螨醇GC-ECD 標準曲線線性結果表

結果表明，三氯殺螨醇回歸方程：Y=1 134.336 8X+44.468 2，R2=0.996 2；三氯殺螨醇在0.05～1.0 μg/mL 范圍內(nèi)，呈良好的線性關系。

2.3 精密度試驗

對本試驗室采用空白基底樣品加標做待測樣的方式測定以確定精密度，取同一批號樣品，稱取7 份，每份加入相同體積的標液進行提取測定，測得含量見表3。

表3 三氯殺螨醇GC-ECD 精密度試驗結果表

以上數(shù)據(jù)表明，該條件下待測樣品的測量精密度符合要求。

2.4 加標回收試驗

采用標準回收的試驗來確定方法的回收率。準備8 個50 mL 離心管，編號1-12，其中，1-2 號不加標；3-4 號加各標準使用液0.18 mL；5-6 號加標準使用液0.60 mL；7-8 號加各標準使用液1.2 mL。照樣品處理制備并測定，計算回收率，結果見表4。

表4 三氯殺螨醇GC-ECD 回收率結果表

以上數(shù)據(jù)表明， 待測加標樣品回收率為82.7%～97.3%，符合要求。

2.5 檢出限

方法檢出限: 即某方法可檢測的最小濃度，通常用外推法可以求得。本試驗依據(jù)GB/T 27417—2017《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》，采用信噪比法評估LOD。一般來說，利用已知低濃度的分析物樣品與空白樣品的測量信號進行比較，確定可檢出的最小濃度，典型的可接受的信噪比是2 ∶1或3 ∶1，即檢出限（LOD）：S/N=3±1，定量限（LOQ）：S/N=10±1。在本試驗中，依次稀釋標準溶液，采用信噪比法來測定儀器的檢出限。吸取三氯殺螨醇標準使用液0.10 mL 到25 mL 作為檢出限待測液1；吸取三氯殺螨醇標準使用液0.03 mL 到25 mL，作為檢出限待測液2；吸取三氯殺螨醇標準使用液0.125 mL到25 mL 作為定量限待測液。經(jīng)測量，結果見表5。

表5 三氯殺螨醇GC-ECD 檢出限和定量限表

由以上數(shù)據(jù)分析可知，方法檢出限：當稱樣量為5 g，稀釋體積為10.0 mL，檢出限為0.012 mg/kg，定量限為0.05 mg/kg，符合標準要求。

3 結語

綜上所述，本試驗室依照GB/T 5009.176—2003，進行系統(tǒng)適用性、線性、精密度、回收率、檢出限和定量限驗證分析，由各指標結果可知，各項驗證指標均符合GB/T 32465—2015《化學分析方法驗證確認和內(nèi)部質(zhì)量控制要求》及GB/T 27417—2017 《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》的要求，表明本試驗室具備按照該標準檢測茶葉中三氯殺螨醇殘留量的能力。