王衍俊

【摘要】目的：探討串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在高危新生兒代謝病篩查的結(jié)果，分析遺傳代謝病發(fā)病率、疾病分布情況。方法：對2021年1月—2022年10月于我院就疑似遺傳代謝病尋求醫(yī)療措施的兒童一共500例作為本次研究的全部觀察對象。針對所有兒童通過串聯(lián)質(zhì)譜檢測技術(shù)進(jìn)行遺傳代謝檢測；針對所有初篩陽性、高度懷疑存在遺傳代謝病的病例召回復(fù)查，隨后結(jié)合其他檢測措施開展臨床分析。結(jié)果：針對500例開展檢測的兒童中，初篩陽性病例一共存在30例，陽性暴露率為6%，結(jié)合其他監(jiān)測措施分析，最終被確診存在遺傳代謝病的患者只有2例，占比率為0.4%。所罹患的遺傳代謝病分別為：苯丙氨酸氫化酶缺乏癥：1例；甲基丙二酸血癥：1例。結(jié)論：在本次研究中，針對存在類似狀況的家庭的孩子就遺傳代謝病的檢測，總體上的發(fā)病率較高，但針對遺傳代謝病的檢出病種較少，因此需要更大樣本容量的兒童進(jìn)行檢測。

【關(guān)鍵詞】串聯(lián)質(zhì)譜檢測技術(shù)；遺傳代謝??；發(fā)病率；分布

Results and clinical analysis of suspected genetic metabolic disease by tandem mass spectrometry

WANG Yanjun

Taian Maternal and Child Health Hospital， Taian， Shandong 271000， China

【Abstract】Objective： To explore the results of tandem mass spectrometry in high-risk neonatal metabolic disease screening， analyze the incidence of genetic metabolic disease， disease distribution. Methods： A total of 500 children who sought medical treatment for suspected genetic metabolic diseases in our hospital from January 2021 to October 2022 were all observed in this study. Genetic metabolism was detected by tandem mass spectrometry in all children. All cases with positive initial screening and high suspicion of genetic metabolic disease were recalled for re-examination， and then clinical analysis was carried out in combination with other detection measures. Results： Among the 500 children tested， there were 30 positive cases in the initial screening， with a positive exposure rate of 6%. Combined with analysis of other monitoring measures， only 2 patients were finally diagnosed with genetic metabolic disease， accounting for 0.4%. The genetic metabolic diseases were phenylalanine hydrogenase deficiency （1 case） and glycogen storage disorder （1 case）. Conclusion： In this study， the detection of genetic metabolic diseases among children from families with similar conditions showed a higher incidence on the whole， but fewer diseases were detected for genetic metabolic diseases， so a larger sample size of children was needed for detection.

【Key Words】Tandem mass spectrometry detection technology； Genetic metabolic disease； Incidence of disease； Distribution

遺傳代謝病也被稱之為遺傳代謝紊亂（Inherited metabolic disease LMD），該疾病的發(fā)生在很大程度上受到遺傳缺陷的影響；串聯(lián)質(zhì)譜檢測技術(shù)（Tandcm Mass Spectrometry MS/MS MS2）在當(dāng)前是一種特異性生化代謝物測定技術(shù)，該檢測技術(shù)的應(yīng)用步驟大致是針對標(biāo)本的質(zhì)荷比、湘陰離子強(qiáng)度完成測定之后，以該結(jié)果為依據(jù)針對物質(zhì)進(jìn)行定量分析[1]。MS2涉及到質(zhì)譜選擇的多個(gè)步驟，MS2作為一種化學(xué)分析技術(shù)，在實(shí)驗(yàn)研究、臨床實(shí)踐中主要被應(yīng)用于鑒定未知化合物且闡明該物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)[2]。MS2也可以被適用于分子種類的定量，因?yàn)槠鋺?yīng)用效果，MS2被認(rèn)為是一種非常敏感的技術(shù)，適用于微量樣品（低至10～12g，10～15moL）的定量分析，并且易于與色譜分離方法配合使用，以鑒定混合物中的成分[3]。在生物醫(yī)學(xué)研究、臨床實(shí)踐中，MS2有幾種應(yīng)用途徑，即：臨床試驗(yàn)、毒理學(xué)、先天性代謝缺陷---兒童篩查、癌癥病理篩查、藥物應(yīng)用結(jié)果檢測等；MS2的這些特點(diǎn)為早期識別遺傳代謝病并為其及時(shí)干預(yù)提供了依據(jù)[4]。據(jù)此，本文就串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在高危新生兒代謝病篩查的結(jié)果進(jìn)行分析。

1 資料和方法

1.1 一般資料

對2021年1月—2022年10月于我院就疑似遺傳代謝病尋求醫(yī)療措施的兒童一共500例作為本次研究的全部觀察對象。患兒家屬中的直系親屬、旁系親屬在三代之內(nèi)存在代謝性疾病的情況；于我院尋求MS2技術(shù)檢測的患兒均存在反復(fù)嘔吐、抽搐、喂養(yǎng)困難、黃疸、肝臟體積和肌張力異常的情況。兒童年齡區(qū)間（3～6個(gè)月）。

1.2 研究方法

1.2.1 樣本采集 確保樣本采集發(fā)生在兒童出生48h且喂養(yǎng)活動達(dá)到6次的情況下進(jìn)行的。通過兒童的足跟采集血液并制作成干濾血片，然后從樣本中采集4個(gè)血液斑點(diǎn)，血液斑點(diǎn)的采集要求是：所采集血液斑點(diǎn)的直徑必須達(dá)到8mm，針對血片，依次開展平置、懸空、充分陰干的程序，再確認(rèn)針對上述血片樣本完成上述程序工作之后，將這些血片標(biāo)本送到本院新生兒疾病篩查中心備檢。

1.2.2 MS2檢測 進(jìn)行MS2檢測的儀器為；儀器為Waters公司生產(chǎn)的TQD 525以及PE公司生產(chǎn)的試劑盒：肉堿好琥珀酰丙酮測定試劑盒、非衍生化多種氨基酸試劑盒。針對LMD的篩查指標(biāo)總共達(dá)到80項(xiàng)，其涉及到：琥珀酰丙酮、氨基酸、堿基肉堿及上述幾種指標(biāo)的相應(yīng)比值，以便對于迄今發(fā)現(xiàn)的所有LMD進(jìn)行檢測；配藥設(shè)施還包括內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品。通過Neo Base測試程序針對氨基酸、琥珀酰丙酮、酰基和游離肉堿；其具體測量過程包括但不限于：針對血片使用溶液對其開展萃取，隨后通過串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)開展分析，而每一種樣本對于內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)的響應(yīng)程度應(yīng)當(dāng)和其之間的濃度成比例；在針對非衍生化多種氨基酸、肉堿、琥珀酰丙酮開展定量分析時(shí)，應(yīng)通過多反應(yīng)監(jiān)測模式獲得數(shù)據(jù)，在測定時(shí)間內(nèi)針對分析物在碰撞誘導(dǎo)后的產(chǎn)物的定量分析應(yīng)當(dāng)完成；采用系統(tǒng)內(nèi)軟件包執(zhí)行數(shù)據(jù)采集、處理；而每一份報(bào)告應(yīng)當(dāng)由遺傳?？漆t(yī)師負(fù)責(zé)審核、發(fā)放。

1.2.3 初篩陽性個(gè)體復(fù)查 在確認(rèn)患者陽性之后，令其家屬攜帶其于我院復(fù)查，該階段檢查還應(yīng)當(dāng)配合血尿常規(guī)、血糖、乳酸、腦電圖、CT、血氧數(shù)值的檢查；在獲得結(jié)果之后，醫(yī)生針對患者建立檔案，并且定期追蹤、復(fù)查。

2 結(jié)果

2.1 MS2檢測結(jié)果、LMD確診情況統(tǒng)計(jì)

針對500例開展檢測的兒童中，初篩陽性病例一共存在30例，陽性暴露率為6%，結(jié)合其他監(jiān)測措施分析，最終被確診存在遺傳代謝病的患者只有2例，占比率為0.4%。所罹患的遺傳代謝病分別為：苯丙氨酸氫化酶缺乏癥：1例、甲基丙二酸血癥1例。見表1、2。

3 討論

如上所言，針對LMD的醫(yī)療措施倡導(dǎo)盡早檢查、干預(yù)；LMD作為一種遺傳疾病，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為針對孩子的干預(yù)應(yīng)當(dāng)在1歲以前完成，這樣不僅僅改善預(yù)后，且對于患者家屬而言，所耗費(fèi)的治療成本也更少[5]。

在本次研究中，500例存在類似情況的患者經(jīng)過MS2、其他檢測之后，在最終被確認(rèn)為存在LMD的患者只有兩例；一例為糖原貯積癥，另外一例為苯丙氨酸氫化酶缺乏癥。苯丙氨酸氫化酶缺乏癥被歸類為氨基酸代謝病，在早期不能及時(shí)進(jìn)行干預(yù)，往往會在進(jìn)展到幾個(gè)月之后出現(xiàn)小便鼠尿、喂養(yǎng)困難、肌力異常，達(dá)到晚期會發(fā)展為神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，本次研究中，該例患者的臨床癥狀不典型，在后續(xù)經(jīng)過干預(yù)的，當(dāng)前情況穩(wěn)定，可能表明其病情正處于早期；這顯示了MS2聯(lián)合其他檢測在診斷早期苯丙氨酸氫化酶缺乏癥中發(fā)揮的重要價(jià)值[6]。

甲基丙二酸血癥屬于常染色體隱性進(jìn)，在臨床上被歸類為有機(jī)酸代謝異常疾??；甲基丙二酸包括異亮氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、奇數(shù)鏈脂肪酸等在代謝途徑中由甲基丙二酰輔酶產(chǎn)生，一般是因?yàn)榧谆］o酶A缺陷或者維生素B12的作用造成甲基丙二酸、丙酸等代謝物質(zhì)異常積累，進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)、肝臟、骨髓等重要器官出現(xiàn)損傷。該疾病發(fā)展到后期，患兒會出現(xiàn)脫水、生長發(fā)育遲緩、肝臟腫大、昏迷、智力異常等危險(xiǎn)信號明顯的癥狀；重度患者在癥狀出現(xiàn)后，生存期可能在一年，但是這種情況較少，盡管甲基丙二酸血癥是一種治療難度較高的遺傳性疾病，但是大多數(shù)情況能得到有效控制，而早期的診斷非常重要；就臨床癥狀而言，該例患者也不典型，這對于先天性疾病的診斷要求很高，這也在一定程度上顯示了MS2診斷技術(shù)的優(yōu)勢[7]。

MS2聯(lián)合基因檢測可以幫助LMD的診斷，在近幾年，隨著測序技術(shù)的改善，MS2受此影響針對LMD的診斷準(zhǔn)確性也在提高；本研究中兩例LMD患者均被找到致病基因，且對于被查出致病定位點(diǎn)的患者進(jìn)行家系基因檢查有助于滿足家屬今后的生育需要；本研究兩例患者的父母均被查出是基因攜帶者，均為常染色體隱性遺傳病，可以根據(jù)MS2、基因檢測結(jié)果指導(dǎo)如何健康生育下一胎[8]。

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