朱 周 顧麗群 任 祺 花 卉 谷 麗

江蘇省南通市第三人民醫(yī)院皮膚科，江蘇南通 226006

尖銳濕疣（condyloma acuminatum，CA）是由人乳 頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染所導(dǎo)致的皮膚黏膜良性贅生物病變，是一種常見的性傳播疾病，該病的發(fā)病率逐年增加，部分患者治療困難、不易根治[1-2]。HPV 感染引起的CA 易復(fù)發(fā)、進(jìn)展速度快、傳播能力強(qiáng)，嚴(yán)重影響患者的身心健康[3]。有研究報道，細(xì)胞增殖和凋亡在CA 的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用[4]。Toll 樣受體4（Toll-like receptor，TLR4）作為Toll 樣受體的一員，可以促進(jìn)炎癥因子的生成，與機(jī)體的免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)關(guān)系密切[5-6]。核因子κB p65（nuclear factor-κB p65，NF-κB p65）是一種核轉(zhuǎn)錄因子，可以與各類細(xì)胞因子、生長因子和凋亡因子等相互作用，參與機(jī)體的氧化應(yīng)激、凋亡、炎癥等過程[7-10]。關(guān)于TLR4 和NF-κB p65 在CA 中的表達(dá)水平及其與病程發(fā)展關(guān)系的研究較少，本研究探討CA 患者皮損組織中TLR4 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年1 月至2022 年8 月在江蘇省南通市第三人民醫(yī)院（以下簡稱“我院”）治療的尖銳濕疣患者92 例作為觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①診斷符合《尖銳濕疣診療指南》[11]中的標(biāo)準(zhǔn)；②初治。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有惡性腫瘤、自身免疫系統(tǒng)疾病、肝腎功能障礙、血液系統(tǒng)疾病等其他嚴(yán)重疾?。虎诤喜⒂腥祟惷庖呷毕莶《?、肝炎病毒感染及結(jié)核病；③入組前3 個月內(nèi)有糖皮質(zhì)激素、免疫制劑服用史；④妊娠期或哺乳期婦女。另選取同期于我院行包皮環(huán)切術(shù)的成年男性55 例及外陰整形術(shù)的成年女性37 例作為對照組，兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。本研究獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（20220401）。

表1 兩組一般資料比較

1.2 研究方法

采用免疫組織化學(xué)染色檢測觀察組皮損組織和對照組皮膚組織的TLR4 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平，首先進(jìn)行常規(guī)染色，之后按照試劑盒說明書（北京中杉金橋生物技術(shù)公司，512821CB）進(jìn)行操作，抗體的稀釋比例為1∶100，以已知陽性片作陽性對照，以PBS 代替一抗作陰性對照。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

TLR4 主要表達(dá)于表皮全層的胞膜和胞質(zhì)，呈現(xiàn)黃色至棕褐色顆粒。NF-κB p65 蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核和胞漿，呈腺黃色至棕褐色顆粒。每張切片隨機(jī)選取5 個不同區(qū)域，在高倍視野下（400×）觀察，對陽性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行評分，陽性細(xì)胞比例：＜10%為0 分，10%～＜25%為1 分，25%～＜50%為2 分，50%～＜75%為3 分，≥75%為4 分；染色強(qiáng)度：無著色為0 分，淺黃色為1 分，黃色為2 分，棕褐色為3 分。陽性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度得分之和≥4 分為陽性表達(dá)，＜4 分為陰性表達(dá)[12]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，比較采用t 檢驗；計數(shù)資料采用例數(shù)和百分率表示，比較采用χ2檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組TLR4、NF-κB p65 蛋白表達(dá)比較

觀察組TLR4、NF-κB p65 蛋白表達(dá)陽性率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1、表2。

圖1 觀察組皮損組織TLR4、NF-κB p65 蛋白表達(dá) （免疫組織化學(xué)染色，400×）

表2 兩組TLR4、NF-κB p65 蛋白表達(dá)比較[例（%）]

2.2 CA 患者不同臨床病理特征與TLR4 蛋白表達(dá)的關(guān)系

病程≥3 個月、疣體數(shù)目≥10 個、疣體最大直徑≥10 mm 患者TLR4 蛋白陽性表達(dá)率高于病程＜3 個月、疣體數(shù)目＜10 個、疣體最大直徑＜10 mm 患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 CA 患者不同臨床病理特征與TLR4 蛋白表達(dá)的關(guān)系[例（%）]

2.3 CA 患者不同臨床病理特征與NF-κB p65 蛋白表達(dá)的關(guān)系

疣體數(shù)目≥10 個、疣體最大直徑≥10 mm 患者NFκB p65 蛋白表達(dá)陽性率明顯高于疣體數(shù)目＜10 個、疣體最大直徑＜10 mm 患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 CA 患者不同臨床病理特征與NF-κB p65 蛋白表達(dá)的關(guān)系[例（%）]

3 討論

CA 發(fā)病與HPV 感染有關(guān)，HPV 可以通過皮膚黏膜的微小破損入侵表皮細(xì)胞基底層，進(jìn)而引起黏膜異常增殖，患者還可能出現(xiàn)免疫系統(tǒng)功能異常[13-14]。TLR與機(jī)體抵抗微生物入侵的免疫反應(yīng)關(guān)系密切，研究發(fā)現(xiàn)TLR 參與腫瘤和自身免疫性疾病等的發(fā)生發(fā)展過程[15]。TLR4 作為TLR 中的一員，具有抑制病毒、炎癥反應(yīng)和凋亡的作用[16]。NF-κB p65 可以作用于下游靶基因，調(diào)控炎癥因子、凋亡因子的表達(dá)[17]。因此，本研究采用免疫組織化學(xué)染色檢測CA 組織中TLR4 和NF-κB p65 的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討其臨床意義。

本研究結(jié)果顯示，觀察組皮損的TLR4、NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平明顯升高。CA 是由HPV 引起的最常見的表皮感染，大多數(shù)HPV 感染可通過有效的免疫反應(yīng)消除，未能根除HPV 會促進(jìn)疣體的發(fā)展，這主要與HPV 能夠避開人體免疫防御系統(tǒng)有關(guān)[18]。這一過程涉及一系列炎癥反應(yīng)，近年來的研究已證實促炎性細(xì)胞因子，包括白細(xì)胞介素和腫瘤壞死因子，是皮膚和黏膜炎癥發(fā)展的重要介質(zhì)[19-20]。有研究表明，TLR4與機(jī)體天然免疫和獲得性免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用有著密切的關(guān)系，正常組織中TLR4 的表達(dá)量極低，而HPV 感染組織其表達(dá)量明顯增加[21-22]。NF-κB p65被證實參與多種疾病的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖及細(xì)胞凋亡過程，NF-κB p65 與多種HPV 感染疾病的進(jìn)展及預(yù)后有關(guān)[23-24]。因此，CA 組織中TLR4、NF-κBp65 蛋白表達(dá)水平明顯升高。

CA 的疣體數(shù)目、疣體最大直徑及病程進(jìn)展與HPV 感染分型有關(guān)，高危型HPV 感染或HPV 混合感染容易導(dǎo)致臨床上頑固型難治性CA，且此類HPV 感染的CA 病程進(jìn)展較快，預(yù)后較差。文獻(xiàn)報道，高危型HPV 感染和HPV 混合感染組織中TLR4 蛋白、NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平明顯高于低危型HPV 感染組織[25]。TLR4、NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平與疣體數(shù)目、疣體最大直徑及病程有關(guān)。細(xì)胞在正常狀態(tài)下，NF-κB p65受機(jī)體正負(fù)反饋機(jī)制的調(diào)控處于未激活狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞受氧化應(yīng)激、炎癥因子、病原體感染等多種刺激時，NF-κB p65 作為TLR 通路的下游信號分子，被TLR4蛋白激活，進(jìn)而調(diào)控一系列復(fù)雜的信號通路，促進(jìn)促炎性細(xì)胞因子、趨化因子及多種調(diào)控因子的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞異常增殖和血管生成、抑制凋亡、免疫逃逸、侵襲和轉(zhuǎn)移，對機(jī)體造成影響[26]。

綜上所述，尖銳濕疣患者皮損組織中TLR4、NF-κB p65 蛋白呈高表達(dá)，與疣體數(shù)目、疣體最大直徑及病程有關(guān)，這一結(jié)果可能為臨床上治療和預(yù)防尖銳濕疣提供新的思路。但本研究未探討血清水平的TLR4、NF-κB p65 蛋白含量及對CA 的臨床意義，在以后的實驗將進(jìn)一步的研究。