徐 瑞，張 曉，劉文霞

(南陽市第一人民醫(yī)院兒三科,河南 南陽 473000)

原發(fā)性腎病綜合征(primary nephrotic syndrome,PNS)是常見的慢性腎臟病之一,好發(fā)于兒童。據(jù)我國統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,在所有住院泌尿系統(tǒng)疾病患者中,PNS患者占25%[1-2]。有研究發(fā)現(xiàn),85%以上的PNS兒童以微小病變?yōu)橹饕±砀淖?因此,用糖皮質(zhì)激素治療PNS具有一定療效,但約有50%的患兒在經(jīng)過激素治療后,會(huì)由PNS發(fā)展為頻繁復(fù)發(fā)性腎病綜合征(frequently relapsing nephrotic syndrome,FRNS)[3-4]。目前,腎病綜合征易導(dǎo)致患兒出現(xiàn)多種并發(fā)癥,包括感染、血栓栓塞、急性腎損傷等,對患兒的身心健康造成嚴(yán)重的威脅。研究發(fā)現(xiàn),脂質(zhì)代謝異常、炎癥反應(yīng)、免疫功能紊亂等是引起腎病綜合征發(fā)病的主要原因[5],但其具體發(fā)病機(jī)制尚不明確。目前,臨床上多使用糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑治療腎病綜合征,但其毒副作用較大,部分患者極易產(chǎn)生激素依賴和抵抗,導(dǎo)致治療效果較差[6]。因此,尋找新的、高效的治療藥物是目前臨床治療腎病綜合征亟需解決的難題。黃芪是一種益氣補(bǔ)血中藥,黃芪顆粒是以黃芪為主藥,經(jīng)現(xiàn)代技術(shù)制備而成的中藥制劑[7]。研究發(fā)現(xiàn),黃芪因具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、保肝、抗衰老、降壓等多種生理學(xué)功效,被廣泛應(yīng)用于臨床[8];但目前關(guān)于黃芪在腎病綜合征中的作用機(jī)制報(bào)道較少。近年來微RNA(microRNA,miRNA)在腎臟疾病中的作用被學(xué)者們發(fā)現(xiàn),并進(jìn)行了廣泛的研究。有研究發(fā)現(xiàn),miRNA可維持足細(xì)胞分化、足突功能和腎小球?yàn)V過屏障的完整性,還可破壞基因網(wǎng)絡(luò),進(jìn)而導(dǎo)致進(jìn)行性蛋白尿腎小球硬化發(fā)生[9]。有研究證實(shí),正常小鼠腎臟足細(xì)胞和集合管上皮細(xì)胞中均存在miR-30a-5p的表達(dá),抑制小鼠腎臟中miR-30a-5p的表達(dá),異常的腎小球得到明顯改善[10]。但目前關(guān)于miR-30a治療腎病綜合征的機(jī)制鮮有報(bào)道。近年來,我國中西醫(yī)結(jié)合治療腎病綜合征得到學(xué)者們的廣泛關(guān)注,其不僅可改善患者臨床癥狀,還能預(yù)防術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生[11]。因此,本研究采用黃芪顆粒聯(lián)合miR-30a來治療PNS小鼠,并觀察其對小鼠腎組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白、有絲分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)蛋白和血清炎癥因子水平的影響,探討黃芪顆粒聯(lián)合miR-30a治療PNS的效果及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

無特定病原級8周齡雄性小鼠50只,體質(zhì)量18～20 g,購自深圳市益諾思生物醫(yī)藥安全評價(jià)研究院有限公司,許可證號為SYXK(粵)2021-0271。小鼠統(tǒng)一飼養(yǎng)于室溫20～24 ℃、相對濕度60%的動(dòng)物房內(nèi),12 h明暗光源交替。適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2 試劑與儀器

黃芪顆粒購自四川百利藥業(yè)有限責(zé)任公司(國藥準(zhǔn)字Z20003380),miR-30a拮抗劑(miR-30a antagomir)購自蘇州吉瑪基因股份有限公司,兔抗p38 MAPK、p-p38 MAPK、磷酸化線粒體外活化蛋白激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、線粒體外活化蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)抗體購自美國Cell Signaling Technology公司,白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-8、IL-6和腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司,蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司,雙硫侖/硫氰酸胍蛋白定量試劑盒購自上海碧云天生物技術(shù)研究所。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物分組及模型制備

將50只小鼠隨機(jī)分為對照組(n=10)和模型組(n=40)。模型組小鼠經(jīng)尾靜脈注射阿霉素溶液(7.5 mg·kg-1)制備PNS模型,對照組小鼠經(jīng)尾靜脈注射等體積生理鹽水。觀察模型組小鼠給藥后6周的生長情況,并通過動(dòng)態(tài)監(jiān)測24 h尿蛋白及其他生物化學(xué)指標(biāo)來判定模型是否制備成功。共3只小鼠造模失敗,予以補(bǔ)充后將40只小鼠隨機(jī)分為PNS組、 黃芪組、miR-30a組和黃芪+miR-30a組,每組10只。黃芪組小鼠灌胃黃芪顆粒沖劑(20 mg·g-1),每日2次;miR-30a組小鼠經(jīng)尾靜脈注射miR-30a antagomir(10 mg·kg-1),每周1次;黃芪+miR-30a組小鼠灌胃黃芪顆粒沖劑(20 mg·g-1),同時(shí)經(jīng)尾靜脈注射miR-30a antagomir(10 mg·kg-1);模型組和對照組小鼠灌胃與黃芪組等量的生理鹽水,每日1次;各組小鼠干預(yù)4周后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 各組小鼠24 h尿蛋白檢測

于給藥0、2、4周時(shí),將各組小鼠置于代謝籠中,均禁食不禁水,分別收集并記錄各組小鼠24 h尿液,使用生物化學(xué)自動(dòng)檢測儀檢測小鼠24 h 尿蛋白。

1.3.3 各組小鼠血清中生物化學(xué)指標(biāo)和炎癥因子水平檢測

各組小鼠于末次給藥24 h后,腹腔注射體積分?jǐn)?shù)10%水合氯醛麻醉小鼠,抽取各組小鼠腹主動(dòng)脈血10 mL,離心后收集上層血清。使用全自動(dòng)生物化學(xué)分析儀檢測小鼠血清中總膽固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(trigalloyl glycerol,TG)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血肌酐(serum creatinine,Scr)水平;采用ELISA法檢測血清中炎癥因子IL-6、IL-8和TNF-α水平。

1.3.4 HE染色觀察各組小鼠腎組織病理學(xué)變化

取血后處死各組小鼠,取部分腎臟組織置于-80 ℃冰箱保存;剩余腎組織置于多聚甲醛溶液中固定 24 h,然后置于石蠟中,包埋組織后切片(厚度為4 μm),將蘇木精染色液加入到組織切片中,3 min后取出并用伊紅染色,中性樹脂封片,顯微鏡觀察腎組織病理學(xué)變化。

1.3.5 免疫組織化學(xué)法檢測各組小鼠腎組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)分子糖調(diào)節(jié)蛋白-78(glucose-regulated protein-78,GRP-78)和激活轉(zhuǎn)錄因子6(activating transcription factor 6,ATF6)蛋白表達(dá)

取小鼠腎組織石蠟切片,切片移入體積分?jǐn)?shù)0.1% Tritonx-100,室溫孵育30 min,山羊血清封閉30 min,加入11 000 稀釋的兔抗鼠GRP-78和ATF6一抗,37 ℃ 孵育1 h,4 ℃過夜,磷酸鹽緩沖液洗3次,加二抗室溫孵育1 h,親和-生物素復(fù)合物液孵育1 h,3,3-二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine,DAB)染色,裱片、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、樹膠封片。每組選取腎組織切片40張,應(yīng)用Image J軟件分析腎組織中GRP-78和ATF6蛋白的表達(dá)。

1.3.6 Western blot法檢測各組小鼠腎組織中GRP-78、ATF6、p38 MAPK、p-p38 MAPK、p-ERK、ERK蛋白表達(dá)

取凍存的腎組織,于勻漿器中盡量剪碎,加入裂解液于冰上裂解,采用二喹啉甲酸法測定蛋白濃度。 使用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白,濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯膜上,加入脫脂牛奶封閉1 h;加入GRP-78(11 000)、ATF6(11 000)、p38 MAPK(11 000)、p-p38 MAPK(11 000)一抗,4 ℃ 孵育過夜。 加入免疫印跡熒光標(biāo)記山羊抗兔IgG二抗(13 000),37 ℃ 孵育40 min。滴加增強(qiáng)型電化學(xué)發(fā)光顯色液,暗室中曝光、顯影,應(yīng)用化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)進(jìn)行圖像采集,應(yīng)用Image J軟件分析各條帶灰度值,以β-actin為內(nèi)參,以目的蛋白灰度值與內(nèi)參蛋白灰度值比值表示目的蛋白相對表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 5組小鼠24 h尿蛋白比較

給藥0周時(shí),PNS組、黃芪組、miR-30a組和黃芪+miR-30a組小鼠24 h尿蛋白比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。PNS組、黃芪組、miR-30a組和黃芪+miR-30a組小鼠給藥0、2、4周時(shí)的24 h尿蛋白顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。給藥2、4周時(shí),黃芪組、miR-30a組和黃芪+miR-30a組小鼠24 h尿蛋白顯著低于PNS組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);黃芪組與miR-30a組小鼠的24 h尿蛋白比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);黃芪+miR-30a組小鼠24 h尿蛋白顯著低于黃芪組和miR-30a組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表1。

表1 5組小鼠24 h尿蛋白比較Tab.1 Comparison of 24-hour urinary protein of mice among the five groups

2.2 5組小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平比較

PNS組、黃芪組、miR-30a組和黃芪+miR-30a組小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);黃芪組、miR-30a組和黃芪+miR-30a組小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平顯著低于PNS組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);黃芪組與miR-30a組小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);黃芪+miR-30a組小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平顯著低于黃芪組和miR-30a組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表2。

表2 5組小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平比較Tab.2 Comparison of serum TC,TG,BUN and Scr levels of mice among the five groups

2.3 5組小鼠血清中炎癥因子水平比較

PNS組、黃芪組、miR-30a組和黃芪+miR-30a組小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);黃芪組、miR-30a組和黃芪+miR-30a組小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平顯著低于PNS組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);黃芪組與miR-30a組小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);黃芪+miR-30a組小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平顯著低于黃芪組和miR-30a組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表3。

表3 5組小鼠血清中炎癥因子水平比較Tab.3 Comparison of inflammatory factor levels in serum of mice among the five groups

2.4 各組小鼠腎組織病理學(xué)變化比較

對照組小鼠腎小球排列規(guī)則,無明顯炎癥細(xì)胞浸潤;PNS組小鼠腎小球排列不規(guī)則,有大量的炎癥細(xì)胞浸潤到腎間質(zhì);與PNS組相比,黃芪組和miR-30a組小鼠腎組織病理學(xué)變化得到明顯改善,腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤明顯減少;黃芪+miR-30a組小鼠腎間質(zhì)偶見炎癥細(xì)胞,腎組織改善情況明顯好于黃芪組和miR-30a組;見圖1。

圖1 5組小鼠腎組織病理學(xué)形態(tài)(HE染色,×200)Fig.1 Histopathological morphology of renal tissue of mice in the five groups(HE staining,×200)

2.5 5組小鼠腎組織中GRP-78和ATF6蛋白表達(dá)比較

PNS組、黃芪組、miR-30a組和黃芪+miR-30a組小鼠腎組織中GRP-78和ATF6蛋白表達(dá)顯著多于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);黃芪組、miR-30a組和黃芪+miR-30a組小鼠腎組織中GRP-78和ATF6蛋白表達(dá)顯著低于PNS組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);黃芪組與miR-30a組小鼠腎組織中GRP-78和ATF6蛋白表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);黃芪+miR-30a組小鼠腎組織中GRP-78和ATF6蛋白表達(dá)顯著低于黃芪組和miR-30a組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見圖2和表4。

圖2 5組小鼠腎組織中GRP-78和ATF6蛋白表達(dá)(免疫組織化學(xué)染色,×200)Fig.2 Expressions of GRP-78 and ATF6 protein in renal tissue of mice in the five groups(immunohistochemical staining,×200)

表4 5組小鼠腎組織中GRP-78和ATF6蛋白相對表達(dá)量比較Tab.4 Comparison of relative expression levels of GRP-78 and ATF6 protein in renal tissue of mice among the five groups

2.6 5組小鼠腎組織中GRP-78、ATF6、p38 MAPK、p-p38 MAPK、p-ERK、ERK蛋白表達(dá)比較

PNS組、黃芪組、miR-30a組和黃芪+miR-30a組小鼠腎組織中GRP-78、ATF6蛋白相對表達(dá)量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);黃芪組、miR-30a組和黃芪+miR-30a組小鼠腎組織中GRP-78、ATF6蛋白相對表達(dá)量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值顯著低于PNS組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);黃芪組與miR-30a組小鼠腎組織中GRP-78、ATF6蛋白相對表達(dá)量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);黃芪+miR-30a組小鼠腎組織中GRP-78、ATF6蛋白相對表達(dá)量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值顯著低于黃芪組和miR-30a組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見圖3和表5。

圖3 5組小鼠腎組織中GRP-78、ATF6、p38 MAPK、p-p38 MAPK、p-ERK、ERK蛋白表達(dá)(Western blot)Fig.3 Expressions of GRP-78,ATF6,p38 MAPK,p-p38 MAPK,p-ERK and ERK protein in renal tissue of mice in the five groups(Western blot)

表5 5組小鼠腎組織中GRP-78、ATF6蛋白相對表達(dá)量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值比較Tab.5 Comparison of the expressions of GRP-78,ATF6 protein and the ratios of p-p38 MAPK/p38 MAPK,p-ERK/ERK in renal tissue of mice among the five groups

3 討論

腎病綜合征是具有明顯特征的臨床癥候群,包括尿蛋白高于3.5 g·L-1、血漿白蛋白低于30 g·L-1、高脂血癥及代謝紊亂等,通常由腎小球毛細(xì)血管濾過膜受到損傷所致。腎病綜合征在臨床上為常見病,4～12歲兒童的發(fā)病率尤為高,嚴(yán)重危害人類的生命健康。目前,臨床上主要采用糖皮質(zhì)激素來治療腎病綜合征,多通過檢測尿蛋白水平來判斷治療效果。本研究結(jié)果顯示,腎病綜合征模型小鼠24 h尿蛋白及血清中TC、TG、BUN、Scr水平均明顯增加,且腎小球體積增大,腎小管中有空泡性病變且伴有炎癥細(xì)胞浸潤,與桑素珍等[12]報(bào)道的結(jié)果一致,提示腎病綜合征小鼠模型制備成功,小鼠體內(nèi)出現(xiàn)血脂異常、炎癥反應(yīng)和腎臟纖維化。有研究發(fā)現(xiàn),在環(huán)境、遺傳等多種因素作用下,腎病的患病率明顯增加[13]。目前,中西醫(yī)結(jié)合治療腎病綜合征被學(xué)者們廣泛關(guān)注,其中黃芪是最具有代表性的藥物之一。黃芪是一種滋補(bǔ)性中藥,其味甘性溫,具有補(bǔ)氣升陽、扶正固本的功效。黃芪的多種成分如皂苷、多糖、氨基酸等可介導(dǎo)機(jī)體的特異性和非特異性免疫反應(yīng)[14]。有學(xué)者采用黃芪來治療小兒呼吸道感染、腎移植術(shù)后肺部感染等,結(jié)果發(fā)現(xiàn),患兒的治療效果較好[15]。本研究結(jié)果顯示,黃芪顆粒顯著降低PNS小鼠24 h尿蛋白和血清中TC、TG、BUN、Scr水平,提示黃芪顆?？捎行Ц纳颇I病綜合征小鼠體內(nèi)血脂異常和炎癥反應(yīng),抑制纖維化。崔冰等[16]研究發(fā)現(xiàn),腎病綜合征患者給予黃芪輔助治療后,血清清蛋白水平明顯升高,免疫功能得到明顯改善,且未觀察到不良反應(yīng)發(fā)生。

腎臟纖維化是腎病綜合征重要的病理過程,腎纖維化是由慢性炎癥所致,炎癥因子和細(xì)胞因子通過上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化刺激細(xì)胞外基質(zhì)成分的過度積累,進(jìn)而導(dǎo)致腎纖維化。IL-6是體內(nèi)重要的細(xì)胞炎癥因子之一,參與腎小球疾病的免疫損傷過程,與腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),機(jī)體中多種免疫細(xì)胞均可分泌IL-6,包括淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等;當(dāng)IL-8、TNF-α和氧化應(yīng)激等多種因素刺激免疫細(xì)胞時(shí)會(huì)增加IL-6的分泌[17]。有研究發(fā)現(xiàn),正常腎組織中存在一定量的IL-6、IL-8、TNF-α,對腎組織的結(jié)構(gòu)和功能有很好的維持作用;但在病理情況下,腎組織中IL-6、IL-8、TNF-α水平會(huì)因多種因素的刺激而增加,導(dǎo)致腎小球組織結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生異常[18]。本研究結(jié)果顯示,與對照組比較,PNS組小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平顯著升高,提示腎病綜合征可引起機(jī)體的炎癥反應(yīng);采用黃芪顆粒干預(yù)后血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平均顯著降低,說明黃芪顆粒可通過抑制炎癥因子的分泌減輕腎病綜合征小鼠機(jī)體內(nèi)的炎癥反應(yīng)。高宏宇等[19]研究報(bào)道,降低腎病綜合征小鼠血清中炎癥因子水平可減輕腎臟損傷,抑制腎臟纖維化。有研究證實(shí),p38 MAPK信號通路可介導(dǎo)炎性細(xì)胞的多種生物學(xué)過程,包括增殖、凋亡等;p-p38 MAPK可對環(huán)磷酸腺苷進(jìn)行調(diào)節(jié),進(jìn)而激活炎癥信號通路,導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)積聚,從而導(dǎo)致腎小球硬化的發(fā)生和發(fā)展[20]。本研究結(jié)果顯示,黃芪顆粒可顯著降低小鼠腎組織中p38 MAPK蛋白表達(dá),提示黃芪顆?？赏ㄟ^抑制炎性細(xì)胞生物學(xué)過程而減輕腎病綜合征損傷。曾文英等[21]研究證實(shí),抑制小鼠腎臟組織中p38 MAPK-纖維連接蛋白信號通路可減輕腎臟損傷。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激廣泛參與腎病的發(fā)生和發(fā)展。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是由真核細(xì)胞進(jìn)行合成、折疊和成熟的細(xì)胞器,ATF6是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上一種主要跨膜蛋白,正常情況下,ATF6能以無活性的狀態(tài)結(jié)合GRP78,通過發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)而激活具有病毒復(fù)制作用的相關(guān)蛋白。具有病毒復(fù)制作用的相關(guān)蛋白可通過對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)過負(fù)荷的抑制,進(jìn)而對細(xì)胞進(jìn)行保護(hù),當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)存在持續(xù)應(yīng)激或應(yīng)激增強(qiáng)時(shí),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的凋亡通路會(huì)被啟動(dòng),進(jìn)而對細(xì)胞的凋亡進(jìn)行誘導(dǎo)。本研究結(jié)果顯示,黃芪顆?？山档湍I病綜合征小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白ATF6和GRP-78的表達(dá),提示黃芪顆粒對腎病綜合征小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有明顯的抑制作用。

miRNA是一類長度高度保守的單鏈非編碼小分子RNA,廣泛參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化、免疫、代謝等生理過程,與腫瘤、糖尿病、心血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)[22]。miR-30a家族可調(diào)節(jié)腎臟的生長發(fā)育,尤其是腎小管上皮細(xì)胞的分化和增殖。本研究結(jié)果顯示,抑制miR-30a可降低腎病綜合征小鼠24 h尿蛋白和血清中TC、TG、BUN、Scr水平,抑制小鼠血清中炎癥因子IL-6、IL-8、TNF-α水平、腎組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白ATF6、GRP-78表達(dá)及腎組織中p38 MAPK蛋白的表達(dá)。提示miR-30a可降低腎病綜合征小鼠24 h尿蛋白,降低炎癥水平和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,減少腎組織中p38 MAPK蛋白表達(dá)。張瑩等[23]研究發(fā)現(xiàn),腎病綜合征患兒血清中miR-30a呈高表達(dá),與血清白蛋白、尿蛋白定量和腎小管損傷密切相關(guān),對腎病綜合征具有一定的診斷價(jià)值。本研究還發(fā)現(xiàn),黃芪顆粒聯(lián)合miR-30a可降低腎病綜合征小鼠24 h尿蛋白,抑制炎癥水平和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,減少腎組織中p38 MAPK蛋白表達(dá),且效果優(yōu)于單獨(dú)使用黃芪顆?；騧iR-30a。

4 結(jié)論

黃芪顆粒聯(lián)合miR-30a可明顯降低腎病綜合征小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,減輕炎癥水平,抑制腎組織中MAPK蛋白表達(dá)。