李廣志 趙 蒙

作者單位：450000 河南省鄭州頤和醫(yī)院

肺癌是常見的肺部惡性腫瘤,其發(fā)生機制較為復(fù)雜,與患者吸煙、環(huán)境污染、化學(xué)輻射等因素存在明顯關(guān)聯(lián)性,該病對人體的危害性較高,癌組織能夠在肺內(nèi)迅速生長,并導(dǎo)致患者肺功能出現(xiàn)降低,進(jìn)而引發(fā)一系列肺內(nèi)癥狀[1]。非小細(xì)胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)其中的一種類型,約占所有肺癌的80%,進(jìn)展到晚期時,常造成患者支氣管阻塞,對肺功能和呼吸功能造成不良影響,此外,還有可能引發(fā)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(LNM),不利于后期治療,因此,及早確診疾病并采取治療方案有利于提升患者生存質(zhì)量[2-3]。細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)是一種調(diào)控因子,與NSCLC的化療敏感性有關(guān),可促進(jìn)細(xì)胞生長繁殖,該基因出現(xiàn)突變或陽性表達(dá)的時候會改變細(xì)胞周期進(jìn)程,可能會造成細(xì)胞過度繁殖而出現(xiàn)惡性化[4]。p27是一種熱穩(wěn)定蛋白,能夠抑制多種周期蛋白活性,對腫瘤細(xì)胞的形成和增殖起到明顯抑制作用,參與腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程。本研究針對我院92例采用手術(shù)治療的NSCLC患者,探討CyclinD1、p27在NSCLC中的表達(dá)及與臨床病理特征和術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究回顧性分析我院2016年7月至2020年6月收治的92例NSCLC患者,其中在性別分配上,男性、女性分別為58例、34例;年齡42～78(59.68±2.46)歲;鱗癌、腺癌分別為51例、41例;病灶直徑3～11(6.48±0.32)cm;術(shù)后復(fù)發(fā)57例、未復(fù)發(fā)35例。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)

(1)納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)病理檢查及CT等影像學(xué)檢查確診為NSCLC;②均接受手術(shù)切除治療;③無心理障礙及精神疾病。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):①隨訪期間出現(xiàn)死亡者;②患者術(shù)前接受過放化療治療;③伴有其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者;④存在手術(shù)禁忌證者。

1.3 方法

采用免疫組織化學(xué)SP法對CyclinD1、p27進(jìn)行檢測,選取患者癌組織及距此2 cm以上的癌旁組織石蠟標(biāo)本,切4 μm左右的厚度。依次采用鼠抗人CyclinD1、p27單克隆抗體、兔抗鼠CyclinD1、p27多克隆抗體對切片進(jìn)行處理。試劑盒均由成都超九八生物科技有限公司提供。組織切片均使用經(jīng)微波修復(fù)的抗原,嚴(yán)格依照試劑盒說明書實施操作,使用二氨基聯(lián)苯胺(DAB)溶液進(jìn)行顯色,使用蘇木精實施復(fù)染。將PBS代替一抗的標(biāo)本作為陰性對照,陽性片為陽性對照。由2名病理科醫(yī)師將標(biāo)本放于光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察,對染色范圍及強度進(jìn)行觀察記錄,并采用10個高倍鏡視野按照盲法對蛋白表達(dá)情況進(jìn)行評價。

1.4 評價標(biāo)準(zhǔn)

染色強度:無色、淡黃色、黃色、棕褐色分別記為0分、1分、2分、3分。染色范圍:1分:染色細(xì)胞占比為1%～25%;2分:染色細(xì)胞占比為26%～50%;3分:染色細(xì)胞占比51%～75%;4分:染色細(xì)胞占比為>75%。將染色強度和染色細(xì)胞占比分?jǐn)?shù)加起來,0～1分為陰性表達(dá),≥2分為陽性表達(dá)。

1.5 觀察指標(biāo)

(1)CyclinD1、p27在NSCLC患者不同組織中的陽性率。(2)CyclinD1與NSCLC臨床病理特征關(guān)系。(3)p27與NSCLC臨床病理特征關(guān)系。(4)CyclinD1、p27在復(fù)發(fā)和未復(fù)發(fā)NSCLC患者癌組織中的陽性率。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析,計數(shù)資料以(%)表示,組間比較行χ2檢驗,以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CyclinD1、p27在不同組織中的陽性情況表達(dá)

NSCLC癌組織中CyclinD1陽性率較癌旁組織高,p27陽性率較癌旁組織低(P<0.05),見表1。

表1 CyclinD1、p27在不同組織中的陽性率(例,%)

2.2 CyclinD1與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系

低分化、Ⅲ期、有LNM的NSCLC患者CyclinD1陽性率較中高分化、Ⅰ～Ⅱ期、無LNM高(P<0.05),見表2。

表2 CyclinD1與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系(例,%)

2.3 p27表達(dá)與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系

中高分化、Ⅰ～Ⅱ期、無LNM的NSCLC患者p27陽性率較低分化、Ⅲ期、有LNM高(P<0.05),見表3。

表3 p27與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系(例,%)

2.4 CyclinD1、p27在復(fù)發(fā)和未復(fù)發(fā)NSCLC癌組織中的陽性情況

復(fù)發(fā)NSCLC患者癌組織中CyclinD1陽性率(89.47%)較未復(fù)發(fā)患者高,p27陽性率較未復(fù)發(fā)患者低(P<0.05)。見表4。

表4 CyclinD1、p27在復(fù)發(fā)和未復(fù)發(fā)NSCLC癌組織中的陽性情況(例,%)

3 討論

NSCLC是肺癌的一種類型,主要起源于腺體或支氣管粘膜,具有一定的家族聚集性和遺傳感染性,主要由環(huán)境、輻射、吸煙、飲食習(xí)慣、慢性感染病等多種因素共同作用引發(fā)[5-7]。早期患者癥狀較輕且無特異性,主要表現(xiàn)為胸悶、脹痛、咳嗽等癥狀,常被誤認(rèn)為是肺結(jié)核、肺部炎癥等其他呼吸系統(tǒng)疾病。隨病情進(jìn)展,患者體內(nèi)的癌細(xì)胞會進(jìn)一步增殖,導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控機制產(chǎn)生異常,嚴(yán)重影響患者健康。NSCLC發(fā)病率和死亡率逐年增加,探索NSCLC的發(fā)生發(fā)展機制、及時了解影響NSCLC預(yù)后的相關(guān)因素,有利于診斷疾病,為后期治療和改善預(yù)后提供依據(jù)[8-10]。

本研究結(jié)果顯示,NSCLC患者癌組織中CyclinD1陽性率72.83%較癌旁組織23.91%高,p27陽性率16.30%較癌旁組織60.87%低(P<0.05),可見CyclinD1、p27的表達(dá)與NSCLC的發(fā)生存在關(guān)聯(lián)性。CyclinD1可以對細(xì)胞分化程度進(jìn)行調(diào)節(jié),參與多種惡性腫瘤的進(jìn)展,CyclinD1陽性率高會導(dǎo)致NSCLC等腫瘤細(xì)胞持續(xù)性增殖和擴(kuò)散,加強惡性腫瘤細(xì)胞活性[11-12]。p27是一種抑癌基因,對細(xì)胞的增殖具有調(diào)控作用,可抑制惡性腫瘤細(xì)胞的生長,并能對CyclinD1表達(dá)產(chǎn)生抑制作用,在多種惡性腫瘤中存在低表達(dá)情況[13-14]。經(jīng)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),低分化、疾病分期為Ⅲ期、有LNM的NSCLC患者CyclinD1陽性率96.00%、93.88%、79.49%較中高分化64.18%、疾病分期為Ⅰ～Ⅱ期48.84%、無LNM52.83%高;中高分化、疾病分期為Ⅰ～Ⅱ期、無LNM的NSCLC患者p27陽性率20.90%、30.23%、24.53%較低分化0.00%、疾病分期為Ⅲ期4.08%、有LNM5.13%高(P<0.05),提示CyclinD1、p27與NSCLC分化程度、疾病分期等臨床病理特征存在明顯關(guān)聯(lián)性。CyclinD1能夠激活CDKs并催化多種關(guān)鍵底物,在正常組織中基本不表達(dá)或呈現(xiàn)弱表達(dá),該蛋白過度表達(dá)會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)基因調(diào)控異常,從而造成NSCLC癌細(xì)胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。而腫瘤細(xì)胞增殖活性越高,癌細(xì)胞分化程度越低,在實行手術(shù)治療后存在殘端惡化的風(fēng)險越大,不利于患者預(yù)后。p27能夠負(fù)性調(diào)控細(xì)胞周期,其過低表達(dá)會降低腫瘤細(xì)胞的抑制能力,造成腫瘤細(xì)胞不斷增殖,增強腫瘤惡性程度。研究數(shù)據(jù)顯示,復(fù)發(fā)NSCLC患者癌組織中CyclinD1陽性率89.47%較未復(fù)發(fā)患者45.71%高,p27陽性率5.26%較未復(fù)發(fā)患者34.29%低(P<0.05),充分佐證CyclinD1、p27表達(dá)與NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)存在明顯關(guān)聯(lián)性。這一結(jié)果與閆曉紅等[15]研究結(jié)果一致。CyclinD1高表達(dá)、p27低表達(dá)均會促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖,促進(jìn)疾病進(jìn)展,加大術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險。

綜上所述,CyclinD1在NSCLC中的陽性率高,p27在NSCLC中的陽性率低,且二者與NSCLC分化程度、疾病分期等臨床病理特征和術(shù)后復(fù)發(fā)存在明顯關(guān)聯(lián)性,臨床可將CyclinD1、p27指標(biāo)作為評估NSCLC進(jìn)展和預(yù)后的重要指標(biāo)進(jìn)行檢測,為臨床治療提供參考。