趙麗華，夏慧芳

陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院產(chǎn)科，陜西 咸陽 712000

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是指在妊娠期首次檢測到的任何程度的糖耐量異常，約占妊娠期高血糖婦女總數(shù)的90%～95%[1]。研究顯示，妊娠期糖尿病可導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險增加，如早產(chǎn)、胎兒呼吸窘迫和巨大胎兒，并會增加分娩后5～10年孕婦的2型糖尿病風(fēng)險以及兒童未來肥胖和糖尿病的風(fēng)險[2-3]。因此，探索能有效預(yù)測GDM患者不良妊娠結(jié)局的因子具有重要臨床價值。miRNAs是一類小的非編碼RNA，在GDM 的表觀遺傳調(diào)控中具有重要功能[4-5]。miR-138-5p 是miR-138 家族中的一員。此前有研究表明GDM孕婦胎盤組織中miR-138-5p下調(diào)，會促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲和增殖并影響母胎健康，而miR-138-5P 與GDM 患者妊娠結(jié)局的關(guān)系尚不清楚[6]。胰島素樣生長因子-1 (insulin-like growth factor-1，IGF-1)是一種單鏈多肽，可通過IGF-1 受體介導(dǎo)發(fā)揮類似胰島素效應(yīng)的作用，其可參與GDM 的發(fā)生發(fā)展[7]。本研究擬通過檢測GDM 患者血清中miR-138-5P、IGF-1 的表達(dá)水平，并探討兩者與GDM患者妊娠結(jié)局的關(guān)系，以期為臨床預(yù)防和改善妊娠不良結(jié)局提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年1 月至2022 年6 月陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院收治的90例GDM產(chǎn)婦為研究對象(GDM組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)在妊娠24～28周經(jīng)口服糖耐量試驗并根據(jù)診斷指南標(biāo)準(zhǔn)確診為GDM[8]；(2)妊娠期首次診斷；(3)無其他妊娠期合并癥；(4)入組一周內(nèi)未使用糖代謝藥物；(5)具有完整的認(rèn)知和行為能力。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)懷孕22 周之前選擇性流產(chǎn)或死產(chǎn)；(2)多胎妊娠；(3)患有糖尿病、高血壓、急慢性心臟、肝臟、腎臟疾病或其他嚴(yán)重疾??；(4)出現(xiàn)胎兒染色體異常或重大出生缺陷。GDM 組患者年齡24～35 歲，平均(26.53±4.82)歲；分娩孕周為37～41 周，平均(38.13±1.04)周。根據(jù)妊娠結(jié)局分為不良妊娠結(jié)局組35例和正常妊娠結(jié)局組55例，不良妊娠結(jié)局包括出現(xiàn)早產(chǎn)、羊水過多、胎膜早破、宮內(nèi)窘迫、巨大兒等。同期納入臨床資料相匹配的來本院產(chǎn)檢的健康妊娠女性60例作為對照組，年齡24～35歲，平均(26.24±5.15)歲；分娩孕周為37～41 周，平均(38.35±1.33)周。兩組孕婦的年齡和分娩孕周比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)我院道德倫理委員會批準(zhǔn)，所有樣品采集均取得受試者或家屬的知情同意。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 妊娠孕婦均于24～28周進(jìn)行產(chǎn)檢時，抽取清晨空腹靜脈血10 mL，室溫下靜置，后采用低溫離心機在3 200 r/min 下處理10 min，取上層血清置于EP管內(nèi)，于-80℃下保存待測。

1.2.2 miR-138-5P、IGF-1 水平檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測血清中IGF-1 水平，實驗步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行，IGF-1 試劑盒購自江西艾博因生物科技有限公司，貨號：IΒ-E10032。采用實時熒光定量PCR 法(qRT-PCR)檢測miR-138-5P 相對表達(dá)水平：Trizol 法提取RNA，使用miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒將約1 μg RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA。根據(jù)制造商的協(xié)議，使用SYΒR green 進(jìn)行實時聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)測定miR-138-5P 的表達(dá)水平，以GAPDH 為內(nèi)參。采用2-△△Ct法計算miR-138-5P 表達(dá)水平。共重復(fù)3 次，取其平均值。引物設(shè)計如下：上游引物為5'-AGCTGGTGTTGTGAATCCAGGCCC-3'，下游引物：5'-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3'；GAPDH上游為5'-AGAAGG CTGGGGCTCATTTG-3'，下游為5'-AGGGGCCATCC CAGTCTTC-3'。

1.2.3 臨床資料收集 收集所有產(chǎn)婦的臨床資料，包括年齡、孕產(chǎn)史、孕前ΒMI、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)、收縮壓、舒張壓、總膽固醇、三酰甘油、空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)ΒG)、糖化血紅蛋白(glocosylated hemoglobin，HbA1c)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和制圖。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗；計量資料呈正態(tài)分布，方差齊性好，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，兩組間比較進(jìn)行t檢驗；采用Pearson 相關(guān)性分析miR-138-5P、IGF-1的相關(guān)性；采用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)評價miR-138-5P、IGF-1 水平對不良妊娠結(jié)局發(fā)生的預(yù)測價值；采用多因素Logistic 回歸分析影響不良妊娠結(jié)局發(fā)生的因素。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組產(chǎn)婦的血清miR-138-5P、IGF-1水平及HOMA-IR 比較 GDM 組產(chǎn)婦的血清miR-138-5P 表達(dá)水平明顯低于對照組，IGF-1表達(dá)水平和HOMA-IR明顯高于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組產(chǎn)婦的血清miR-138-5P、IGF-1 水平及HOMA-IR 比較()Table 1 Comparison of serum levels of miR-138-5P, IGF-1, and HOMA-IR between the GDM group and the control group()

表1 兩組產(chǎn)婦的血清miR-138-5P、IGF-1 水平及HOMA-IR 比較()Table 1 Comparison of serum levels of miR-138-5P, IGF-1, and HOMA-IR between the GDM group and the control group()

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2.2 GDM組產(chǎn)婦血清miR-138-5P、IGF-1水平與HOMA-IR的相關(guān)性 GDM組產(chǎn)婦的血清miR-138-5P表達(dá)與HOMA-IR 呈負(fù)相關(guān)(r=-0.459，P＜0.05)，IGF-1表達(dá)與HOMA-IR呈正相關(guān)(r=0.513，P＜0.05)。

2.3 GDM不同妊娠結(jié)局產(chǎn)婦的血清miR-138-5P、IGF-1 水平比較 不良妊娠結(jié)局組產(chǎn)婦的血清miR-138-5P 表達(dá)水平明顯低于正常妊娠結(jié)局組，IGF-1 表達(dá)水平明顯高于正常妊娠結(jié)局組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 不同妊娠結(jié)局產(chǎn)婦的血清miR-138-5P、IGF-1水平比較()Table 2 Comparison of serum levels of miR-138-5P and IGF-1 between patients with different pregnancy outcomes()

表2 不同妊娠結(jié)局產(chǎn)婦的血清miR-138-5P、IGF-1水平比較()Table 2 Comparison of serum levels of miR-138-5P and IGF-1 between patients with different pregnancy outcomes()

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2.4 不同妊娠結(jié)局產(chǎn)婦的臨床資料比較 兩組產(chǎn)婦的年齡、孕產(chǎn)史、孕前ΒMI、收縮壓、舒張壓、總膽固醇、三酰甘油比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；不良妊娠結(jié)局組產(chǎn)婦HOMA-IR、FΒG、HbA1c 水平明顯高于正常妊娠結(jié)局組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 不同妊娠結(jié)局產(chǎn)婦的臨床資料比較[例(%)，]Table 3 Comparison of clinical data between patients with different pregnancy outcomes[n(%),]

表3 不同妊娠結(jié)局產(chǎn)婦的臨床資料比較[例(%)，]Table 3 Comparison of clinical data between patients with different pregnancy outcomes[n(%),]

注：1 mmHg=0.133 kPa。Note:1 mmHg=0.133 kPa.

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2.5 血清miR-138-5P、IGF-1 水平對GDM 患者不良妊娠結(jié)局的預(yù)測價值 經(jīng)ROC分析結(jié)果顯示，血清miR-138-5P、IGF-1水平預(yù)測GDM患者不良妊娠結(jié)局的AUC 分別為0.890 (95%CI：0.830～0.934)、0.906(95%CI：0.849～0.947)，截斷值分別為0.44、141.42 ng/mL，對應(yīng)的敏感度分別為90.00%、81.67%，特異度分別為85.42%、90.62%，血清miR-138-5P、IGF-1水平聯(lián)合預(yù)測的AUC 為0.936 (95%CI：0.886～0.969)，敏感度為96.67%，特異度為81.25%，見圖1。

圖1 血清miR-138-5P、IGF-1 水平預(yù)測GDM 患者不良妊娠結(jié)局的ROCFigure 1 ROC curve of serum miR-138-5P and IGF-1 levels in predicting adverse pregnancy outcomes in patients with

2.6 影響GDM 患者不良妊娠結(jié)局的因素 以GDM 患者發(fā)生不良妊娠結(jié)局為因變量(未發(fā)生=0，發(fā)生=1)，將單因素分析中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的變量作為自變量進(jìn)行多因素Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示，HOMA-IR、FΒG、HbA1c、IGF-1 均是影響不良妊娠結(jié)局發(fā)生的獨立危險因素，miR-138-5P是影響不良妊娠結(jié)局發(fā)生的保護(hù)因素(P＜0.05)，見表4。

表4 影響GDM患者發(fā)生不良妊娠結(jié)局因素的多因素Logistic回歸分析Table 4 Multivariate Logistic regression analysis of the factors influencing the occurrence of adverse pregnancy outcomes in patients with GDM

3 討論

GDM 是最常見的產(chǎn)婦并發(fā)癥之一，在中國其發(fā)病率已達(dá)到17.5%～18.9%[9-10]。GDM可同時對產(chǎn)婦及胎兒產(chǎn)生影響，此病發(fā)生后，孕婦機體處于長期性的應(yīng)激狀態(tài)中，機體代謝情況發(fā)生改變，導(dǎo)致免疫力下降，增加不良妊娠結(jié)局風(fēng)險[11-12]。此外，研究顯示自中國全面實施“二孩”政策后，GND 的患病率進(jìn)一步上升，給中國的醫(yī)療體系帶來巨大負(fù)擔(dān)[13-14]。因此尋找靈敏指標(biāo)用于預(yù)測GDM 患者妊娠結(jié)局，對指導(dǎo)治療及改善妊娠結(jié)局、降低不良妊娠結(jié)局發(fā)生率具有重要臨床指導(dǎo)價值。

miRNA作為內(nèi)源性基因編碼的調(diào)節(jié)因子，可參與細(xì)胞生命活動的各個過程。近來研究發(fā)現(xiàn)miRNA 在GDM 患者體內(nèi)異常表達(dá)，可作為一種新型生物標(biāo)記物[15]。黃好等[16]研究發(fā)現(xiàn)miR-138-5P在GDM中可能通過靶向調(diào)控缺氧誘導(dǎo)因子1α的表達(dá)影響PI3K/AKT信號通路，進(jìn)而促進(jìn)β細(xì)胞的增殖參與疾病發(fā)展進(jìn)程。但miR-138-5P 與GDM 患者妊娠結(jié)局的相關(guān)性尚不明確。本研究中GDM 患者血清中miR-138-5P表達(dá)下降，且在不良妊娠結(jié)局患者中的表達(dá)水平低于正常妊娠結(jié)局患者，提示miR-138-5P 表達(dá)降低可能會導(dǎo)致妊娠不良結(jié)局的發(fā)生，miR-138-5P 表達(dá)異常與GDM患者發(fā)生不良妊娠結(jié)局密切相關(guān)。并且本研究結(jié)果進(jìn)一步顯示，GDM 組患者血清miR-138-5P 表達(dá)與HOMA-IR呈負(fù)相關(guān)，提示miR-138-5P 表達(dá)異?？赡芘c胰島素抵抗有關(guān)，而低水平miR-138-5P可能通過抑制胰島素分泌增加HOMA-IR，進(jìn)一步導(dǎo)致患者血糖水平持續(xù)升高，最終對孕婦及胎兒造成不良影響。ROC曲線結(jié)果顯示，血清miR-138-5P水平預(yù)測GDM患者不良妊娠結(jié)局的AUC 為0.890 (95%CI：0.830～0.934)，對應(yīng)的敏感度為90.00%，特異度為85.42%。表明檢測miR-138-5P 可能作為預(yù)測不良妊娠結(jié)局的發(fā)生的潛在生物標(biāo)志物。這種新型血清生物標(biāo)志物的鑒定和驗證有可能顯著改善母親、新生兒和整個社會GDM的診斷和預(yù)后。

IGF-1 是機體單鏈堿性多肽活性蛋白，可通過提升對組織葡萄糖攝取的能力，刺激糖酵解、糖原異生，從而改善患者的脂類代謝[17]。據(jù)報道，較高的IGF-1與糖尿病腎病、糖尿病周圍神經(jīng)病變等疾病發(fā)生風(fēng)險增加有關(guān)[18]。IGF-1有胰島素樣作用，具有降糖、降血脂、舒張血管等作用，且已有研究顯示GDM患者存在糖脂代謝紊亂，因此IGF-1 可能會出現(xiàn)表達(dá)異常[19-20]。本研究中GDM 患者血清中IGF-1 水平顯著高于健康孕婦，且不良妊娠結(jié)局的患者血清中IGF-1 表達(dá)顯著高于正常妊娠結(jié)局孕婦，與以往研究結(jié)果一致[7]，提示IGF-1水平升高對不良妊娠結(jié)局的發(fā)生具有重要調(diào)節(jié)作用。進(jìn)一步通過多因素Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，IGF-1，HOMA-IR，F(xiàn)ΒG，HbA1c 均是影響不良妊娠結(jié)局發(fā)生的獨立危險因素，miR-138-5P是影響不良妊娠結(jié)局發(fā)生的保護(hù)因素，提示臨床可對以上相關(guān)影響因素進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測，并及時采取相關(guān)預(yù)防措施，以降低妊娠不良結(jié)局的發(fā)生風(fēng)險。ROC曲線顯示，血清IGF-1 水平預(yù)測GDM 患者不良妊娠結(jié)局的AUC 為0.906，對應(yīng)的敏感度為81.67%，特異度為90.62%，IGF-1 與miR-138-5P 兩者聯(lián)合預(yù)測GDM 患者發(fā)生不良妊娠結(jié)局的AUC 為0.936，敏感度為96.67%，特異度為81.25%。表明聯(lián)合檢測具有較好的診斷效能，兩者可作為預(yù)測GDM 孕婦發(fā)生不良妊娠結(jié)局的血清學(xué)指標(biāo)。

綜上所述，在GDM 患者血清中miR-138-5P表達(dá)降低，IGF-1 表達(dá)升高，兩者均是影響GDM 患者發(fā)生不良妊娠結(jié)局的重要因素，聯(lián)合檢測兩者在GDM 患者血清中的表達(dá)水平有望成為評估不良妊娠結(jié)局發(fā)生的血清標(biāo)志物，具有較高的檢測價值。但本研究納入樣本較少，研究具有一定局限性，未來需要做進(jìn)一步深入探究。