喬 奕,鄭美辰,盛鑫如,張 帥,周君宣,李 萌,周 鑫,王 碩,陳 芳

(聊城大學(xué) 藥學(xué)院,山東 聊城 252059)

1 引言

楊黃隸屬于擔(dān)子菌門,層菌綱,非褶菌目,銹菌科,木(葉)層孔菌屬,是一種附生于楊樹、柳樹、樺樹等闊葉樹干的多年生真菌。我國(guó)是楊黃菌出口大國(guó),擁有世界上非常豐富的藥用真菌資源,東北、云南和川西是我國(guó)著名的三大真菌產(chǎn)地。楊黃具有重要的藥用價(jià)值,名氣雖遜于冬蟲夏草,但其功效非常顯著。有相關(guān)研究表明,楊黃提取物能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞進(jìn)入死亡程序,同時(shí)具有較強(qiáng)的抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移作用[1-5]。結(jié)腸炎(colitis)是指各種原因引起的結(jié)腸炎癥性病變。致病原因主要由細(xì)菌、真菌、病毒、寄生蟲、原蟲等生物與變態(tài)反應(yīng)及理化因子引起,而楊黃多糖在治療潰瘍性結(jié)腸炎方面具有可觀的作用[6]。楊黃菌大多為野生,在人工林中難以找到,要獲取子實(shí)體人工栽培為可行途徑。但楊黃菌菌絲體的培養(yǎng)特性少見(jiàn)報(bào)道。為了更好地發(fā)揮其經(jīng)濟(jì)、生態(tài)和社會(huì)價(jià)值,故選擇山東聊城臨清市楊黃菌對(duì)其固體、液體培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化,以便獲得更高產(chǎn)量、更優(yōu)品質(zhì)的楊黃菌。通過(guò)建立潰瘍性結(jié)腸炎模型來(lái)研究楊黃菌中活性物質(zhì)對(duì)結(jié)腸炎的抑制作用。

2 材料與方法

2.1 實(shí)驗(yàn)材料

2.1.1 材料。楊黃菌(Phellinus Vaninii),分離自楊黃子實(shí)體。

2.1.2 原種培養(yǎng)基配方。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

按照原種配方制備固體培養(yǎng)基(需添加1.5%瓊脂),將培養(yǎng)皿與配置好的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌,條件為115 ℃、20 min;在超凈工作臺(tái)中將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿,等待其冷卻凝固;用接種針取適量臨清楊黃的孢子接種到平板中,做好標(biāo)記。注意全程無(wú)菌操作,避免雜菌入侵、污染楊黃菌。將接種好的平板放于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),在28 ℃下培養(yǎng)3天,可觀察到明顯的白色絲狀物。取適量制成臨時(shí)裝片置于顯微鏡下觀察,確定為楊黃菌絲。繼續(xù)培養(yǎng)1～2天,菌絲由白色變?yōu)辄S色,約7天左右顏色加深,顯黃褐色。各個(gè)時(shí)期菌絲形態(tài)如圖1所示。

圖1 不同培養(yǎng)時(shí)期的菌絲初期形態(tài)

表1 原種培養(yǎng)基配方

將楊黃菌接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),28 ℃、200 r/min下在搖床內(nèi)避光培養(yǎng)7天,形成白色菌絲球。使用原種配方固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的楊黃菌不僅生長(zhǎng)緩慢,且后期易老化,由此考慮到該培養(yǎng)基配方是否為培養(yǎng)楊黃菌的最佳配方,進(jìn)而對(duì)培養(yǎng)基配方進(jìn)行更改優(yōu)化,以便縮短培養(yǎng)周期、獲得高質(zhì)量的楊黃菌。

2.2.1 固體培養(yǎng)基優(yōu)化。選擇最優(yōu)的碳源和氮源:實(shí)驗(yàn)選用4種原料(麩皮、雜木屑、蔗糖、無(wú)水葡萄糖)作碳源比較, 如表3所示;選擇4種原料(麩皮、蛋白胨、豆粕粉、玉米粉)作氮源比較,如表4所示。選取常用的磷酸二氫鉀和硫酸鎂作為無(wú)機(jī)離子,消泡劑1滴,使用無(wú)菌水溶解。配方用量及培養(yǎng)基分裝、滅菌照2.2方法進(jìn)行。每組三個(gè)固體培養(yǎng)基,分別轉(zhuǎn)接在原種平板上生長(zhǎng)的楊黃菌,放入28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10天。采用L9(3)4正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),根據(jù)上述篩選出來(lái)的最優(yōu)碳源和氮源以及無(wú)機(jī)離子的質(zhì)量濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)

表2 疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表3 碳源比較

表4 氮源比較

2.2.2 液體培養(yǎng)基優(yōu)化。豆粕是大豆經(jīng)浸提或預(yù)壓浸提制油工藝后經(jīng)適當(dāng)熱處理與干燥而制成的產(chǎn)品[7]。豆粕經(jīng)過(guò)進(jìn)一步加工生產(chǎn)得到的豆粕粉具有較高的蛋白含量和較好的利用率,廣泛應(yīng)用于飼養(yǎng)業(yè)中。豆粕粉與其他同等作用的材料相比,具有營(yíng)養(yǎng)豐富、價(jià)格較低、易儲(chǔ)存且能夠促生長(zhǎng)的優(yōu)點(diǎn),由此選擇豆粕粉作為備選氮源之一進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。評(píng)價(jià)指標(biāo)為菌絲體干重、胞外多糖、胞內(nèi)多糖。

選擇無(wú)水葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉為碳源,蛋白胨、豆粕粉、牛肉膏、酵母粉為氮源,進(jìn)行楊黃菌液體培養(yǎng)碳源和氮源的選擇性試驗(yàn),選擇出液體培養(yǎng)基最優(yōu)碳源和氮源。

對(duì)正交實(shí)驗(yàn)極差進(jìn)行分析,因素A即無(wú)水葡萄糖的影響最大,其次為B(蛋白胨+豆粕粉)、C(硫酸鎂)和D(磷酸二氫鉀),綜合考慮各評(píng)價(jià)指標(biāo)平均值以及主要影響因素,確定了最優(yōu)組合為A3B1C3D2。

2.2.3 楊黃菌絲體多糖對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的抑制作用研究。有相關(guān)研究表明,用楊黃提取物處理大鼠的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),楊黃提取物能夠降低患肺炎大鼠體內(nèi)的炎癥細(xì)胞,包括中性粒細(xì)胞的數(shù)量和白介素(IL)-1β的水平[8]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立小鼠結(jié)腸炎模型來(lái)進(jìn)一步探究楊黃菌多糖的抗炎作用。

2.2.3.1 楊黃菌絲體多糖的提取。將楊黃菌培養(yǎng)液在200 r/min離心15 min,取菌絲體置于干燥箱中烘干,研磨獲得楊黃菌絲體干粉。用無(wú)菌水進(jìn)行二次提取,將水提結(jié)束后的溶液并液濃縮。提取時(shí)水的用量相當(dāng)于有效成分的50倍,90 ℃下煎煮兩次,每次煎煮2 h。在此工藝條件下提取水溶性多糖操作簡(jiǎn)單、易行,方法重現(xiàn)性好[9-11]。

2.2.3.2 結(jié)腸炎模型的建立。健康昆明小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)后10只一組隨機(jī)分為5組:空白對(duì)照組(Control組),結(jié)腸炎模型組(DSS組)、楊黃多糖低劑量組(L組)、高劑量組(H組)、陽(yáng)性對(duì)照組(SASP組)。連續(xù)14天空白組灌胃給予無(wú)菌蒸餾水,L、H組分別灌胃給予楊黃多糖溶液107CFU/(mL·kg)-1和109CFU/(mL·kg)-1,SASP組每天灌胃給予SASP 100 mg/kg,第8～14天除對(duì)照組為無(wú)菌蒸餾水外,其余組均用含3%葡聚糖硫酸鈉(DSS)的無(wú)菌水灌胃。飼養(yǎng)過(guò)程中每3天記錄體重和疾病活動(dòng)指數(shù)。在第15天,將以上5組小鼠禁食,取眼球血后頸椎脫臼處死,取出結(jié)腸,測(cè)量其長(zhǎng)度,取一部分結(jié)腸經(jīng)多聚甲醛固定,一部分保存于-80 ℃進(jìn)行生化分析。

2.2.3.3 疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)的評(píng)估。對(duì)造模后小鼠的體重、糞便黏度和便血等情況進(jìn)行評(píng)分如2表所示,每3天記錄一次疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分,以評(píng)估結(jié)腸炎的嚴(yán)重程度,評(píng)分的每一項(xiàng)指數(shù)均按0～4分進(jìn)行評(píng)分,0分表示無(wú)疾病癥狀,4分表示嚴(yán)重疾病癥狀。

2.2.3.4 小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度及結(jié)腸組織病理學(xué)分析。測(cè)量每組小鼠從盲腸到肛門的結(jié)腸長(zhǎng)度;采用HE染色法分析結(jié)腸組織病理變化。取出的小鼠的結(jié)腸組織,用4%多聚甲醛溶液固定,24 h后乙醇脫水,再經(jīng)乙醇和二甲苯脫水,用石蠟包埋制成蠟塊。將蠟塊用切片機(jī)制備5 μm切片并用蘇木精和伊紅染色,在光學(xué)顯微鏡下觀察各組小鼠結(jié)腸組織的病理變化。

2.2.3.5 小鼠炎癥因子、肝腎系數(shù)指標(biāo)的測(cè)定。取小鼠眼球血在4 ℃下3 000 r/mim離心10 min,取上清液在-80 ℃保存用于生化分析。對(duì)收集的血清使用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行炎癥因子、肝腎功能指標(biāo)測(cè)定,檢測(cè)每組小鼠血清中的炎癥因子(TNF-α,IFN-γ,IL-1β和IL-6)水平,同時(shí)采用ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)(上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、血清肌酐(CR)、血尿素氮(BUN)水平來(lái)檢測(cè)肝腎系數(shù)指標(biāo)。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同碳源、氮源對(duì)固體培養(yǎng)基優(yōu)化的影響

表3、表4分別為不同碳源、氮源的固體培養(yǎng)基中楊黃菌的菌體干重,通過(guò)比較可以看出,以無(wú)水葡萄糖為碳源菌絲體干重最高,以豆粕粉為氮源菌絲體干重最高、以蛋白胨為氮源菌絲體干重較高。

設(shè)計(jì)L9(3)4正交實(shí)驗(yàn),根據(jù)篩選出來(lái)的最佳碳源、氮源以及無(wú)機(jī)離子的質(zhì)量濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn),結(jié)果如表5所示。

表5 固體培養(yǎng)基優(yōu)化正交實(shí)驗(yàn)

采用直觀分析法分析表5顯示的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果,按照統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算方差得到較優(yōu)組合是A2B3C1D2。從R極差的大小來(lái)看,A>B>C>D,說(shuō)明在4個(gè)因素中影響菌絲生長(zhǎng)發(fā)育的最主要的因素是碳源,其他因素依次是氮源、硫酸鎂和磷酸二氫鉀。對(duì)于楊黃菌固體培養(yǎng)基,最優(yōu)的碳源、氮源組合為無(wú)水葡萄糖+蛋白胨。

3.2 液體培養(yǎng)基優(yōu)化分析

選擇不同碳源、氮源制備液體培養(yǎng)基對(duì)楊黃菌進(jìn)行培養(yǎng),通過(guò)測(cè)定菌絲體干重、胞外多糖濃度胞內(nèi)多糖的濃度來(lái)分析最佳碳源和氮源,結(jié)果如圖2所示。無(wú)水葡萄糖組和玉米粉組的評(píng)價(jià)指標(biāo)明顯高于其他組,且葡萄糖組更高;蛋白胨組和豆粕粉組的評(píng)價(jià)指標(biāo)高于其他組,且差別不大。

注:* p <0.05; * * p <0.01。圖2 (a)備選碳源; (b)氮源的選擇結(jié)果

綜合考慮,選擇無(wú)水葡萄糖為碳源、蛋白胨+豆粕粉為氮源進(jìn)行L9(3)4正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化楊黃菌液體培養(yǎng)基,如表6所示。

表6 液體培養(yǎng)基優(yōu)化正交實(shí)驗(yàn)

對(duì)正交實(shí)驗(yàn)極差進(jìn)行分析,因素A即無(wú)水葡萄糖的影響最大,其次為B(蛋白胨+豆粕粉)、C(硫酸鎂)和D(磷酸二氫鉀),綜合考慮各評(píng)價(jià)指標(biāo)平均值以及主要影響因素,確定了最優(yōu)組合為A3B1C3D2。

3.3 楊黃菌多糖能抑制DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎

3.3.1 降低結(jié)腸炎小鼠DAI。潰瘍性結(jié)腸炎小鼠最具典型的病理特征表現(xiàn)為體重下降,如圖3(a)所示,結(jié)腸炎組小鼠在第9天體重開(kāi)始明顯下降,第15天,其體重雖略有增加,但與空白組相比其體重下降顯著。與結(jié)腸炎組相比,楊黃菌多糖低劑量、高劑量組小鼠在第9天體重下降,但體重均高于結(jié)腸炎組小鼠的體重;第12天兩組小鼠的體重均開(kāi)始緩慢恢復(fù),第15天楊黃菌多糖組小鼠體重明顯高于結(jié)腸炎組且差異明顯。

注:* p <0.05; * * p <0.01,治療組vs DSS組。圖3 (a)不同組小鼠體重變化; (b)及體重變化率

小鼠疾病指數(shù)變化(DAI)如圖4所示,在整個(gè)試驗(yàn)期間空白組小鼠體重日漸增加(評(píng)分0),糞便情況正常(評(píng)分0),無(wú)糞便隱血情況(評(píng)分0),總計(jì)DAI值為0。與空白組相比,其他各組DAI值自實(shí)驗(yàn)第2天起均顯著升高,其中以DSS組DAI值最高。造模期間模型組、楊黃菌多糖高劑量組和低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組的DAI評(píng)分均高于空白組。在經(jīng)楊黃菌多糖(高、低劑量)和藥物的灌胃干預(yù)后,該兩組DAI評(píng)分明顯下降,與結(jié)腸炎組相比具有顯著性差異。

注:* p <0.05; * * p <0.01,治療組vs DSS組。圖4 不同組小鼠DAI變化

3.3.2 對(duì)小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度變化的影響以及組織病理學(xué)分析。DSS誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生結(jié)腸炎引起的結(jié)腸充血、水腫,結(jié)腸腸壁增厚、生成潰瘍面等都會(huì)使結(jié)腸長(zhǎng)度縮短,本實(shí)驗(yàn)選用結(jié)腸長(zhǎng)度為測(cè)量指標(biāo),小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度變化如圖5所示,DSS組結(jié)腸長(zhǎng)度明顯縮短,平均長(zhǎng)度為(6.75±0.43) cm,空白組為(8.51±0.30) cm。與DSS組相比,楊黃菌多糖低劑量和高劑量組的結(jié)腸長(zhǎng)度明顯長(zhǎng)于空白組,平均長(zhǎng)度分別為(8.45±0.24) cm和(8.13±0.35) cm,陽(yáng)性對(duì)照組為(7.52±0.51) cm。由此表明,楊黃多糖能減緩腸道炎癥使結(jié)腸長(zhǎng)度減少的趨勢(shì)且能夠有效抑制結(jié)腸縮短,并具有一定的促生長(zhǎng)作用。

圖5 結(jié)腸長(zhǎng)度

對(duì)結(jié)腸組織進(jìn)行HE染色,結(jié)果如圖6所示,空白組小鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞微絨毛整齊致密,含豐富杯狀細(xì)胞,無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。DSS組小鼠的結(jié)腸組織有明顯的隱窩變形、杯狀細(xì)胞丟失、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)以及黏膜損傷。與DSS組相比,楊黃多糖低劑量組和高劑量組小鼠結(jié)腸的隱窩上皮變形、杯狀細(xì)胞丟失情況較輕,黏膜炎癥程度明顯下降,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少,病變程度有所減輕。

注:(a) Control; (b) DSS; (c) DSS+PVP(H); (d) DSS+PVP(L) ; (e) DSS+SASP; (a～e):DSS結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織切片HE染色(200×)。圖6 結(jié)腸HE染色法切片

3.3.3 對(duì)小鼠炎癥因子、肝腎系數(shù)指標(biāo)的影響。結(jié)腸炎與促炎細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用有關(guān)[12],包括TNF-α, IL-6, IL-1β, IFN-γ。對(duì)小鼠結(jié)腸組織上清液的測(cè)定結(jié)果如圖7所示,DSS誘導(dǎo)后的小鼠血清中四種炎癥因子水平與空白組相比明顯增加。楊黃多糖低劑量、高劑量組以及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清中該四種因子水平較DSS組低。表明DSS誘導(dǎo)的小鼠水平明顯增加,而楊黃菌可在一定程度下調(diào)節(jié)血清中IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量,說(shuō)明楊黃可通過(guò)對(duì)炎癥因子的調(diào)節(jié)改善由于DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎。

注:楊黃多糖對(duì)炎癥因子(a) Ifn-γ; (b) IL-1β; (c) IL-6; (d) YNF-α; *p<0.05; **p<0.01。圖7 對(duì)炎癥因子分泌的影響

圖8為不同處理對(duì)小鼠肝腎系數(shù)的影響,DSS組谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、血清肌酐(CR)、血尿素氮(BUN)水平與對(duì)照組相比明顯升高。楊黃多糖組與模型組相比則降低。由此可知DSS組結(jié)腸炎小鼠ALT、AST、CR、BUN的活力明顯增加,而用楊黃菌干預(yù)后,小鼠ALT、AST、CR、BUN活力明顯減少,說(shuō)明楊黃菌對(duì)小鼠肝腎功能無(wú)顯著不良影響。

注:楊黃多糖對(duì)ALT、AST、CR、BUN的影響;(a) ALT含量; (b) AST含量; (c) CR含量; (d) BUN含量; * p <0.05, * * p <0.01,治療組vs DSS組。圖8 對(duì)肝腎系數(shù)的影響

4 討論

本研究采用山東聊城臨清市的楊黃菌子實(shí)體為材料,探索適合楊黃菌菌株培養(yǎng)的優(yōu)化培養(yǎng)基配方,所得優(yōu)化固體培養(yǎng)基配方為:無(wú)水葡萄糖2%、蛋白胨2%、磷酸二氫鉀0.06%、硫酸鎂0.06%、瓊脂1.5%。以豆粕粉為主要氮源的豆粕粉綜合培養(yǎng)基更適合楊黃菌液體培養(yǎng):無(wú)水葡萄糖2%、蛋白胨0.1%、豆粕粉0.35%、磷酸二氫鉀0.06%、硫酸鎂0.06%、消泡劑1滴。各培養(yǎng)基成分應(yīng)用常溫?zé)o菌水溶解,不要用溫水。將楊黃菌轉(zhuǎn)接后使用優(yōu)化培養(yǎng)基對(duì)其進(jìn)行固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng),不僅縮短了傳統(tǒng)培養(yǎng)的培養(yǎng)周期,而且獲得的楊黃菌質(zhì)量更高,為后續(xù)的擴(kuò)大培養(yǎng)以及應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

楊黃菌在抗炎、抗腫瘤、提高免疫力等方面表現(xiàn)出良好的藥理活性,其中對(duì)炎癥的緩解能力非?？捎^。本研究通過(guò)分析楊黃菌絲體多糖對(duì)結(jié)腸炎小鼠體重變化、DAI評(píng)分、結(jié)腸長(zhǎng)度、炎癥因子、肝腎系數(shù)、組織病理學(xué)等指標(biāo)的影響,證實(shí)了楊黃菌絲體多糖的抗炎作用。基于此,有望通過(guò)用楊黃菌活性提取物代替?zhèn)鹘y(tǒng)抗生素治療結(jié)腸炎,避免毒副作用和耐藥性,具有良好的治療效果。

以楊黃菌絲體干重、胞外多糖濃度、胞內(nèi)多糖濃度為指標(biāo),篩選出最適合楊黃菌菌株的液體培養(yǎng)基。以無(wú)水葡萄糖為碳源,以豆粕粉+蛋白胨為氮源的豆粕粉綜合培養(yǎng)基更適合楊黃的擴(kuò)大培養(yǎng)。豆粕粉中存在能促進(jìn)菌絲體生長(zhǎng)的效應(yīng)因子,將豆粕粉做為氮源和蛋白胨復(fù)合使用在28 ℃恒溫培養(yǎng)條件下,采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化所得該培養(yǎng)基的優(yōu)化配方如下:液體培養(yǎng)基配方為無(wú)水葡萄糖2%、蛋白胨0.1%、豆粕粉0.35%、磷酸二氫鉀0.06%、硫酸鎂0.06%、消泡劑1滴。從培養(yǎng)得到的楊黃菌中提取菌絲體多糖,通過(guò)建立小鼠的結(jié)腸炎模型研究證實(shí)其良好的抗?jié)冃越Y(jié)腸炎活性。

楊黃菌的藥用價(jià)值最早可以追溯到兩千年前《神農(nóng)本草經(jīng)》中的“桑耳”,具有提高人體免疫力、抗腫瘤、保肝護(hù)肝、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、治療痛風(fēng)、降血糖、抗血管生成等作用[13-15]。近年來(lái),對(duì)野生楊黃資源的過(guò)度開(kāi)發(fā)和利用,使得野生楊黃菌資源面臨枯竭的現(xiàn)狀。我國(guó)雖然早期就對(duì)楊黃菌進(jìn)行開(kāi)發(fā)與利用,但對(duì)其研究仍然處于初期,大眾社會(huì)對(duì)于楊黃菌的認(rèn)知度低,而日韓兩國(guó)對(duì)其的研究早于我國(guó)[16,17]。

為了挽救這一珍稀的藥用真菌,開(kāi)發(fā)其藥用價(jià)值,惠及大眾,對(duì)其進(jìn)行各方面的研究具有重大意義。將固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)結(jié)合,將傳統(tǒng)栽培方法與現(xiàn)代人工培育相結(jié)合,縮短原種培養(yǎng)基的培養(yǎng)周期,更快速地得到高質(zhì)量楊黃,提高楊黃菌人工培養(yǎng)和生產(chǎn)效率,積極研究其藥理活性,同步發(fā)揮楊黃菌的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)以及生態(tài)價(jià)值,使這一個(gè)古老的藥用真菌——楊黃菌煥發(fā)出新的活力。