曹春琪，孫慧珠，趙振霞，薛 忠，雷 蓉*，劉永利*

基于UHPLC-MS/MS技術(shù)的導(dǎo)赤丸中24個成分定量測定聯(lián)合化學計量學質(zhì)量評價

曹春琪1，孫慧珠1，趙振霞1，薛 忠2，雷 蓉1*，劉永利1*

1. 河北省藥品醫(yī)療器械檢驗研究院，河北 石家莊 050227 2. 河北醫(yī)科大學藥學院，河北 石家莊 050017

建立UHPLC-MS/MS法同時測定導(dǎo)赤丸中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A、鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酚、梔子苷、西紅花苷I、西紅花苷II、哈巴苷、哈巴俄苷、木通苯乙醇苷B、芍藥苷、連翹酯苷A和連翹苷的含量。采用Phenomenon C18柱（100 mm×2.1 mm，2.6 μm）色譜柱；以乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動相，梯度洗脫；體積流量0.3 mL/min；柱溫40 ℃；進樣量為1 μL；采用電噴霧離子源（ESI），以多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式正、負離子同時掃描。24種成分在各自的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（≥0.997 7）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性等均符合方法學要求，平均加樣回收率為92.7%～107.9%，RSD均小于6.5%。15批樣品中24種成分的平均質(zhì)量分數(shù)在6.834～7 667.200 μg/g，聚類分析、主成分分析結(jié)果一致，均可將3個廠家的樣品準確劃分為3類。所建立的UPLC-MS/MS法24個成分含量測定方法重現(xiàn)性好，簡便、準確、穩(wěn)定，能客觀、全面、有效地確定不同生產(chǎn)企業(yè)樣品中主要成分的差異，可為導(dǎo)赤丸質(zhì)量評價體系的完善提供依據(jù)。

導(dǎo)赤丸；UHPLC-MS/MS技術(shù)；化學計量學；質(zhì)量評價；黃芩苷；漢黃芩苷；黃芩素；漢黃芩素；千層紙素A；鹽酸小檗堿；表小檗堿；鹽酸黃連堿；鹽酸藥根堿；鹽酸巴馬?。淮簏S素；大黃酸；大黃素甲醚；蘆薈大黃素；大黃酚；梔子苷；西紅花苷I；西紅花苷II；哈巴苷；哈巴俄苷；木通苯乙醇苷B；芍藥苷；連翹酯苷A；連翹苷

導(dǎo)赤丸出自宋代太平惠民和劑局編寫的《太平惠民和劑局方》卷六，由連翹、黃連、梔子（姜炒）、木通、玄參、天花粉、赤芍、大黃、黃芩、滑石共10味藥組成，方中黃連、梔子、黃芩為君藥；連翹、木通、大黃、玄參、赤芍為臣藥；滑石、天花粉為佐藥。具清熱瀉火、利尿通便之功效，臨床常用于火熱內(nèi)盛所致的口舌生瘡、咽喉疼痛、心胸煩熱、小便短赤、大便秘結(jié)等癥[1]。導(dǎo)赤丸現(xiàn)行質(zhì)量標準中采用HPLC法對鹽酸小檗堿的含量進行測定，相關(guān)文獻報道，多為HPLC法測定黃芩苷、大黃素等一兩種成分的含量[2-3]。中成藥成分復(fù)雜，有效成分較多，發(fā)揮藥效往往是由多種活性組分協(xié)同作用的結(jié)果，因此，僅對單一成分進行質(zhì)量控制，不足以充分、全面、有效地評價導(dǎo)赤丸的質(zhì)量。

為全面評價藥品質(zhì)量，應(yīng)對處方中的多味飲片中的特征成分進行考察。現(xiàn)代藥理研究表明，黃芩中的黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素[4-5]、黃連中的鹽酸小檗堿、表小檗堿[6-7]、連翹中的連翹苷、連翹酯苷A[8]、梔子中的梔子苷、西紅花苷I、西紅花苷II[9]均具有抑菌抗炎、瀉火解毒的作用；木通中的木通苯乙醇苷B[10]具利尿通淋之功效；玄參中的哈巴苷、哈巴俄苷是與清熱涼血、滋陰降火功效相關(guān)的主要化合物[11]；赤芍的芍藥苷具散瘀止痛之功效[12]；大黃中的蒽醌類化合物為瀉下攻積的主要成分[13]。因此，本實驗選定此8味藥中的特征成分進行檢測，以對藥品質(zhì)量進行全面評估，保證藥品療效。

目前，靈敏度高、專屬性好的液質(zhì)聯(lián)用法已廣泛應(yīng)用于中成藥的含量測定，尤其適用于某些含量較低的成分[14-15]。實驗過程中曾嘗試采用HPLC-UV法測定上述相關(guān)成分，但由于成分較多，難于達到有效分離，紫外檢測器的靈敏度和選擇性都不足以同時對測定成分進行定量分析，因此，本實驗采用UHPLC-MS/MS分析方法建立了同時測定導(dǎo)赤丸中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A、鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酚、梔子苷、西紅花苷I、西紅花苷II、哈巴苷、哈巴俄苷、木通苯乙醇苷B、芍藥苷、連翹酯苷A和連翹苷24種成分含量的分析方法，為該制劑的質(zhì)量標準的建立提供參考，為相關(guān)部門的全面監(jiān)管提供技術(shù)保障。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Qtrap 6500型超高效液相色譜-離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國AB SCIEX公司；XPE26型百萬分電子天平、XS105型十萬分電子天平，梅特勒托利多科技有限公司；KQ-250ES型超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司；乙腈、甲醇，色譜純，德國Merck公司；甲酸，色譜純，天津大茂化學試劑廠；其余試劑均為分析純；實驗用水為屈臣氏蒸餾水。

1.2 試藥

對照品黃芩苷（批號110715-201117，質(zhì)量分數(shù)91.7%）、漢黃芩苷（批號112002-201702，質(zhì)量分數(shù)98.5%）、黃芩素（批號111595-201808，質(zhì)量分數(shù)97.9%）、漢黃芩素（批號111514-201706，質(zhì)量分數(shù)100.0%）、鹽酸小檗堿（批號110713-201814，質(zhì)量分數(shù)86.7%）、鹽酸巴馬?。ㄅ?10732-201913，質(zhì)量分數(shù)85.7%）、鹽酸黃連堿（批號112026-201601，質(zhì)量分數(shù)95.1%）、鹽酸藥根堿（批號110733-201108，質(zhì)量分數(shù)90.3%）、大黃酚（批號110796-201922，質(zhì)量分數(shù)99.4%）、大黃素甲醚（批號110758-201817，質(zhì)量分數(shù)99.2%）、蘆薈大黃素（批號110795-201308，質(zhì)量分數(shù)97.8%）、大黃素甲醚（批號110758-201817，質(zhì)量分數(shù)99.2%）、大黃酸（批號110757-201607，質(zhì)量分數(shù)99.3%）、木通苯乙醇苷B（批號111910-201604，質(zhì)量分數(shù)98.2%）、哈巴苷（批號111729-201707，質(zhì)量分數(shù)96.8%）、哈巴俄苷（批號111730-201709，質(zhì)量分數(shù)95.9%）、芍藥苷（批號110736-201942，質(zhì)量分數(shù)95.1%）、連翹苷（批號110821-201816，質(zhì)量分數(shù)95.1%）、連翹酯苷A（批號111810-201606，質(zhì)量分數(shù)93.4%）、梔子苷（批號110749-201919，質(zhì)量分數(shù)97.1%）、西紅花苷I（批號111588-201303，質(zhì)量分數(shù)92.6%）、西紅花苷II（批號111589-201705，質(zhì)量分數(shù)92.2%）購自中國食品藥品檢定研究院；對照品千層紙素A（批號ST23660120，質(zhì)量分數(shù)98.0%）、表小檗堿（批號ST23680105，質(zhì)量分數(shù)98.0%）購自上海詩丹德生物技術(shù)有限公司。

1.3 樣品

導(dǎo)赤丸樣品共15個批次，其中樣品S1～S4（批號19013293、19013294、19013728、19013729）來自天津中新藥業(yè)股份有限公司（TZ），樣品S5～S10（批號11170816、11180622、11180704、11190026、11190032、11190073）來自北京同仁堂股份有限公司（BT），樣品S11～S15（批號20210402、20210403、20210801、20220302、20221003）來自內(nèi)蒙古天奇藥業(yè)股份有限公司（NT）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Phenomenon C18柱（100 mm×2.1 mm，2.6 μm）；流動相為乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫：0～15 min，10%～40%乙腈；15～20 min，40%～60%乙腈；柱溫為40 ℃；體積流量為0.3 mL/min；進樣量為1 μL。

2.2 質(zhì)譜條件

以三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測；電噴霧離子源（ESI），掃描方式為正、負離子同時掃描，監(jiān)測模式為多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM），正離子化電壓5500 V，負離子化電壓?4500 V，脫溶劑氣溫度500 ℃；碰撞氣（CAD）壓力為“medium”，每個離子對的滯留時間為50 ms；氣簾氣（CUR）壓力277 kPa，霧化氣（GS1）壓力330 kPa，加熱輔助氣（GS2）壓力420 kPa。各化合物質(zhì)譜參數(shù)詳見表1。

表1 導(dǎo)赤丸中24個成分的質(zhì)譜參數(shù)

2.3 混合對照品溶液的制備

取各待測成分對照品適量，精密稱定，分別加70%甲醇溶液溶解，并制備成單一的對照品儲備液。將上述對照品儲備液加70%甲醇稀釋制成含黃芩苷70 μg/mL、漢黃芩苷25 μg/mL、黃芩素3 μg/mL、漢黃芩素1 μg/mL、千層紙素A 1 μg/mL、鹽酸小檗堿22 μg/mL、表小檗堿3 μg/mL、鹽酸黃連堿9 μg/mL、鹽酸藥根堿6 μg/mL、鹽酸巴馬汀7 μg/mL、大黃素1 μg/mL、大黃酸1 μg/mL、大黃素甲醚1 μg/mL、蘆薈大黃素1 μg/mL、大黃酚2 μg/mL、梔子苷60 μg/mL、西紅花苷I 4 μg/mL、西紅花苷II 1 μg/mL、哈巴苷4 μg/mL、哈巴俄苷2 μg/mL、木通苯乙醇苷B 1 μg/mL、芍藥苷14 μg/mL、連翹酯苷A 70 μg/mL、連翹苷4 μg/mL的混合對照品溶液，即得。

2.4 供試品溶液的制備

取本品，研細，混勻，取約0.3 g，精密稱定，加70%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，密塞，超聲處理（功率250 W、頻率40 kHz）30 min，取出，放冷，用70%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.5 專屬性試驗

分別吸取混合對照品溶液和導(dǎo)赤丸（S5）供試品溶液，按“2.1”“2.2”項下液質(zhì)聯(lián)用條件進樣測定。供試品溶液中被測定成分與對照品的保留時間相對應(yīng)，樣品中待測成分無其他干擾，且分離效果與峰形良好，色譜圖見圖1。

2.6 線性關(guān)系考察

分別精密量取“2.3”項下對照品儲備溶液，用70%甲醇配制系列質(zhì)量濃度的混合對照品溶液，按“2.1”“2.2”項液質(zhì)聯(lián)用條件進樣測定，以進樣質(zhì)量濃度為橫坐標（），以各成分定量離子對的峰面積積分值為縱坐標（），建立標準曲線，進行線性回歸，得回歸方程、相關(guān)系數(shù)（）及線性范圍見表2。各待測成分在各自質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1-黃芩苷 2-漢黃芩苷 3-黃芩素 4-漢黃芩素 5-千層紙素A 6-鹽酸小檗堿 7-表小檗堿 8-鹽酸黃連堿 9-鹽酸藥根堿 10-鹽酸巴馬汀 11-大黃素 12-大黃酸 13-大黃素甲醚 14-蘆薈大黃素 15-大黃酚 16-梔子苷 17-西紅花苷I 18-西紅花苷II 19-哈巴苷 20-哈巴俄苷 21-木通苯乙醇苷B 22-芍藥苷 23-連翹酯苷A 24-連翹苷

1-baicalin 2-wogonoside 3-baicalein 4-wogonin 5-melaleuca A 6-berberine hydrochloride 7-epiberberine 8-coptisine chloride 9-jatrorrhizine 10-palmatine hydrochloride 11-emodin 12-rhein 13-physcion 14-aloe emodin 15-chrysophanol 16-geniposide 17-crocetin I 18-crocetin II 19-harpagide 20-harpagoside 21-calceolarioside B 22-paeoniflorin 23-forsythoside A 24-forsythin

圖1 混合對照品溶液(A)、導(dǎo)赤丸供試品溶液(B)的UHPLC-MS/MS譜圖

Fig. 1 UHPLC-MS/MS chromatograms of mixed reference substances solution (A) and Daochi Pills sample solution(B)

2.7 精密度試驗

取“2.3”項下混合對照品溶液，按“2.1”“2.2”項下條件，連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積，計算黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A、鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酚、梔子苷、西紅花苷I、西紅花苷II、哈巴苷、哈巴俄苷、木通苯乙醇苷B、芍藥苷、連翹酯苷A和連翹苷峰面積的RSD分別為1.2%、1.6%、2.1%、2.4%、3.1%、1.5%、3.2%、1.7%、2.3%、3.5%、2.2%、1.8%、3.6%、4.1%、3.9%、2.4%、1.9%、1.2%、2.2%、3.1%、2.7%、2.5%、2.6%、3.5%，表明儀器精密度良好。

表2 回歸方程和各成分線性范圍

2.8 穩(wěn)定性試驗

取導(dǎo)赤丸樣品（S5），按“2.4”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”“2.2”項下條件分別于制備后0、3、6、12、15、20、24 h測定峰面積，結(jié)果黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A、鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酚、梔子苷、西紅花苷I、西紅花苷II、哈巴苷、哈巴俄苷、木通苯乙醇苷B、芍藥苷、連翹酯苷A和連翹苷峰面積的RSD值分別為1.8%、3.6%、2.1%、1.7%、2.3%、3.2%、4.8%、1.6%、2.2%、2.0%、3.3%、3.8%、4.1%、4.9%、3.4%、2.9%、4.2%、4.2%、3.1%、1.7%、2.5%、3.6%、2.5%、3.6%，表明供試品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗

取導(dǎo)赤丸樣品（S5）適量，研細，分別取0.3 g，共6份，精密稱定，按“2.4”項下方法制備供試品溶液，進樣測定，計算含量。結(jié)果黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A、鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酚、梔子苷、西紅花苷I、西紅花苷II、哈巴苷、哈巴俄苷、木通苯乙醇苷B、芍藥苷、連翹酯苷A和連翹苷的平均質(zhì)量分數(shù)分別為6 217.3、1 691.1、843.8、131.8、71.67、1739.2、273.2、433.1、293.6、599.1、49.52、157.5、359.7、25.91、787.3、3 087.3、747.3、33.99、131.9、81.74、139.3、1 163.1、4 665.4、317.4 μg/g，其RSD分別為2.1%、1.4%、2.2%、1.7%、3.1%、3.8%、2.1%、3.1%、2.5%、2.0%、1.4%、1.7%、2.5%、1.4%、2.7%、2.9%、3.1%、1.6%、2.7%、3.4%、1.3%、2.7%、0.5%、3.9%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗

稱取已測定24種指標成分含量的導(dǎo)赤丸樣品（S5）適量，研細，分別取0.15 g，共6份，精密稱定，再取用70%甲醇溶液配制的對照品儲備液，按照近似1∶1比例加入對照品溶液，按“2.4”項下方法制備供試品溶液，進樣測定，計算各成分加樣回收率及其RSD值。結(jié)果黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A、鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酚、梔子苷、西紅花苷I、西紅花苷II、哈巴苷、哈巴俄苷、木通苯乙醇苷B、芍藥苷、連翹酯苷A和連翹苷的平均加樣回收率分別為102.2%、101.2%、99.7%、100.2%、100.0%、97.0%、103.0%、99.4%、102.1%、101.5%、99.7%、99.3%、102.3%、100.6%、103.4%、99.3%、100.1%、96.8%、97.0%、96.8%、103.1%、101.3%、102.5%、101.4%，RSD分別為1.7%、3.3%、3.1%、3.4%、1.9%、0.6%、0.6%、3.0%、2.4%、1.7%、2.2%、3.0%、2.5%、3.1%、1.7%、1.3%、3.0%、1.1%、1.4%、1.2%、1.7%、1.6%、2.5%、1.8%，結(jié)果表明本方法各成分加樣回收率良好。

2.11 樣品測定

取不同批號的導(dǎo)赤丸樣品（S1～S15），按“2.4”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”“2.2”項下條件進樣測定，計算各成分的含量，結(jié)果見表3。

2.12 聚類分析

以15批導(dǎo)赤丸中24個成分的含量為變量，導(dǎo)入SPASS 19.0軟件，采用組間連接聚類，以平方歐氏距離為測度，進行聚類分析[16]，結(jié)果見圖2。結(jié)果顯示，當度量距離為10時，15批樣品（S1～S15）可聚為3類，其中S1～S4來自同一廠家，聚為第I類，S5～S10來自另一廠家，聚為第II類，S10～S15為同一廠家，聚為第III類。由此可知，基于質(zhì)譜含量測定結(jié)果可區(qū)分不同廠家的樣品，具體原因可能與原料藥材的產(chǎn)地、采收期、生長年限、加工炮制以及成藥的生產(chǎn)工藝等有關(guān)。

2.13 主成分分析（principal component analysis，PCA）

PCA法是將具有多維數(shù)據(jù)的對象降維化處理，使其數(shù)目繁多且相互關(guān)聯(lián)的大量原始變量轉(zhuǎn)變?yōu)樯贁?shù)幾個能夠代表數(shù)據(jù)特征的不相關(guān)變量，根據(jù)數(shù)據(jù)特征對樣本進行分析和描述[17-20]。因此，為更好地客觀反映導(dǎo)赤丸各批次之間的差異性，將15批次導(dǎo)赤丸的24種成分含量測定結(jié)果作為變量導(dǎo)入SIMCA 14.1軟件，進行PCA。建立的模型前2個主成分的累積貢獻率為89.6%，說明前2個主成分已基本能反映不同批次樣品的主要特征，模型的累積解釋率Rcum2為0.962，累積預(yù)測能力Qcum2為0.864，均大于0.5，提示PCA模型的區(qū)分度和預(yù)測程度都較好。得出的PCA得分圖見圖3，24種化學成分的載荷圖見圖4。圖3結(jié)果顯示，3個企業(yè)的15批導(dǎo)赤丸樣品分別聚集在3個不同的區(qū)域，說明不同企業(yè)間產(chǎn)品質(zhì)量存在較大差異，與聚類分析結(jié)果基本一致。再通過圖4載荷圖可分析導(dǎo)致不同企業(yè)間產(chǎn)品質(zhì)量差異的主要成分，從其分布可以得出，黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A以及哈巴苷、哈巴俄苷對TZ樣品的質(zhì)量偏差貢獻最大；大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酚、木通苯乙醇苷B對BT樣品的質(zhì)量偏差貢獻最大；NT僅芍藥苷1個成分的質(zhì)量偏差貢獻較大，提示企業(yè)在生產(chǎn)中應(yīng)對原料藥材質(zhì)量進行控制，以減少成藥間質(zhì)量差異。

表3 導(dǎo)赤丸中24種成分的含量(n = 3)

續(xù)表3

圖2 15批樣品含量測定結(jié)果聚類分析圖

圖3 15批樣品PCA得分圖

3 討論

3.1 指標性成分的選擇及優(yōu)化

導(dǎo)赤丸所含藥味較多，化學成分復(fù)雜，且有些成分含有多個同分異構(gòu)體，為防止各個成分之間互相干擾，故選用單一對照品溶液，通過質(zhì)譜針泵進樣的方式確定了24個成分的母離子、子離子，并且對每個成分的CE和DP電壓等關(guān)鍵參數(shù)進行優(yōu)化，確保定量檢測的準確性。黃芩苷、漢黃芩苷、千層紙素A、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸藥根堿、大黃酚、大黃素甲醚、蘆薈大黃素在正離子模式下響應(yīng)較好，其余成分在負離子模式下響應(yīng)較好，因此，采用多重反應(yīng)監(jiān)測（multiple reaction monitoring，MRM）模式對正負離子同時進行掃描。

圖4 15批樣品中24種成分含量PCA載荷圖

3.2 供試品溶液的制備及流動相的優(yōu)化

本實驗考察了以甲醇、70%甲醇、50%甲醇、30%甲醇作為提取溶劑，超聲20、30、50、60 min的提取效果，最終確定70%甲醇超聲30 min時，各個目標成分可在較短時間內(nèi)，均得到完全提取。根據(jù)目標化合物的理化性質(zhì)和色譜行為，比較了以甲醇-水、乙腈-水、甲醇-甲酸水、乙腈-甲酸水的洗脫系統(tǒng)，結(jié)果表明，以甲醇為流動相時，各成分的分離效果不理想，乙腈-甲酸水系統(tǒng)各成分的分離效果和峰形較好，各色譜峰的分離度和理論塔板數(shù)均符合要求。

3.3 分析結(jié)果評價

本研究采用聚類分析和PCA化學計量模型，對3家生產(chǎn)企業(yè)15批樣品的24個化學成分的含量測定結(jié)果進行了分析。結(jié)果表明，同一企業(yè)的樣品質(zhì)量較為均一，不同企業(yè)間產(chǎn)品質(zhì)量存在較大差異，其中TZ樣品中黃芩和玄參藥材所測全部標志性成分，黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A以及哈巴苷、哈巴俄苷含量均較高，表明TZ所用的上述2味原料藥材質(zhì)量較好；梔子中的梔子苷含量較高，但另2種成分西紅花苷I、II含量較低，推測可能是制劑生產(chǎn)過程中環(huán)境溫濕度、工藝參數(shù)等因素的不穩(wěn)定性，導(dǎo)致化學成分較易發(fā)生變化的西紅花苷I、II發(fā)生降解；BT樣品中大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酚、木通苯乙醇苷B含量較高，提示BT投料用大黃與木通質(zhì)量較好；NT樣品中僅芍藥苷含量略高于其他企業(yè)，其他成分含量均較低?；瘜W計量分析結(jié)果表明，導(dǎo)赤丸全面質(zhì)量控制方法的建立有其必要性，提示藥企在生產(chǎn)過程中應(yīng)重視原料藥材的來源以及質(zhì)量，并優(yōu)選工藝參數(shù)，提升工藝控制水平，確保藥品質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性。

綜上所述，本實驗所建立的UHPLC-MS/MS法同時測定導(dǎo)赤丸中24種主要活性成分的方法簡單，專屬性好，靈敏度高，可準確測定樣品中24種成分的含量，為今后導(dǎo)赤丸質(zhì)量標準的制定以及含有這24種成分中成藥的質(zhì)量控制方法的建立提供科學依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Quantitative determination of 24 components in Daochi Pills based on UHPLC-MS/MS technology combined with chemometrics quality evaluation

CAO Chun-qi1, SUN Hui-zhu1, ZHAO Zhen-xia1, XUE Zhong2, LEI Rong1, LIU Yong-li1

1. Hebei Institute for Drug and Medical Device Control, Shijiazhuang 050227, China 2. School of Pharmacy, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, China

To establish an UHPLC-MS/MS method for the simultaneous determination of baicalin, wogonoside, baicalein, wogonin, melaeuca A, berberine hydrochloride, epiberberine, coptisine chloride, jatrorrhizine, palmatine hydrochloride, emodin, rhein, physcion, aloe emodin, chrysophanol, geniposide, crocetin Ⅰ, crocetin Ⅱ, harpagide, harpagoside, calceolarioside B, paeoniflorin, forsythoside A, and forsythin in Daochi Pills.The components were separated on phenomenon C18column (100 mm × 2.1 mm, 2.6 μm) with acetonitrile and 0.1% formic acid aqueous solution as the mobile phase by gradient elution at a flow rate of 0.3 mL/min. The column temperature was set at 40 ℃. The injection volume was 1 μL. The detection was carried out by electrospray ionization (ESI), positive and negative electrospray ionization was performed in multiple reaction monitoring (MRM) mode to scan.A total of 24 constituents showed good linear relationships within their own ranges (≥ 0.997 7), and the precision, stability and repeatability complied with the requirements of methodology. The average recoveries were between 92.7%—107.9% respectively, and RSD were below 6.5%. The average mass fractions of 24 constituents in 15 batches of samples were 6.834—7 667.200 μg/g. The results of cluster analysis and principal component analysis were consistent, and could accurately classify three manufacturers of samples into three categories.The established UHPLC-MS/MS method for determining the content of 24 components has good reproducibility, which is simple, accurate and stable, and can objectively, comprehensively, and effectively determine the differences in the main components in samples from different production enterprises. It can provide a basis for improving the quality evaluation system of Daochi Pills.

Daochi Pills; UHPLC-MS/MS technology; chemometrics; quality evaluation; baicalin; wogonoside; baicalein; wogonin; melaeuca A; berberine hydrochloride; epiberberine; coptisine chloride; jatrorrhizine; palmatine hydrochloride; emodin; rhein; physcion; aloe emodin; chrysophanol; geniposide; crocetin Ⅰ; crocetin Ⅱ; harpagide; harpagoside; calceolarioside B; paeoniflorin; forsythoside A; forsythin

R283.6

A

0253 - 2670(2023)21 - 7034 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.21.012

2023-04-27

河北省重點研發(fā)計劃（21372502D）；河北省藥品監(jiān)督管理局科技計劃項目（2022ZC1019）

曹春琪（1991—），女，工程師，碩士，主要從事中藥質(zhì)量分析研究。Tel: (0311)69086157 E-mail: 1227519372@qq.com

通信作者：雷 蓉（1988—），女，工程師，碩士，主要從事中藥質(zhì)量分析研究。Tel: (0311)69086157 E-mail: honaaa@126.com

劉永利（1973—），男，主任藥師，碩士，主要從事中藥質(zhì)量控制研究。Tel: (0311)89892091 E-mail: liuyongli2008@126.com

[責任編輯 鄭禮勝]