李由由, 盧 丹

(揚州大學臨床醫(yī)學院 婦產(chǎn)科, 江蘇 揚州, 215000)

上皮性卵巢癌(EOC)是卵巢惡性腫瘤中最常見的類型,病死率位居婦科惡性腫瘤的首位。目前手術(shù)治療和以鉑類藥物為基礎的聯(lián)合化療為主要治療手段[1]。雖然多數(shù)患者初次治療反應較好,但75%的晚期卵巢癌患者3年內(nèi)會出現(xiàn)腫瘤復發(fā)[2], 影響患者生存狀態(tài)。配對盒基因8(PAX8)是Mullerian管的正常發(fā)育所必需的,是促進腫瘤細胞增殖及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要介質(zhì)[3-4]。波形蛋白是中間絲蛋白家族中表達最廣泛且高度保守的蛋白質(zhì)之一,參與腫瘤細胞凋亡、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、血管生成等病理、生理過程[5]。本研究探討上皮性卵巢癌組織中PAX8、波形蛋白表達水平與臨床病理特征及化療后復發(fā)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

根據(jù)納入及排除標準,選取2018年1月—2021年12月于本院治療并經(jīng)病理確診的86例上皮性卵巢癌患者為研究對象,患者年齡33～75歲,平均(56.1±9.7)歲。納入標準: ① 術(shù)前未接受治療者; ② 入院后接受手術(shù)治療(全面分期術(shù)或腫瘤細胞減滅術(shù))者; ③ 術(shù)后接受鉑類藥物為基礎的化療≥4次者; ④ 臨床及術(shù)后隨訪資料完整者。排除標準: ① 術(shù)前接受新輔助化療患者; ② 合并其他腫瘤、嚴重基礎疾病、自身免疫性疾病者; ③ 臨床病理資料不完整,未定期復查,失訪患者。通過電話、門診定期復查隨訪,隨訪截止時間為2023年1月1日,以患者復發(fā)為終點事件,隨訪期間復發(fā)40例,未復發(fā)46例; 復發(fā)患者均為首次復發(fā),通過臨床表現(xiàn)、血清腫瘤標志物測定、超聲或CT檢查確診。臨床數(shù)據(jù)資料見表1。

表1 上皮性卵巢癌病例臨床資料和病理特征

1.2 免疫組織化學法檢測

手術(shù)切除標本經(jīng)福爾馬林固定和石蠟包埋,常規(guī)將標本均制備成厚度為4 μm的切片,按流程脫蠟至水,使用3%過氧化氫20 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,隨后進行抗原修復,一抗孵育過夜,溫度4 ℃。復溫后PBS洗滌3次, 3 min/次,加入二抗孵育,使用DAB盒顯色,蘇木素進行復染,氨水返藍后沖洗,脫水、透明以及封片。PAX8蛋白定位于細胞核中,其染色陽性表現(xiàn)為棕黃色或褐色顆粒。波形蛋白陽性染色為細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃色、棕黃色或棕褐色顆粒。使用PBS替代一抗為陰性對照。嚴格按照試劑盒說明書進行操作,試劑盒由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。本研究獲本院倫理委員會批準。

1.3 結(jié)果判讀

高倍鏡視野下根據(jù)細胞染色強度與陽性細胞百分比進行綜合評分。① 細胞染色強度評分:無色為0分; 淡黃色為1分; 棕色為2分; 棕褐色為3分。② 根據(jù)陽性細胞百分比進行評分: 陽性細胞<10%為0分, 10%～50%為1分, >50%～75%為2分, >75%為3分。③ 計算陽性細胞百分比得分與著色強度得分乘積, ≥3分為陽性表達,<3分為陰性表達。結(jié)果判讀由蘇北人民醫(yī)院2名高年資的病理醫(yī)師在雙盲情況下共同完成。

1.4 觀察指標

根據(jù)門診隨訪結(jié)果,通過臨床癥狀評估、影像學檢查和糖類抗原125(CA125)水平等來評估腫瘤復發(fā)情況。滿足下列5項指標中的任意2項可定義為腫瘤復發(fā)[6]: ① 腫瘤標志物升高, CA125>35 U/mL為陽性,人附睪蛋白4(HE4)>72 pmol/L為陽性; ② 影像學檢查發(fā)現(xiàn)腫塊; ③ 查體發(fā)現(xiàn)腫塊; ④ 原因未明的腸梗阻; ⑤ 胸腔積液或腹水。

1.5 統(tǒng)計學方法

使用SPSS 26.0軟件進行統(tǒng)計學分析,計數(shù)資料用[n(%)]表示,組間差異比較采用χ2檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 PAX8、波形蛋白在卵巢癌中的表達情況

PAX8定位于細胞核中,其染色陽性者細胞核染成棕黃色(圖1); 波形蛋白染色陽性表現(xiàn)為細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃色、棕黃色或棕褐色顆粒(圖2); 本研究納入的86例卵巢癌組織中, PAX8呈陽性表達70例,波形蛋白呈陽性表達48例,陽性率分別為81.4%、55.8%。

A: 上皮性卵巢癌中PAX8表達陽性; B: 上皮性卵巢癌中PAX8表達陰性。圖1 上皮性卵巢癌中PAX8陽性及陰性表達(免疫組化法,放大100倍)

A: 上皮性卵巢癌中波形蛋白表達陽性; B: 上皮性卵巢癌中波形蛋白表達陰性。圖2 上皮性卵巢癌中波形蛋白陽性及陰性表達(免疫組化法,放大100倍)

2.2 PAX8、波形蛋白表達與臨床病理特征關(guān)系

PAX8、波形蛋白陽性表達均與腫瘤臨床分期、腹水、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05), 見表2、表3。

表2 PAX8在上皮性卵巢癌中表達情況

表3 波形蛋白在上皮性卵巢癌中表達情況

2.3 PAX8、波形蛋白與上皮性卵巢癌化療后復發(fā)關(guān)系

截至隨訪日期,上皮性卵巢癌患者化療后復發(fā)40例,未復發(fā)46例,復發(fā)率46.5%。復發(fā)患者中, PAX8、波形蛋白陽性表達率高于陰性表達率,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PAX8、波形蛋白共同表達陽性與上皮性卵巢癌復發(fā)有顯著相關(guān)性(P<0.001), 見表4。

表4 PAX8、波形蛋白表達與上皮性卵巢癌化療后復發(fā)的關(guān)系[n(%)]

3 討 論

卵巢癌是最致命的婦科惡性腫瘤,盡管近年來卵巢癌的檢測方法和治療手段在不斷進步,但由于腫瘤異質(zhì)性,仍缺乏可靠的早期診斷方法,且治療后復發(fā)率高仍是一個全球性的問題[7-9]。PAX8具有促進細胞增殖、抑制凋亡和終末分化的作用,與胚胎發(fā)育、器官的分化有關(guān)[10]。同時, PAX8是Mullerian系統(tǒng)組織的重要轉(zhuǎn)錄因子,參與了輸卵管和子宮上皮的形成過程,在子宮頸和子宮內(nèi)膜上皮細胞中可見廣泛彌散的強染色,而在正常卵巢上皮細胞中幾乎不表達[3, 11-12]。相關(guān)研究[13-14]表明, PAX8可以與卵巢癌中突變的p53基因結(jié)合,導致細胞質(zhì)p21積累,發(fā)揮促癌增殖作用。而敲除PAX8可抑制癌細胞的增殖、遷移和侵襲,促進凋亡的發(fā)生。

波形蛋白是一種可以維持細胞骨架的完整性的中間纖維蛋白,是EMT典型標志之一,可使內(nèi)皮細胞的增生能力增強,血管內(nèi)皮細胞持續(xù)增殖、分裂,促進腫瘤的生長[15-16]。腫瘤侵襲性表型與波形蛋白過度表達呈正相關(guān),并且在體外敲除波形蛋白后這些腫瘤侵襲性特征會下降[17]。本研究發(fā)現(xiàn),上皮性卵巢癌中PAX8、波形蛋白陽性表達與上皮性卵巢癌進展的嚴重程度和侵襲性生物學行為具有密切聯(lián)系,提示PAX8、波形蛋白不僅可作為病情診斷的有效指標,還可用作上皮性卵巢癌患者化療后復發(fā)的預測指標。

綜上所述,上皮性卵巢癌組織中PAX8和波形蛋白表達與腫瘤臨床分期、腹水、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及化療后復發(fā)關(guān)系密切,可用于評估病情進展,預測復發(fā),有助于個體化指導臨床治療,臨床應加強隨訪,以期降低復發(fā)率,延長患者生存期。但本研究納入的樣本量較少,各層樣本篩選的占比差異較大,仍需要進行更深入細致的研究。