張雅麗,喻學婷,袁星星,,張傳舉,高婷婷,高佳煒,楊柳欣

(1黑龍江省中醫(yī)藥科學院·黑龍江 哈爾濱 150036;2張雅麗全國名老中醫(yī)藥專家傳承工作室·黑龍江 哈爾濱 150006;3黑龍江中醫(yī)藥大學·黑龍江 哈爾濱 150040)

潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis,UC)是一種好發(fā)于結(jié)直腸黏膜及黏膜下層的連續(xù)性非特異性炎癥性疾患,臨床以便膿血、腹痛、腹瀉、體質(zhì)量減輕為主要特征,同時可能伴有貧血、關(guān)節(jié)病、結(jié)節(jié)性紅斑等腸外病變,病程纏綿反復,為全球公認的難治性疾病[1]。UC的發(fā)病機制尚不明確,主要與遺傳、免疫、環(huán)境、藥物、腸道微生物等因素相關(guān)[2]。目前西醫(yī)臨床多以5-氨基水楊酸藥物、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等治療UC,但存在易復發(fā)、價格不菲、療程漫長等局限性[3]。

UC屬于中醫(yī)學“泄瀉”“痢疾”“便血”等范疇,中醫(yī)藥治療本病具有療效顯著、副作用小的優(yōu)勢[4]。巨噬細胞是一種高度可塑性細胞,可極化為經(jīng)典活化的巨噬細胞(M1型)和替代活化的巨噬細胞(M2型)[5]。前者可分泌IL-6、IL-1β等促炎細胞因子引發(fā)炎癥反應以保護宿主,后者主要分泌IL-4、IL-10等抗炎細胞因子發(fā)揮抗炎活性[6]。研究表明,急性UC患者局部結(jié)腸黏膜巨噬細胞數(shù)量顯著增加并趨于被激活,提示巨噬細胞在UC的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用[7],因此調(diào)節(jié)巨噬細胞極化在治療UC上具有重要意義。連草瀉痢膠囊為黑龍江省中醫(yī)藥科學院張雅麗教授根據(jù)多年臨床經(jīng)驗研發(fā)的中成藥,治療UC具有良好的療效和安全性。本課題組前期研究證明,連草瀉痢膠囊可以通過調(diào)節(jié)外周血髓樣樹突狀細胞和Treg/Th17平衡,控制腸道炎癥,從而有效治療UC[8-9]。在本研究中,筆者通過觀察連草瀉痢膠囊對急性潰瘍性結(jié)腸炎患者外周血巨噬細胞表型的影響,以期進一步挖掘連草瀉痢膠囊治療UC的機制。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2022年5月—2023年5月黑龍江省中醫(yī)藥科學院肝膽脾胃二科接診的UC患者82例,按照隨機數(shù)字表法分成2組,各41 例。觀察組:男29 例,女12 例,平均年齡(43.22±11.10)歲,平均病程(67.28±7.03)月;對照組:男25 例,女16 例,平均年齡(42.63±13.18)歲,平均病程(68.49±6.47)月;2 組患者一般資料比較均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究經(jīng)黑龍江省中醫(yī)藥科學院倫理委員會批準(編號:2020-001-19)。

1.2 納入標準 1)符合大腸濕熱證UC診斷標準[10];2)年齡在18～70 歲;3)知情并簽署同意書,能夠清楚表達感受。

1.3 排除標準 1)爆發(fā)性、緩解期潰瘍性結(jié)腸炎患者;2)放射性腸炎、Crohn病、腸結(jié)核或缺血性腸炎患者;3)1 個月內(nèi)使用水楊酸制劑、糖皮質(zhì)激素或者免疫抑制劑的患者;4)合并其他系統(tǒng)嚴重疾病者;5)對本次試驗中所用藥物過敏者;6)妊娠期及哺乳期婦女。

2 方法

2.1 治療方法 對照組:予美莎欣(美沙拉嗪腸溶片,黑龍江天宏藥業(yè)有限公司,國藥準字H20103359)口服,日3次,0.5 g/次;觀察組:在對照組基礎(chǔ)上予連草瀉痢膠囊(黑龍江省中醫(yī)藥科學院制劑室提供,規(guī)格:0.3 g/粒,組成:黃連20 g、木香15 g、白芍20 g、薏苡仁20 g、白花蛇舌草15 g、馬齒莧15 g、蒲公英15 g,日3次,1.5 g/次。兩組療程均為8周。

2.2 觀察指標

2.2.1 外周血M1型、M2型巨噬細胞檢測 治療前后分別采集2 組患者靜脈血,用淋巴細胞分離液提取外周單個核細胞,加PBS后離心棄上清液洗滌備用,重懸細胞,分別加入CD14、CD68和CD206抗體室溫避光孵育,加PBS后離心棄上清液,重懸細胞,上流式細胞儀(購于美國貝克曼庫爾特公司,型號:CytoFlex)檢測。

2.2.2 血清炎癥因子檢測 取所有患者治療前后的晨起靜脈血,嚴格按試劑盒說明書操作,用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定血清IL-6、IL-1β、IL-4和IL-10水平(試劑盒購于上海碧云天生物科技有限公司,貨號分別為PI330、PI305、PI618和PI528)。

2.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 25.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料行卡方檢驗,計量資料行t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 2 組患者治療前后外周血M1型、M2型巨噬細胞以及M1/M2比例比較 見表1。

表1 2組患者治療前后外周血M1型、M2型巨噬細胞以及M1/M2比例比較

3.2 2組患者治療前后血清炎癥因子水平比較 見表2。

表2 2組患者治療前后血清炎癥因子水平比較

4 討論

UC是一種與遺傳改變、環(huán)境因素、微生物群和黏膜免疫失調(diào)等因素相關(guān)的慢性腸道炎癥疾病,其病變多累及直腸和結(jié)腸[11]。雖然UC的病因尚不清楚,但UC的免疫反應和炎癥途徑表明,巨噬細胞極化、炎癥因子在UC的發(fā)病機制中必不可缺[12]。巨噬細胞是抗原呈遞細胞的一種,具有顯著的功能異質(zhì)性。巨噬細胞作為結(jié)腸先天免疫的中樞協(xié)調(diào)器,可以根據(jù)刺激分化為經(jīng)典激活的促炎(M1型)或替代激活的抗炎(M2型)巨噬細胞[13]。M1型巨噬細胞的持續(xù)激活導致過多的促炎細胞因子釋放,使結(jié)腸穩(wěn)態(tài)失衡,損傷屏障功能;具有M2表型的巨噬細胞可以產(chǎn)生抗炎細胞因子以改善UC的癥狀和進展[14]。研究證實,活動期UC患者在發(fā)炎的結(jié)腸和外周血中具有豐富的M1型巨噬細胞,而M2巨噬細胞在非發(fā)炎的回腸中顯著富集[15]。表明恢復M1和M2巨噬細胞之間的平衡對于UC的治療和結(jié)腸穩(wěn)態(tài)的維持至關(guān)重要。本研究發(fā)現(xiàn),連草瀉痢膠囊可以降低UC患者外周血M1型巨噬細胞比例,增加外周血M2型巨噬細胞比例,從而促進外周血中的巨噬細胞向M2表型極化,產(chǎn)生抗炎因子有效緩解UC。

UC的特征為結(jié)腸黏膜的慢性炎癥,伴有炎癥細胞浸潤。IL-6是常見的促炎細胞因子,在UC患者的體內(nèi)可以檢測到極高水平的IL-6[16]。IL-6調(diào)節(jié)T細胞的成熟分化,從而控制促炎T細胞亞群(Th17細胞)與免疫抑制調(diào)節(jié)性T細胞之間的平衡,調(diào)節(jié)慢性腸道炎癥[17]。IL-1β作為多功能促炎細胞因子,在各種炎癥性疾病中升高;IL-1β可以快速激活MLCK基因活性和增加MLCK蛋白表達,進而增加腸上皮緊密連接屏障通透性[18]。腸通透性增加已被確定為UC疾病早期復發(fā)的重要預測指標。IL-4是UC免疫激活和炎癥的關(guān)鍵驅(qū)動因素,可在活動性UC的病變部位檢測到IL-4細胞因子轉(zhuǎn)錄,可降低單層腸上皮細胞的跨上皮抵抗[19]。IL-10是UC關(guān)鍵的抗炎因子,IL-10能夠下調(diào)TNF-α和iNOS的表達,進而抑制結(jié)腸炎和癌癥的發(fā)生;缺乏IL-10的小鼠不僅能夠自發(fā)發(fā)生UC,同時還表現(xiàn)出廣泛的全身炎癥[20]。本研究表明,連草瀉痢膠囊可以顯著降低UC患者外周血促炎因子IL-6和IL-1β的水平,增高抗炎因子IL-4和IL-10的水平(P<0.05)。

連草瀉痢膠囊是黑龍江省中醫(yī)藥科學院張雅麗教授研制的中藥復方制劑,方中黃連性寒味苦,可以清熱燥濕、瀉火解毒,為治濕熱瀉痢的要藥,相關(guān)研究表明,黃連素可以調(diào)控JAK/STAT信號通路抑制UC小鼠結(jié)腸上皮細胞凋亡,發(fā)揮治療UC的作用[21];木香味苦能夠清泄,善于行脾胃氣滯;兩者共為君藥。薏苡仁甘淡微寒,利水滲濕,使?jié)駸釓男”闳?白芍柔肝止痛;馬齒莧涼血止血,馬齒莧多糖可以下調(diào)STAT3表達,降低血清IL-6及MPO的含量,從而有效抑制UC炎癥的發(fā)生[22];3 藥共為臣藥。蒲公英、白花蛇舌草共為佐藥,有清熱解毒、散結(jié)消腫之效;蒲公英多糖可以下調(diào)大鼠腸組織STAT3、IL-6 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平,抑制炎癥、修復結(jié)腸黏膜[23]。

綜上,連草瀉痢膠囊對UC的作用機制可能是通過調(diào)節(jié)巨噬細胞極化抑制炎癥反應,即促進巨噬細胞向M2型極化,抑制向M1型極化,以此有效緩解UC的炎癥反應。