王士博， 許 濤， 李楊輝， 黃 棋， 柳志勇， 陳 寧， 尹君亮， 周小玲

（1.塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300；2.西南大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，重慶 402460；3.第三師畜牧獸醫(yī)工作站，新疆 圖木舒克 843900；4.新疆農(nóng)墾科學(xué)院省部共建綿羊遺傳改良與健康養(yǎng)殖國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 石河子 832000）

作為一種生物活性肽，半胱胺（CS）是機(jī)體內(nèi)半胱氨酸代謝的中間產(chǎn)物， 且參與輔酶A 的組成，在機(jī)體代謝、肝臟解毒和激素合成等方面發(fā)揮重要作用（曾李，2018）。 研究表明，CS 可以通過調(diào)控下丘腦生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）/生長(zhǎng)激素釋放抑制激素（SS）-生長(zhǎng)激素（GH）-胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF）軸，促進(jìn)機(jī)體消化、代謝和生長(zhǎng)（Bai 等，2019；Zhou 等，2017）。 此外，CS還具有提高動(dòng)物機(jī)體免疫能力、 抗氧化能力和緩解動(dòng)物應(yīng)激反應(yīng)等功能（王仁華，2015）。 歐洲藥品評(píng)估局（EMA）已將其納入“無需制定最大殘留量” 的有機(jī)物類別中， 可用于畜牧業(yè)生產(chǎn)（張會(huì)會(huì)等，2021）。

復(fù)合酶制劑是由一種或多種單一酶制劑為主體，加上其他酶制劑混合而成的，具有高度的催化作用（周財(cái)源，2020）。 有研究表明，在反芻動(dòng)物日糧中添加以纖維素酶和木聚糖酶為主的復(fù)合酶制劑，可以破壞植物細(xì)胞壁，消除抗?fàn)I養(yǎng)因子，增加動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收， 從而提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能（解祥學(xué)，2016）。 由于CS 不穩(wěn)定的化學(xué)性質(zhì)，其極易在反芻動(dòng)物瘤胃中降解，因此本試驗(yàn)采用過瘤胃半胱胺（RP-CS），擬探究RP-CS 和復(fù)合酶制對(duì)后備湖羊母羊生長(zhǎng)性能、生長(zhǎng)激素指標(biāo)、抗氧化指標(biāo)、繁殖激素指標(biāo)、血液蛋白質(zhì)指標(biāo)、血糖和血清脂類物質(zhì)的影響， 為其在舍飼湖羊生產(chǎn)中提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 本試驗(yàn)于2021 年5 月至7 月在圖木舒克市兵團(tuán)50 團(tuán)夏河營(yíng)萬只羊養(yǎng)殖場(chǎng)合作社進(jìn)行。試驗(yàn)選用2 月齡、體重（19.00±0.86）kg、健康的湖羊75 只，隨機(jī)分為5 組，每組3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5 只羊。 對(duì)照組（T1 組）飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0.16%過瘤胃半胱胺（T2 組）、0.16%復(fù)合酶制劑（T3 組）、0.16%過瘤胃半胱胺和0.16%復(fù)合酶制劑（T4 組）。RP-CS 為長(zhǎng)沙綠拓生物科技有限公司產(chǎn)品。 復(fù)合酶為SUNSON 夏盛酶生物有限公司產(chǎn)品，原料組成為纖維素酶（活力≥100 U/g）、木聚糖酶（活力≥500 U/g）、β-葡聚糖酶（活力≥500 U/g）、 中性蛋白酶（活力≥500 U/g）和果膠酶（活力≥200 U/g），載體為稻殼粉和麥飯石。 參照NRC（2007）營(yíng)養(yǎng)需要配制基礎(chǔ)飼糧，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。 試驗(yàn)預(yù)試期7 d，正式期60 d。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)羊統(tǒng)一編號(hào)，抽血進(jìn)行布病檢測(cè)，消毒藥浴剪毛，飼養(yǎng)在半開放式羊舍內(nèi)。 定期對(duì)羊進(jìn)行驅(qū)蟲，對(duì)羊舍進(jìn)行消毒，保持羊和羊圈干凈衛(wèi)生。 每天09:30 和21:30 以全混合日糧（TMR）的形式等量飼喂，自由飲水。 每日根據(jù)前1 d 剩余料情況，調(diào)整飼喂量，保證飼料有少量剩余，但不超過飼喂量的10%。

1.3 樣本采集 試驗(yàn)期間仔細(xì)觀察羊的采食、飲水和排糞、排尿規(guī)律以及其精神狀態(tài)，做好日常記錄。每次飼喂前清理料槽并對(duì)剩料進(jìn)行稱重記錄，計(jì)算平均日采食量（ADFI）；在試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)早晨對(duì)試驗(yàn)羊空腹稱重并記錄， 計(jì)算平均日增重（ADG）。 ADG/（g/d）=（試驗(yàn)?zāi)┲?試驗(yàn)初始重）/試驗(yàn)天數(shù)；并根據(jù)ADFI 和ADG 計(jì)算耗料增重比（F/G）=ADFI/ADG。 試驗(yàn)第60 天時(shí)， 進(jìn)行頸靜脈采血，將采集的血液置于5 mL 離心管中，然后4 ℃、1980×g離心15 min 后析出血清， 將析出血清倒入新的離心管并置于-20 ℃冰箱保存待測(cè)。

1.4 指標(biāo)測(cè)試 血清中總蛋白 （TP）、 白蛋白（ALB）、球蛋白（GLU）、白球比（A/G）、血糖（GLU）、總膽固醇（CHOL）和甘油三酯（TG）等血液生化指標(biāo)含量于湖南省長(zhǎng)沙市中醫(yī)醫(yī)院檢測(cè)中心采用全自動(dòng)生化儀測(cè)定（Cobas c311）。根據(jù)試劑盒說明書采用比色法測(cè)定血清中丙二醛（MDA）含量、總抗氧化能力 （T-AOC） 及總超氧化物歧化酶 （TSOD）、 過氧化氫酶 （CAT）、 谷胱甘肽過氧化酶（GSH-Px）、綿羊生長(zhǎng)激素（GH）、綿羊胰島素樣生長(zhǎng)因子1（IGF-1）、綿羊孕酮（PROG）、綿羊雌二醇（E2）、 綿羊促卵泡素 （FSH） 和綿羊黃體生成素（LH）活性，抗氧化指標(biāo)的試劑盒購自南京建成生物工程研究所（南京，中國），繁殖激素指標(biāo)的試劑盒購自江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司（江蘇，中國）。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用一般線性模型，以不同添加劑處理為固定因素， 體重?cái)?shù)據(jù)另以初始體重為協(xié)方差進(jìn)行差異性檢驗(yàn)， 其余數(shù)據(jù)不采用協(xié)方差進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 組間多重比較采用Sidak 法。 以alpha=0.05 水平判斷顯著性，數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果

2.1 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊生長(zhǎng)性能的影響 由表2 可知，與對(duì)照組相比，T2 組和T4 組的終末體重 （FBW） 分別提高了15.35%和14.81%（P＜0.01），T2 組、T3 組和T4組的ADG 分別提高了30.97%、12.26%、27.74%（P＜0.01），T2 組、T3 組和T4 組的ADFI 分別降低了4.33%、3.95%、3.10%（P＜0.05），T2 組、T3 組和T4 組的F/G 分別降低了26.98%、14.51%、24.22%（P＜0.05）。

表2 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊生長(zhǎng)性能的影響

2.2 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊血清生長(zhǎng)激素與繁殖激素指標(biāo)的影響 由表3可知， 與對(duì)照組相比，T2 組、T3 組和T4 組的GH水平分別提高了12.01%、12.24%、11.85%（P＜0.01），T3 組和T4 組的IGF-1 水平分別提高了17.48%和21.37%（P＜0.01），各組的E2、P4、FSH和LH 水平均差異不顯著（P＞0.05）。

表3 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊血清生長(zhǎng)激素與繁殖激素指標(biāo)的影響

2.3 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊血清抗氧化指標(biāo)的影響 由表4 可知， 與對(duì)照組相比，T2 組、T3 組和T4 組的MDA 含量分別降低了30.15%、27.88%、29.39%（P＜0.01），T-AOC含量分別提高了5.00%、3.75%、3.75%（P＜0.05），CAT 活性分別提高了9.80%、8.96%、11.61%（P＜0.01），GSH-Px 活性分別提高了36.33%、15.48%、20.64%（P＜0.01）。 各組的T-SOD 水平差異不顯著（P＞0.05）。

表4 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊血清蛋白質(zhì)和血糖指標(biāo)的影響 由表5 可知，與對(duì)照組相比，T2 組、T3 組和T4 組的TP 水平分別提高了5.81%、3.19%、4.97%（P＜0.01），GLU水平分別提高了12.02%、12.32%、12.32%（P＜0.01）。各組的ALB 水平、GLO 水平和A/G 差異不顯著（P＞0.05）。

表5 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊血液蛋白質(zhì)和血糖指標(biāo)的影響

2.5 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊血清脂類物質(zhì)的影響 由表6 可知， 各組的CHOL 水平和TG 水平差異不顯著（P＞0.05）。

表6 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊脂類物質(zhì)的影響mmol/L

3 討論

3.1 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊生長(zhǎng)性能的影響 機(jī)體的GHRH/SS-GH-IGF軸在動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育中起到重要調(diào)控作用。 CS主要通過GHRH 和SS 來調(diào)控GH 分泌，CS 具有氨基和巰基，可以與SS 分子直接作用，使SS 的二硫鍵發(fā)生改變，并促進(jìn)GH 的分泌，而GH 能夠促進(jìn)IGF 合成。GH 在體內(nèi)的分泌主要受到SS的抑制（宋天增，2014）。 本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.16% RP-CS、0.16%復(fù)合酶制劑或二者聯(lián)用，均可顯著提高后備湖羊母羊的ADG，并且顯著降低ADFI 和F/G。有研究發(fā)現(xiàn)，在綿羊或山羊日糧中添加不同劑量的半胱胺可顯著提高動(dòng)物的ADG 并且顯著降低F/G （李蔭柱等，2021；金水仙等，2014； 宋天增等，2014）。 王峰等（2011）研究發(fā)現(xiàn)，給海南和牛飼喂添加1.0 kg/t 的復(fù)合酶制劑能顯著提高海南和牛的ADG 并且顯著降低F/G。 本試驗(yàn)結(jié)果與上述結(jié)果相似，表明添加RP-CS 和復(fù)合酶制劑可提高反芻動(dòng)物生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，添加復(fù)合酶制劑或RP-CS 與復(fù)合酶制劑聯(lián)用可以提高血清IGF-1 水平，這可能是由于RP-CS 耗竭SS 導(dǎo)致內(nèi)源性GH 水平升高，進(jìn)而也促進(jìn)了IGF-1 的分泌，從而促進(jìn)了后備湖羊母羊的生長(zhǎng)發(fā)育。

3.2 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊血清抗氧化指標(biāo)的影響 細(xì)胞功能的發(fā)揮及其活力在很大程度上依賴于機(jī)體中氧化還原狀態(tài)的平衡，當(dāng)機(jī)體內(nèi)的活性氧自由基（ROS）過量時(shí)，便會(huì)破壞機(jī)體氧化還原的平衡，從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的大分子物質(zhì)（脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA）過度氧化， 形成脂質(zhì)過氧化物如MDA、 酮基和羧基等，破壞細(xì)胞膜完整性，最終造成細(xì)胞的功能退化甚至細(xì)胞凋亡（Mbikay，2012）。 T-AOC 是衡量動(dòng)物機(jī)體應(yīng)對(duì)氧化應(yīng)激抵抗能力強(qiáng)弱的主要參數(shù)， 反映酶促體系和非酶促體系對(duì)外來刺激的代償能力以及機(jī)體自由基代謝的情況。 MDA 是膜脂過氧化指標(biāo)， 可間接反映細(xì)胞氧化受損程度（李蔭柱等，2021）。 本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加RP-CS、復(fù)合酶制劑或二者聯(lián)用均可以降低血液中的MDA 含量，提高血清中T-AOC 水平。 以上結(jié)果表明， 飼糧中添加適量的RP-CS 或復(fù)合酶制劑可以增強(qiáng)后備湖羊母羊?qū)ρ趸瘧?yīng)激的抵抗能力，保護(hù)機(jī)體細(xì)胞免受氧化損傷。 其原因可能是由于RP-CS 中含有還原性的氨基和巰基，可以清除自由基從而保護(hù)生物大分子中的巰基免受氧化， 還能通過自身途徑或間接地提高抗氧化酶的活性，其中T-SOD、CAT 和GSH-Px 等構(gòu)成了抵抗自由基的內(nèi)源性細(xì)胞屏障， 這些酶的作用是將活性物質(zhì)轉(zhuǎn)化為非自由基和無毒的產(chǎn)物（Surai，2015）。 而復(fù)合酶制劑（主要為纖維素酶，活力≥290 U/g）可以提高T-AOC 和SOD 活力， 增強(qiáng)機(jī)體清除過氧化物的能力 （黃曉飛，2022）。 綜合來看，RP-CS 和復(fù)合酶制劑具有提高機(jī)體抗氧化功能的作用。

CAT 可以避免羥基自由基的產(chǎn)生，以保護(hù)細(xì)胞成分免受氧化損傷（Ashok，2003）。 T-SOD 通過降低超氧陰離子的穩(wěn)態(tài)來保護(hù)細(xì)胞免受ROS 的傷害，終止自由基連鎖反應(yīng)，并可將超氧化物轉(zhuǎn)化為過氧化氫，再由機(jī)體的CAT 或GSH-Px 轉(zhuǎn)化為水， 減少超氧化物對(duì)細(xì)胞的損害， 進(jìn)而修復(fù)細(xì)胞（崔明宇等，2021；Curtis 等，1972）。 GSH-Px 可以降解膽固醇過氧化物， 降低脂質(zhì)過氧化作用對(duì)機(jī)體的損傷，在保持機(jī)體細(xì)胞內(nèi)自由基相對(duì)平衡，避免細(xì)胞內(nèi)外有害物質(zhì)對(duì)膜系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能破壞中發(fā)揮重要作用（邵延萱，2021）。 本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加RP-CS、復(fù)合酶制劑或二者聯(lián)用均可以提高血清中CAT 和GSH-Px 含量，這說明在后備湖羊母羊日糧中添加RP-CS 或復(fù)合酶制劑可以提高后備湖羊母羊血液中的CAT 和GSH-Px 含量，通過減少超氧化物對(duì)細(xì)胞的損害， 從而保護(hù)細(xì)胞成分免受氧化損傷。

3.3 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊血清生長(zhǎng)和繁殖相關(guān)激素的影響 繁殖性能是決定后備母羊品質(zhì)的重要性能之一，母羊繁殖性能主要受到下丘腦-垂體-性腺軸激素的作用，其中FSH、LH、E2 和P4 是重要的調(diào)控激素（Hollander 等，2021；Raz 等，2014；Bartlewski 等，2000）。王俊花（2020）發(fā)現(xiàn)，飼料中添加復(fù)合酶制劑（主要為蛋白酶，活力≥3000 U/g，木聚糖酶，活力≥2000 U/g，纖維素酶，活力≥1000 U/g）可以顯著提高伊犁鵝的血清中的FSH 和LH 含量，提示復(fù)合酶制劑能有效提高動(dòng)物繁殖性能。 但在本試驗(yàn)中并未發(fā)現(xiàn)日糧中添加RP-CS 或復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊的繁殖激素指標(biāo)存在顯著影響。推測(cè)是RP-CS 和酶制劑的添加劑量不同、酶制劑組合或物種不同所引起的。

3.4 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊血清蛋白質(zhì)和血糖指標(biāo)的影響 動(dòng)物血液生化指標(biāo)是動(dòng)物遺傳和環(huán)境相互作用的結(jié)果，反映了動(dòng)物生命活動(dòng)、營(yíng)養(yǎng)代謝和身體健康狀況。TP 濃度的高低反映了動(dòng)物體蛋白質(zhì)合成代謝的快慢，ALB 的主要作用是調(diào)節(jié)細(xì)胞外環(huán)境并運(yùn)輸維生素、 激素以及脂類物質(zhì)， 血液中ALB 和TP 可以反映體內(nèi)能量代謝的情況以及肝臟是否受損 （陳志蒙等，2022； 高天爽，2014）。 李奎（2016）在安格斯肉牛的日糧中添加三組不同酶活力復(fù)合酶制劑 （三組復(fù)合酶制劑均為纖維素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶），結(jié)果為三個(gè)試驗(yàn)組血清中TP 含量顯著高于對(duì)照組。 與此研究結(jié)果類似，本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加RP-CS、復(fù)合酶制劑或二者聯(lián)用均可以提高血清中TP 含量。這表明在后備湖羊母羊日糧中添加RP-CS 和復(fù)合酶制劑可以提高蛋白質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)的合成速度。 原因可能是通過提高IGF-1 水平促進(jìn)了細(xì)胞增殖，并通過自分泌、內(nèi)分泌和旁分泌作用于靶細(xì)胞，改變合成代謝，提升DNA 和RNA 的轉(zhuǎn)錄翻譯水平， 進(jìn)而促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成 （王玲，2016）。

反芻動(dòng)物調(diào)節(jié)血糖濃度的能力很強(qiáng)，可以保持血糖水平的相對(duì)穩(wěn)定（汪水平等，2007）。 動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的糖代謝對(duì)動(dòng)物維持健康和保證動(dòng)物的生產(chǎn)性能具有重要意義， 血液中GLU 含量可作為反映機(jī)體營(yíng)養(yǎng)和健康狀況的重要指標(biāo) （鐘華配，2020）。 本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加RP-CS、復(fù)合酶制劑或二者聯(lián)用均可以提高血清中GLU 水平。 類似地，李冬梅等（2007）在日糧中分別添加10、15、20 mg/kg BW 的CS 發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組的GLU水平顯著高于對(duì)照組。 原因可能在于CS 可促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體對(duì)糖原的消化、吸收或轉(zhuǎn)化。

3.5 過瘤胃半胱胺和復(fù)合酶制劑對(duì)后備湖羊母羊血清脂類指標(biāo)的影響 血漿中CHOL 和TG水平的變化能反映出機(jī)體脂類代謝的情況。 李冬梅等（2007）在日糧中分別添加10、15、20 mg/kg BW 的CS， 發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組的CHOL 水平與對(duì)照組相比并不顯著。 類似地，本試驗(yàn)各組血清CHOL和TG 水平之間無顯著差異，說明此劑量的RPCS 和復(fù)合酶制劑對(duì)此試驗(yàn)條件下的后備湖羊母羊血清CHOL 和TG 水平無顯著影響。 然而，T2組、T3 組和T4 組TG 水平有低于T1 組的趨勢(shì)（P=0.07）， 這說明添加適量RP-CS 或酶制劑有降低后備湖羊母羊血液中CHOL 水平的趨勢(shì)，能減少血清中脂類物質(zhì)的含量。 有研究發(fā)現(xiàn)，CS可以降低高脂日糧飼喂小鼠血脂含量， 維持肝臟脂肪代謝穩(wěn)定（鄭建良，2007），復(fù)合酶制劑可以影響機(jī)體脂肪沉積（聞治國，2017）。 研究結(jié)果表明RP-CS 或酶制劑對(duì)機(jī)體脂代謝有一定的改善作用。

4 結(jié)論

本研究表明， 飼糧中添加0.16% RP-CS、0.16%復(fù)合酶制劑或二者聯(lián)用對(duì)后備湖羊母羊的繁殖激素和血液中脂類物質(zhì)無明顯影響，但是可以顯著提高后備湖羊母羊的生長(zhǎng)性能、血液中抗氧化能力以及血糖水平和總蛋白水平，且0.16%的過瘤胃半胱胺組效果最好，提示本試驗(yàn)中的RP-CS 及其復(fù)合酶制劑作為飼料添加劑， 在畜禽生產(chǎn)中具備較好促生長(zhǎng)作用和應(yīng)用前景。