簡(jiǎn)玲玲 田莉萍 牛 銳

作者單位：450000 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院

口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是指發(fā)生在口腔的惡性腫瘤,以鱗狀細(xì)胞為主,惡性程度高,存在較強(qiáng)侵襲及轉(zhuǎn)移能力,整體預(yù)后差,嚴(yán)重威脅患者生命健康。研究發(fā)現(xiàn),腫瘤的發(fā)生、發(fā)展不僅與細(xì)胞增殖速率有關(guān),還受細(xì)胞凋亡影響[1]。細(xì)胞凋亡是指受基因控制的細(xì)胞自主性死亡。機(jī)體產(chǎn)生新生細(xì)胞的同時(shí),突變和衰老細(xì)胞將被清除,細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定及正常組織形態(tài)取決于細(xì)胞增殖和凋亡的平衡,一旦平衡被打破,細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化及基因突變的積聚,將誘發(fā)腫瘤發(fā)生,凋亡抑制則是導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵因素[2-3]。而細(xì)胞凋亡受基因調(diào)控,其中Bax、Bcl-2、P53基因被證實(shí)與鱗狀細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展有關(guān),故通過明確該類基因在OSCC中的表達(dá)及與臨床病理特征間的關(guān)系,則能夠幫助臨床良好評(píng)估病情進(jìn)展程度及預(yù)測(cè)預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)。本研究對(duì)上述基因表達(dá)與病理特征之間的關(guān)系進(jìn)行研究,有助于為臨床治療OSCC提供新思路?，F(xiàn)總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年10月至2021年10月于我院就診的88例OSCC患者臨床資料,其中49例男性,39例女性;年齡60～82歲,平均年齡(71.02±4.33)歲;體質(zhì)量指數(shù)(BMI) 19～29 kg/m2,平均BMI(23.71±1.15)kg/m2;病理分級(jí):38例Ⅰ級(jí),32例Ⅱ級(jí),18例Ⅲ級(jí);病理類型:16例口底癌,48例牙齦癌,7例口唇癌,12例舌癌,5例軟腭癌;文化程度:25例初中及以下,51例高中,12例本科及以上;其中11例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,77例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn):①年齡≥60歲;②經(jīng)術(shù)后病理檢查確診為OSCC;③意識(shí)清楚,可配合完成本研究;④患者或家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他惡性腫瘤者;②存在重要臟器功能障礙者;③存有精神疾病者。

1.2 方法

所有患者均行手術(shù)治療,術(shù)后取代表性病變組織塊送檢,連續(xù)切片數(shù)張,切片厚4 μm,采用免疫組織化學(xué)染色(LSAB)法對(duì)Bax、Bcl-2、P53進(jìn)行染色,單抗工作濃度為1∶40,Bax、Bcl-2單抗隆抗體購自Santa Cruz Biotechnology公司,P53(DO-1)購自DAKO公司,LSAB購自Vector公司。取口腔鱗狀細(xì)胞組織、口腔鱗狀細(xì)胞組織及涎腺腺樣囊性癌組織作為陽性對(duì)照,磷酸鹽緩沖液(Phosphate buffer solution,PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判定:棕黃色顆粒出現(xiàn)在細(xì)胞核中則代表P53為陽性,否則為陰性;棕黃色顆粒出現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)中,呈片狀或巢狀,或呈散在分布,且陽性細(xì)胞數(shù)>3%以上為陽性,否則為陰性。

觀察Bax、Bcl-2、P53陽性表達(dá)情況。分析Bax、Bcl-2、P53陽性表達(dá)與病理特征間關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

88例OSCC患者,經(jīng)檢測(cè)Bcl-2陽性41例,占比46.59%;Bax陽性39例,占比44.32%;P53陽性30例,占比34.09%。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移Bax陽性表達(dá)率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,Bcl-2、P53陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)Bcl-2陽性表達(dá)率低于Ⅲ級(jí),Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)Bax陽性表達(dá)率高于Ⅲ級(jí),Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)P53陽性表達(dá)率高于Ⅰ級(jí),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見表1。

表1 老年OSCC患者Bax、Bcl-2、P53陽性表達(dá)與病理特征關(guān)系(例,%)

3 討論

3.1 OSCC現(xiàn)狀

鱗狀細(xì)胞癌是口腔中最常見的惡性腫瘤,約占80%以上,其屬于多基因疾病,疾病發(fā)生、發(fā)展中受多種基因調(diào)控[4-5]。手術(shù)為該病常用治療方式,通過切除病灶組織雖可阻止腫瘤進(jìn)展,延長(zhǎng)患者生存時(shí)間,但該病惡性程度較高,術(shù)后仍存在一定復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn),導(dǎo)致患者整體預(yù)后一般。隨著近年來對(duì)腫瘤發(fā)生機(jī)制研究的深入,細(xì)胞調(diào)控、抑制相關(guān)基因受到臨床高度重視,期望通過這些基因表達(dá)來預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展及預(yù)后,從而指導(dǎo)臨床治療,最大程度延長(zhǎng)患者生存時(shí)間。

3.2 Bcl-2、Bax、P53在惡性腫瘤中的意義

腫瘤的發(fā)生發(fā)展取決于細(xì)胞凋亡相對(duì)比率和細(xì)胞增殖速率,其中細(xì)胞凋亡受多基因調(diào)控,是一個(gè)復(fù)雜的過程,而Bcl-2、Bax、P53是重要調(diào)控基因。Bcl-2是Bcl基因家族重要成員之一,是一種抗細(xì)胞凋亡的調(diào)控因子,其可抑制細(xì)胞的程序性細(xì)胞死亡,而不影響細(xì)胞增殖,被稱為調(diào)控細(xì)胞死亡的“存活基因”[6]。Bcl-2在胚胎組織中廣泛表達(dá),但在成熟組織細(xì)胞中表達(dá)顯著降低。Bcl-2蛋白可嵌入細(xì)胞膜中,固定于膜上,且具有?？康鞍缀碗x子通道雙重作用。一般認(rèn)為在腫瘤形成過程中,Bcl-2僅會(huì)抑制細(xì)胞凋亡,而不會(huì)促使細(xì)胞增殖,故導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖動(dòng)態(tài)平衡被打破,進(jìn)而導(dǎo)致癌變。Bax為Bcl-2同源類似物,是一種凋亡促進(jìn)基因,是由192個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì),可結(jié)合Bcl-2形成異二聚體形式[7]。Bax在結(jié)構(gòu)上雖然與Bcl-2相似,但其功能則與Bcl-2相反,可促使細(xì)胞凋亡,在高分化腫瘤細(xì)胞中,宿主可通過Bax基因過度表達(dá)而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[8-9]。P53是一種腫瘤抑制基因,參與細(xì)胞周期調(diào)控,對(duì)于維持細(xì)胞穩(wěn)定、防止基因突變具有積極的作用,能夠預(yù)防腫瘤形成。P53基因有突變型和野生型兩種,前者能夠促進(jìn)細(xì)胞癌變,降低Bcl-2表達(dá),屬Bcl-2的調(diào)控因子,后者可抑制細(xì)胞異常增殖,在細(xì)胞發(fā)生DNA損傷時(shí)可將細(xì)胞停滯于G1/S期,為DNA損傷修復(fù)爭(zhēng)取足夠的時(shí)間,促進(jìn)細(xì)胞恢復(fù),若DNA損傷無法正常修復(fù),則其可啟動(dòng)細(xì)胞凋亡機(jī)制。野生型P53蛋白半衰期只有20 min左右,但其發(fā)生突變后結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定,半衰期可達(dá)2～12 h,臨床易檢出。大量研究證實(shí),P53蛋白在健康人體組織中不表達(dá),在異常增生上皮組織的基底細(xì)胞中呈弱表達(dá),在OSCC細(xì)胞組織中呈強(qiáng)陽性表達(dá)[10]。

3.3 Bcl-2、Bax、P53與OSCC病理特征間關(guān)系

本研究結(jié)果顯示,Bcl-2陽性41例,占比46.59%,Bax陽性39例,占比44.32%,P53陽性30例,占比34.09%。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移Bax陽性表達(dá)率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,Bcl-2、P53陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)Bax陽性表達(dá)率高于Ⅲ級(jí),Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)Bcl-2陽性表達(dá)率低于Ⅲ級(jí),Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)P53陽性表達(dá)率高于Ⅰ級(jí),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),說明老年OSCC組織細(xì)胞Bcl-2、Bax、P53基因表達(dá)與病理特征密切相關(guān)。有研究顯示,Bcl-2表達(dá)與OSCC分化程度呈正相關(guān),且無淋巴轉(zhuǎn)移患者Bcl-2表達(dá)水平較高[11]。相關(guān)資料顯示,老年OSCC患者中Bax陽性率為53.2%[12]。有報(bào)道稱,在多種腫瘤細(xì)胞中可檢測(cè)出P53過度表達(dá),且癌組織分化程度越低,P53表達(dá)強(qiáng)度越低[13]。以上相關(guān)研究均與本研究結(jié)果具有一致性,由此可見Bcl-2、Bax、P53在OSCC發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后評(píng)估中發(fā)揮著重要的作用。然而本研究納入樣本量較少,后期應(yīng)增加樣本量納入,以進(jìn)一步研究其臨床價(jià)值。

綜上所述,老年OSCC組織細(xì)胞Bcl-2、Bax、P53基因蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)密切相關(guān),臨床可通過檢測(cè)上述基因以評(píng)估疾病進(jìn)展情況。