曹思慧， 陳琳， 何灝龍， 李祖強(qiáng)， 劉瓊， 劉密

基于1H-NMR和16S rDNA測序技術(shù)探討針與灸不同刺激方法對大鼠結(jié)腸代謝物和腸道菌群的影響*

曹思慧， 陳琳， 何灝龍， 李祖強(qiáng)， 劉瓊， 劉密△

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿與康復(fù)學(xué)院，湖南 長沙 410208）

觀察針刺與艾灸兩種不同干預(yù)方法對健康SD大鼠結(jié)腸代謝物和腸道菌群調(diào)節(jié)作用的差異。將33只健康SD大鼠隨機(jī)分為空白組、針刺組和艾灸組，每組各11只?？瞻捉M大鼠仰臥固定在治療臺上，不予任何干預(yù)，連續(xù)7 d；針刺組以不銹鋼針灸針針刺大鼠雙側(cè)上巨虛穴和天樞穴，留針15 min，連續(xù)干預(yù)7 d；艾灸組采用溫和灸，將艾條置于大鼠雙側(cè)上巨虛穴和天樞穴上方3～5 cm處，使皮膚溫度維持在（45±5） ℃之間，每次15 min，連續(xù)干預(yù)7 d。干預(yù)結(jié)束后，取各組大鼠結(jié)腸組織和糞便樣品，運(yùn)用質(zhì)子核磁共振（proton nuclear magnetic resonance，1H-NMR）技術(shù)檢測各組大鼠結(jié)腸組織代謝物，分析并篩選大鼠結(jié)腸組織差異代謝物；16S核糖體DNA（ribosomal DNA， rDNA）測序技術(shù)檢測各組大鼠腸道菌群豐度和多樣性的變化情況，并比較差異菌群。代謝組學(xué)檢測結(jié)果顯示，與空白組相比，針刺組大鼠結(jié)腸組織中代謝物組氨酸、纈氨酸和丁酸含量顯著上升（<0.05），艾灸組大鼠結(jié)腸組織中代謝物膽堿和肌醇含量顯著上升（<0.05或<0.01）；與針刺組相比，艾灸組大鼠結(jié)腸組織中代謝物甲酸和乙酸含量顯著上升（0.05）。菌群多樣性分析顯示，與空白組相比，針刺組和艾灸組大鼠腸道菌群的Chao1指數(shù)和基于豐度的覆蓋估計值（abundance-based coverage estimator， ACE）均顯著上升（<0.05）；在菌群門和屬水平上，針、灸干預(yù)后部分有益菌豐度上升，部分條件致病菌豐度下降。針刺與艾灸兩種不同干預(yù)方法對健康SD大鼠結(jié)腸代謝物和腸道菌群的調(diào)節(jié)存在差異性：針刺更擅長調(diào)節(jié)酸類代謝失衡所導(dǎo)致的胃腸道疾病，艾灸更適用于脂質(zhì)代謝異常引發(fā)的代謝類疾??；針刺與艾灸對腸內(nèi)微生態(tài)環(huán)境具有良性調(diào)節(jié)作用；針刺能通過影響腸道菌群的結(jié)構(gòu)和豐度緩解胃腸道疾病。

針灸；代謝組學(xué)；腸道菌群；質(zhì)子核磁共振；16S核糖體DNA測序

針刺與艾灸均屬于中醫(yī)外治療法，臨床一般并稱為“針灸”，二者均以中醫(yī)基礎(chǔ)理論和經(jīng)絡(luò)腧穴理論為指導(dǎo)，既獨(dú)立又統(tǒng)一，相輔相成。針刺通過將針具針體刺入皮膚，施以不同補(bǔ)瀉手法，對相應(yīng)穴區(qū)組織產(chǎn)生機(jī)械刺激而發(fā)揮作用［1］；艾灸則通過用艾條在體表相應(yīng)腧穴進(jìn)行熏熨，對穴區(qū)皮膚產(chǎn)生溫?zé)岽碳亩l(fā)揮療效［2］。針刺與艾灸的作用方式和起效機(jī)制均存在差異，故二者適應(yīng)癥不盡相同［3-4］。目前研究者多通過研究疾病動物模型，從炎癥因子和相關(guān)蛋白表達(dá)量等方面闡述針刺與艾灸之間的差異［5-7］，少見有針灸干預(yù)正常健康動物后對其代謝物與腸道菌群的變化差異進(jìn)行分析比較的研究。

研究顯示，代謝組學(xué)能及時靈敏地揭示外界因素刺激下生物機(jī)體的整體應(yīng)答與調(diào)節(jié)，闡明干預(yù)手段的內(nèi)在機(jī)制［8］，與針灸效應(yīng)的多層次、多靶點(diǎn)整體特性相吻合。同時，由于腸道菌群廣泛參與了多種疾病的發(fā)展變化，而針灸可以通過調(diào)控腸道菌群對多種疾病產(chǎn)生治療作用［9-10］。故本研究采用質(zhì)子核磁共振（proton nuclear magnetic resonance，1H-NMR）代謝組學(xué)和16S核糖體DNA（ribosomal DNA， rDNA）高通量測序技術(shù)，以健康SD大鼠為研究對象，觀察針刺與艾灸干預(yù)后大鼠結(jié)腸代謝產(chǎn)物和腸道菌群的變化，分析針和灸兩種不同刺激方法的作用差異，以期為臨床選擇合適的治療手段提供參考資料。

材料和方法

1　動物

SPF級7周齡雄性SD大鼠33只，體重150～180 g，由廈門大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)室提供。質(zhì)量檢測單位：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究所，實(shí)驗(yàn)單位許可證編號：SYXK（閩）2013-0006，質(zhì)量合格證碼：SCXK（京）2014-0004。實(shí)驗(yàn)室溫度維持在23～26 oC，濕度50％～70%。適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后隨機(jī)標(biāo)號分為3組（空白組、針刺組、艾灸組），每組各11只。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過程中各項操作與處理方式均符合《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動物的指導(dǎo)性意見》規(guī)定。

2　主要試劑及儀器

10%水合氯醛（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit試劑盒（Qiangen）；5 mm核磁管（Norell）；Avance III HD 600 MHz核磁共振譜儀（Bruker）；NMR Suite核磁共振光譜處理軟件（Chenomx）；MultiskanTMGO全波長酶標(biāo)儀（Thermo Scientific）；HiSeq 2500高通量測序儀（Illumia）；0.25 mm×25 mm針灸針（蘇州醫(yī)療用品有限公司）；溫灸純艾條（長沙艾醫(yī)生物科技公司）。

3　處理方法

3.1腧穴選擇與定位選擇大鼠雙側(cè)上巨虛穴與天樞穴，穴位參照文獻(xiàn)定位［11-12］。天樞穴：位于大鼠胸劍聯(lián)合下40 mm，前正中線旁開5 mm，腹直肌及其鞘處；上巨虛穴：位于大鼠膝關(guān)節(jié)外下方腓骨小頭下約10 mm處，足三里穴向下約5 mm處。

3.2干預(yù)方法33只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為3組，每組11只，正常喂養(yǎng)。干預(yù)方法參考文獻(xiàn)［13-14］方案。（1）空白組：正常飲食，與針刺組和艾灸組大鼠于相同時間進(jìn)行抓取捆綁，固定于鼠板上，不予以任何干預(yù)與治療，連續(xù)7 d。（2）針刺組：正常飲食，抓取捆綁，固定于鼠板上。穴區(qū)消毒后用毫針（0.25 mm×25 mm）垂直刺入天樞穴和上巨虛穴3～5 mm，行捻轉(zhuǎn)手法20 s后留針15 min，連續(xù)7 d。（3）艾灸組：正常飲食，抓取捆綁，固定于鼠板上，穴區(qū)消毒后點(diǎn)燃艾條置于天樞穴與上巨虛穴上方約3～5 cm處15 min，置一直徑約5 mm的有孔隔熱材料于穴位表面，灸時用體表溫度傳感器測定皮膚溫度，使溫度保持在（45±5） ℃之間，連續(xù)7 d。

4　觀察指標(biāo)及檢測方法

4.1大鼠體重及進(jìn)食量監(jiān)測參照文獻(xiàn)［15］方法，于干預(yù)結(jié)束后1 d（上午9：00）使用精密電子秤稱量大鼠體重2次，取2次測量的平均值作為大鼠最終體重；于干預(yù)前1 d和干預(yù)結(jié)束前1 d的同一時間（上午9：00），以每只大鼠50 g飼料的標(biāo)準(zhǔn)投放飼料，次日稱量剩余飼料重量，計算大鼠24 h的進(jìn)食量。

4.2核磁樣本制備、檢測與數(shù)據(jù)處理將大鼠固定在鼠板上，用10%水合氯醛（0.5 mL/100 g）腹腔注射進(jìn)行麻醉。剖開腹腔，采集約1.0 cm×0.5 cm大小的結(jié)腸組織作為標(biāo)本，用生理鹽水沖洗后置于-80 ℃冰箱中保存。參考文獻(xiàn)［16-17］方法：?。?00±50） mg結(jié)腸組織，按4 mL/g比例加入冰甲醇中，0 ℃條件下組織勻漿機(jī)勻漿1 min；再按4 mLg和2.85ml/g的比例分別加入甲醇和雙蒸水中，勻漿1 min，渦旋1 min充分提?。混o置于冰上15 min后，用2 mL離心管于4 ℃、16 873×離心15 min。取上清液0.5 mL轉(zhuǎn)移至新的離心管中，經(jīng)氮吹儀濃縮去除甲醇。待樣品完全干燥后，溶于D2O（內(nèi)含0.015%總懸浮顆粒物）600 μL并充分混勻，取上清液550 μL移入5 mm核磁管中，使用Avance III HD 600 MHz核磁共振譜儀和1D NOESYGPPRLD譜脈沖序列（Bruker Biospin Pulse Program Library）采集1H-NMR數(shù)據(jù)。

運(yùn)用MestReNova軟件對代謝物譜峰進(jìn)行基線校正，SIMCA-P 14.1軟件進(jìn)行多元統(tǒng)計分析。采用Pareto Scaling法進(jìn)行歸一化及常用對數(shù)轉(zhuǎn)化，首先采用主成分分析（principal component analysis， PCA）對不同組別進(jìn)行可視化組間分離，后用偏最小二乘判別分析（partial least squares discriminant analysis， PLS-DA）最大化組間差異，進(jìn)行代謝模式識別并找尋差異代謝物，得到得分圖（score plot）、載荷圖（loading plot）與VIP（variable importance in projection）圖。交叉驗(yàn)證（cross-validation， CV）檢驗(yàn)?zāi)Ｐ唾|(zhì)量，默認(rèn)PLS-DA模型中VIP值>1且<0.05的代謝物為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。相關(guān)代謝通路信息主要源于HMDB和KEGG數(shù)據(jù)庫。

4.3糞便樣本制備、檢測與數(shù)據(jù)處理參考文獻(xiàn)［18］方法：干預(yù)結(jié)束次日使用無菌EP管采集各組大鼠糞便，置于-80 ℃冰箱保存。取大鼠糞便約200 mg，按照DNA提取試劑盒說明書提取糞便菌群總基因組DNA并檢測濃度、純度及完整性。采用341F和806R引物對16S rDNA的V3～V4區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增、純度檢測及熒光定量。后用Illumina建庫策略進(jìn)行16S建庫，Qubit 3.0熒光定量儀對文庫濃度進(jìn)行初步定量、稀釋，最后使用qPCR方法對文庫有效濃度進(jìn)行精確定量。文庫檢測合格后，使用高通量測序平臺（HiSeq）進(jìn)行測序。對得到原始數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)控、過濾、拼接，按照97％的相似性閾值對非重復(fù)性序列進(jìn)行劃分，得到不同的操作單元（operational taxonomic unit， OTU）聚類，對OTU聚類與注釋結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計，最后基于OTU豐度表進(jìn)行α多樣性分析、β多樣性分析和物種LEfSe差異分析。

5　統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 25.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。若符合正態(tài)分布及方差齊性，則數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示，組間均數(shù)比較使用單因素方差分析，兩兩比較采用最小顯著差異（least significant difference， LSD）法；若不符合方差齊性，則用Dunnet T3分析；若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，則數(shù)據(jù)以中位數(shù)表示，組間差異比較采用秩和檢驗(yàn)。以<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1　各組大鼠體重和進(jìn)食量比較

與空白組相比，針刺組和艾灸組大鼠干預(yù)前后進(jìn)食量和干預(yù)后體重的差異均無統(tǒng)計學(xué)顯著性（>0.05），見圖1。

Figure 1.　Comparison of food intake before and after intervention （A） and body weight after intervention （B） of the rats in each group. E： blank group； F： acupuncture group； G： moxibustion group. Mean±SD. n=11.

2　代謝組學(xué)分析

2.1空白組與針刺組大鼠結(jié)腸組織代謝物的比較空白組與針刺組大鼠結(jié)腸組織樣本PCA得分圖結(jié)果顯示，兩組樣本不能進(jìn)行直觀的組間分離。進(jìn)一步對兩組樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行PLS-DA建模差異最大化分析。PLS-DA載荷圖顯示，組氨酸、丁酸鹽等多個代謝物對兩組樣本的區(qū)分有較高貢獻(xiàn)率。篩選出VIP值>1且<0.05的代謝物，結(jié)果顯示，與空白組相比，針刺組大鼠結(jié)腸組織中代謝物尿嘧啶和蘇氨酸的含量均顯著下降（<0.05或<0.01），組氨酸、纈氨酸和丁酸鹽的含量均顯著上升（<0.05）。見圖2及表1。

Figure 2.　Diagram of colonic tissue metabolism patterns in blank group （E） and acupuncture group （F）. A： principal component analysis （PCA） score chart； B： partial least squares discriminant analysis （PLS-DA） score chart； C： variable importance in projection （VIP） value diagram in PLS-DA mode； D： PLS-DA loading diagram. n=11.

表1　空白組與針刺組結(jié)腸組織差異代謝物比較

*<0.05，**<0.01blank group； ↑： increaseblank group； ↓： decreaseblank group.

2.2空白組與艾灸組大鼠結(jié)腸組織代謝物的比較空白組與艾灸組大鼠結(jié)腸組織樣本PCA得分圖顯示，兩組樣本代謝模式有分離趨勢。PLS-DA載荷圖顯示，醋酸鹽、膽堿等多個代謝物對兩組樣本間的區(qū)分有較高貢獻(xiàn)率。篩選VIP值>1且<0.05的代謝物，結(jié)果顯示，與空白組相比，艾灸組大鼠結(jié)腸組織中代謝物乳酸、甘氨酸和絲氨酸的含量均顯著下降（<0.05或<0.01），膽堿和肌醇的含量均顯著上升（<0.05或<0.01）。見圖3及表2。

Figure 3.　Diagram of colonic tissue metabolism patterns in blank group （E） and moxibustion group （G）. A： principal component analysis （PCA） score chart； B： partial least squares discriminant analysis （PLS-DA） score chart； C： variable importance in projection （VIP） value diagram in PLS-DA mode； D： PLS-DA loading diagram. n=11.

表2　空白組與艾灸組結(jié)腸組織差異代謝物比較

*<0.05，**<0.05blank group； ↑： increaseblank group； ↓： decreaseblank group.

2.3針刺組與艾灸組大鼠結(jié)腸組織代謝物的比較針刺組與艾灸組大鼠結(jié)腸組織樣本PCA得分圖顯示，兩組樣本代謝模式無法進(jìn)行直觀的組間區(qū)分。進(jìn)一步進(jìn)行PLS-DA分析，結(jié)果顯示組間區(qū)分明確。PLS-DA載荷圖顯示，組氨酸、丁酸鹽等多個代謝物對樣本間的區(qū)分有較高貢獻(xiàn)率。進(jìn)一步篩選VIP值>1且<0.05的代謝物，結(jié)果顯示，與針刺組相比，艾灸組大鼠結(jié)腸組織中代謝物膽堿和甘油膽堿磷酸的含量均顯著下降（<0.05或<0.01），甲酸和乙酸的含量均顯著上升（<0.05）。見圖4及表3。

Figure 4.　Diagram of colonic tissue metabolism patterns in acupuncture group （F） and moxibustion group （G）. A： principal component analysis （PCA） score chart； B： partial least squares discriminant analysis （PLS-DA） score chart； C： variable importance in projection （VIP） value diagram in PLS-DA mode； D： PLS-DA loading diagram. n=11.

表3　針刺組與艾灸組結(jié)腸組織差異代謝物比較

*<0.05，**<0.01acupuncture group； ↑： increaseacupuncture group； ↓： decreaseacupuncture group.

2.4差異性代謝物的代謝通路分析采用MetaboAnalyst 5.0軟件并結(jié)合KEGG數(shù)據(jù)庫對差異代謝物進(jìn)行代謝通路分析。（1）空白組-針刺組：與空白組相比，針刺組大鼠結(jié)腸組織發(fā)生變化的主要代謝為：甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝，纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸的生物合成，以及?；撬岷蛠喤；撬岽x，見圖5A。（2）空白組-艾灸組：與空白組相比，艾灸組大鼠結(jié)腸組織發(fā)生變化的主要代謝為：甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝，以及甘油磷脂代謝，見圖5B。（3）針刺組-艾灸組：與艾灸組相比，針刺組大鼠結(jié)腸組織發(fā)生變化的主要代謝通路為：甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝，?；撬岷蛠喤；撬岽x，以及甘油磷脂代謝，見圖5C。

Figure 5.　Metabolite-related metabolic pathways changing in colon tissues of the rats in each group. A： blank group and acupuncture group； B： blank group and moxibustion group； C： acupuncture group and moxibustion group.

3　腸道菌群結(jié)果分析

3.1OTU Venn圖分析如圖6所示，空白組、針刺組和艾灸組的OTU總數(shù)分別為1 382、1 837和1 591，空白組、針刺組和艾灸組特有的OTU數(shù)分別為256、532和383。從整體上看，與空白組相比，針刺和艾灸干預(yù)后大鼠部分腸道菌群豐度顯著上升（<0.05）。

Figure 6.　Venn diagram of operational taxonomic unit （OTU） number of intestinal flora in the rats of each group. E： blank group； F： acupuncture group； G： moxibustion group.

3.2α多樣性分析Chao1指數(shù)和基于豐度的覆蓋估計值（abundance-based coverage estimator， ACE）是菌群α多樣性分析的常用指標(biāo)［19］，二者的值越大代表群落豐富度越高。本實(shí)驗(yàn)中，與空白組相比，針刺組和艾灸組大鼠腸道菌群Chao1指數(shù)和ACE均顯著上升（<0.05），見圖7。

Figure 7.　Comparison of intestinal flora abundance index and diversity index of the rats in each group. A： Chao1 index； B： abundance-based coverage estimator （ACE）. E： blank group； F： acupuncture group； G： moxibustion group.

3.3β多樣性分析β多樣性分析通過分析各類菌群在樣品中的含量，計算出不同樣品間的多樣性值，進(jìn)而對不同菌群的結(jié)構(gòu)進(jìn)行比較。在主坐標(biāo)分析（principal coordinates analysis， PCoA）主成分（principal component， PC）圖中，每一個點(diǎn)代表一個樣本，不同顏色表示不同組別，點(diǎn)與點(diǎn)的距離與樣本相似性成正比。如圖8所示，橫坐標(biāo)PC1的貢獻(xiàn)率為10.014%，縱坐標(biāo)PC2的貢獻(xiàn)率為8.343%，3組樣品可以較好區(qū)分，針刺組與空白組腸道菌群構(gòu)成區(qū)分更顯著。

Figure 8.　The principal coordinates analysis （PCoA） score plot of intestinal flora β diversity of the rats in each group. E： blank group； F： acupuncture group； G： moxibustion group.

3.4門水平和屬水平比較對各組大鼠腸道菌群門水平的相對豐度進(jìn)行統(tǒng)計（圖9），最主要的為厚壁菌門（）、變形桿菌門（）、擬桿菌門（）、綠彎菌門（）、放線菌門（）、酸桿菌門（）、軟壁菌門（）、疣微菌門（）、P_TM7、芽單胞菌門（）、藍(lán)藻菌門（）等。其中，與空白組相比，針刺干預(yù)后放線菌門、綠彎菌門、酸桿菌門和芽單胞菌門相對豐度均顯著上升（<0.05），P_TM7和厚壁菌門則顯著下降（<0.05）；艾灸干預(yù)后變形桿菌門、綠彎菌門、放線菌門、酸桿菌門、軟壁菌門、疣微菌門、P_TM7、芽單胞菌門和藍(lán)藻菌門相對豐度的變化差異無統(tǒng)計學(xué)意義（>0.05），但有上調(diào)趨勢。

Figure 9.　Comparison of phylum-level composition of intestinal flora in the rats of each group.

在屬水平上（圖10），相對豐度較高的菌屬種類主要包括乳酸桿菌屬（）、鞘氨醇單胞菌屬（）、巴氏桿菌科（）、普雷沃菌屬（）、韋榮球菌屬（）、聚集桿菌屬（）、梭菌屬（）、消化鏈球菌（）、S24-7、羅斯氏菌屬（）、支原體（）等。其中，與空白組相比，針刺干預(yù)后鞘氨醇單胞菌屬和韋榮球菌屬相對豐度顯著上升（<0.05），巴氏桿菌科、普雷沃菌屬、聚集桿菌屬、梭菌科、消化鏈球菌科、S24-7和羅斯氏菌呈上調(diào)趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（>0.05），乳酸桿菌屬和支原體呈現(xiàn)下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（>0.05）；艾灸干預(yù)后乳酸桿菌屬、梭菌科和支原體略有下降，其余均有上調(diào)趨勢，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（>0.05）。

Figure 10.　Comparison of genus-level composition of intestinal flora in the rats of each group.

3.5物種差異分析LEfSe分析即運(yùn)用線性判別分析（linear discriminant analysis， LDA）進(jìn)行多個分組間的比較，找到不同樣本產(chǎn)生顯著性差異影響的菌群。LDA值得分圖展示的是有顯著差異的菌群種類，柱狀圖的長度代表顯著差異物種的影響大小。如圖11、12所示，3組大鼠均有差異菌屬?？瞻捉M優(yōu)勢菌種為厚壁菌門（）、屬、布魯氏菌科（）等；針刺組優(yōu)勢菌種有變形桿菌門（）、綠彎菌門（）、酸桿菌門（）、芽單胞菌門（）等；艾灸組為孤島桿菌屬（）、微小微單胞菌屬（）、孿生菌科（）等。

Figure 11.　Linear discriminant analysis （LDA） score map of intestinal flora with significant differences of the rats in each group.

Figure 12.　Evolution relationship diagram of significantly differential bacterial communities in rat feces. E： blank group； F： acupuncture group； G： moxibustion group.

討論

針刺屬于機(jī)械刺激，表現(xiàn)為生物力學(xué)作用；艾灸屬于溫?zé)岽碳ぃ憩F(xiàn)為生物熱傳導(dǎo)效應(yīng)。針灸防治疾病的起效機(jī)制是多層次、多靶點(diǎn)的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)關(guān)系［20］。1H-NMR代謝組學(xué)技術(shù)能對生物體內(nèi)的代謝物進(jìn)行鑒定和量化［21-22］，分析疾病發(fā)生發(fā)展的過程或闡明干預(yù)措施的內(nèi)在機(jī)制［23］，因此對針灸作用機(jī)制的研究，需要代謝組學(xué)技術(shù)的支持。此外，針灸能通過調(diào)節(jié)腸道菌群而對多種疾病產(chǎn)生治療作用［24-27］。以往對針灸作用機(jī)制的研究，多以某一疾病動物模型為觀察對象。因此，以無疾病、健康大鼠為觀察對象，通過分析各組大鼠結(jié)腸差異代謝物和腸道菌群的結(jié)構(gòu)變化來探討針刺與艾灸的作用差異是本實(shí)驗(yàn)的特色。

在本實(shí)驗(yàn)中，針刺和艾灸干預(yù)后3組大鼠組間體重比較和干預(yù)前后攝食量比較均無顯著差異，針刺和艾灸干預(yù)并未對健康大鼠正常飲食造成影響。1H-NMR代謝組學(xué)結(jié)果顯示，針刺和艾灸干預(yù)均引起了大鼠結(jié)腸組織代謝模式的變化，說明在大鼠天樞穴和上巨虛穴進(jìn)行針灸干預(yù)后，大鼠機(jī)體產(chǎn)生了與結(jié)腸代謝相關(guān)的生物學(xué)效應(yīng)，這與中醫(yī)學(xué)《靈樞》中所說的“夫十二經(jīng)脈者，內(nèi)屬于臟腑，外絡(luò)于肢節(jié)”一致，即體表經(jīng)穴所接收的刺激能影響內(nèi)在臟腑的生理功能［28］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組相比，針刺組大鼠結(jié)腸組織代謝模式的改變主要表現(xiàn)為丁酸鹽和組氨酸代謝，以及纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸的生物合成。丁酸鹽屬于短鏈不飽和肪酸，在維持腸上皮細(xì)胞完整性、抑制腸道炎癥等方面具有重要的作用［29-31］，同時還能促進(jìn)腸道黏液分泌和上皮屏障形成，進(jìn)而降低致病菌及代謝產(chǎn)物對人體的不良影響［32］。組氨酸可降低胃酸濃度并抑制植物神經(jīng)緊張而引起的消化道潰爛［33］。纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸三者作為支鏈氨基酸，對促進(jìn)腸道發(fā)育和氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)有重要作用［34-35］。由此筆者合理推斷，針刺可能通過影響與胃腸道疾病相關(guān)的代謝產(chǎn)物，如丁酸鹽和組氨酸等，從而對胃腸道疾病產(chǎn)生治療作用。與空白組相比，艾灸組大鼠結(jié)腸組織代謝模式的改變主要為膽堿、肌醇和甘油磷脂代謝。膽堿是動物生長所必需的營養(yǎng)素，能作為神經(jīng)遞質(zhì)維持基本的神經(jīng)信號傳遞［36］。研究顯示，膽堿可有效提高肝臟脂肪代謝的效率，對脂肪的合成、氧化以及轉(zhuǎn)運(yùn)具有調(diào)控作用［37-38］，能顯著降低肝臟脂肪沉積并輔助體內(nèi)脂肪的再分配、促進(jìn)脂肪代謝［39-40］，這與本單位以往的研究［41-42］結(jié)果一致。這說明艾灸對與脂質(zhì)代謝類疾病相關(guān)的代謝產(chǎn)物（如膽堿和肌醇等）的調(diào)節(jié)，是治療高脂血癥、高膽固醇癥等疾病的作用機(jī)制之一。

腸道菌群是人體最大的微生態(tài)系統(tǒng)，能與宿主互利共生［43］。在本實(shí)驗(yàn)中，與空白組相比，針刺組和艾灸組大鼠在針、灸干預(yù)后，腸道菌群組成的豐度顯著升高，說明針灸對維持腸道微生態(tài)的平衡具有積極的影響作用，與以往研究［15］結(jié)果一致。既往研究顯示，放線菌門包含了許多有益菌屬，如雙歧桿菌屬［44］，能在人體腸道內(nèi)形成益生菌環(huán)境并改善消化問題［45］。雙歧桿菌所產(chǎn)生的乳酸還可以被霍式真桿菌利用轉(zhuǎn)化為丁酸鹽［46］，前文闡述了丁酸鹽是腸道免疫調(diào)節(jié)和抗炎的重要參與者。此外，綠彎菌門與一些腸道疾?。ㄈ缪装Y性腸?。┯嘘P(guān)，但具體的機(jī)制還需進(jìn)一步研究［47-48］。也有研究表明，酸桿菌門也是腸道疾病的重要影響因素，腸道炎性疾病患者腸道中酸桿菌門的數(shù)量顯著減少［49-50］。在本實(shí)驗(yàn)中，針刺干預(yù)后放線菌門、綠彎菌門和酸桿菌門均顯著增加。由此推測，針刺可以通過調(diào)節(jié)以上菌群，對胃腸道功能發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。而艾灸干預(yù)后綠彎菌門、放線菌門、酸桿菌門、軟壁菌門、疣微菌門等雖有上調(diào)趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，這可能與本次實(shí)驗(yàn)的樣本量較少（=11）有關(guān)。β多樣性分析結(jié)果顯示，空白組與艾灸組樣本相似度高、差異較小，而與針刺組樣本相對差異較大，提示短期（7 d）內(nèi)在健康生理情況下，對天樞穴和上巨虛穴進(jìn)行針刺刺激比進(jìn)行艾灸刺激對大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響更大，調(diào)節(jié)作用更快，但具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

綜上所述，針刺與艾灸兩種干預(yù)方法存在一定差異：針刺可能擅長通過調(diào)節(jié)酸類代謝物進(jìn)而治療胃腸道疾??；艾灸可能更適合用于治療脂質(zhì)代謝異常引發(fā)的代謝性疾病。針、灸干預(yù)對腸道微生態(tài)環(huán)境均有積極的調(diào)節(jié)作用；針刺在短期內(nèi)對腸道菌群的調(diào)節(jié)作用更快，并可能通過調(diào)節(jié)與胃腸功能相關(guān)的菌群緩解胃腸道疾病。但本實(shí)驗(yàn)以正常健康大鼠為研究對象，存在一定局限性。后續(xù)研究將引入疾病模型，為臨床實(shí)踐提供更多的循證依據(jù)。

［1］方園，范麗紅，黃河，等. 艾灸與針刺療法的差異分析［J］. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報， 2020， 40（9）：1070-1076.

Fang Y， Fan LH， Huang H， et al. Analysis of the difference between moxibustion and acupuncture Therapy［J］. Hunan Univ Chin Med， 2020， 40（9）：1070-1076.

［2］常小榮，劉密，嚴(yán)潔，等. 艾灸溫通溫補(bǔ)效應(yīng)的作用機(jī)制及其規(guī)律研究［J］. 世界中醫(yī)藥. 2013. 8（8）：875-879.

Chang XR， Liu M，Yan J， et al. Research on mechanisms and principles of warm-unblock and warm-tonic effects on moxibustion［J］. World Chin Med， 2013， 8（8）：875-879.

［3］ Shu Q， Wang H， Litscher D， et al. Acupuncture and moxibustion have different effects on fatigue by regulating the autonomic nervous system： a pilot controlled clinical trial［J］. Sci Rep， 2016， 6：37846.

［4］ Li Q， Xu HY， Li B， et al. Analysis of the differences in brain function response after acupuncture and moxibustion at Zusanli （ST36） in the patients with functional dyspepsia based on fractional amplitude of low frequency fluctuation of rest functional magnetic resonance imaging［J］. World J Acupunct Moxibustion， 2021， 31（3）：181-186.

［5］鐘歡，黎銘玉，舒文娜，等. 針刺與艾灸對慢性萎縮性胃炎大鼠環(huán)氧化酶-2和炎癥相關(guān)因子的影響差異研究［J］. 中華中醫(yī)藥雜志， 2022， 37（4）：2246-2250.

Zhong H， Li MY， Shu WN， et al. Difference research on effect of acupuncture and moxibustion on cyclooxygenase-2 and inflammation-related factors in rats with chronic atrophic gastritis［J］. China J Tradit Chin Med Pharm， 2022， 37（4）：2246-2250.

［6］朱丹. 電針與艾灸對功能性腹瀉大鼠血清GAS與空腸SCF蛋白表達(dá)的差異性研究［D］. 西安：陜西中醫(yī)藥大學(xué)， 2019.

Zhu D. Study on the different effects between electro-acupuncture and moxibustion on serum GAS and jejunal SCF protein on functional diarrhea rats［D］. Xi'an： Shaanxi University of Chinese Medicine， 2019.

［7］王佳麗. 針灸對環(huán)磷酰胺化療小鼠血清中FL與MIP-1α含量影響的研究［D］. 鄭州：河南中醫(yī)藥大學(xué)， 2016.

Wang JL. Research on the effects of acupuncture and moxibustion in the serum FL and MIP-1α in CTX chemotherapy mice［D］. Zhengzhou： Henan University of Chinese Medicine， 2016.

［8］ Nzoughet JK， Bocca C， Simard G， et al. A non-targeted UHPLC-HRMS metabolomics pipeline for metabolite identification： application to cardiac remote ischemic preconditioning［J］. Anal Chem， 2017， 89（3）：2138-2146.

［9］ Bao CH，Wang CY， Li GN， et al. Effect of mild moxibustion on intestinal microbiota and NLRP6 inflammasome signaling in rats with post-inflammatory irritable bowel syndrome［J］. World J Gastroenterol， 2019， 25（32）：4696-4714.

［10］ Jiang H， Deng SZ， Zhang JY， et al. Acupuncture treatment for post-stroke depression： intestinal microbiota and its role［J］. Front Neurosci， 2023， 17：1146946.

［11］ 李宗仁. 實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)［M］. 北京：中國中醫(yī)藥出版社， 2003：425-431.

Li ZR. Experimental acupuncture［M］. Beijing： China Traditional Chinese Medicine Press， 2003：425-431.

［12］ 胡元亮. 實(shí)驗(yàn)動物針灸手冊［M］. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社， 2003：390-392.

Hu YL. Acupuncture and moxibustion manual for experimental animals［M］. Beijing： China Agriculture Press， 2003：390-392.

［13］ 李奎武，儲浩然，阮靜茹，等. 基于SCF/c-kit信號通路探討艾灸干預(yù)對腹瀉型腸易激綜合征大鼠免疫功能穩(wěn)態(tài)的影響［J］. 中國針灸， 2023， 43（2）：177-185.

Li kw， Chu HR， Ruan JR， et al. Effect of moxibustion on immune function homeostasis in rats with diarrhea irritable bowel syndrome based on SCF/c-kit signaling pathway［J］. Chin Acupunct Moxibustion， 2023， 43（2）：177-185.

［14］ 楊易陳，周子嫻，薛婷，等. 電針對腹瀉型腸易激綜合征大鼠內(nèi)臟敏感性及結(jié)腸NGF、TrkA、TRPV1表達(dá)的影響［J］. 中國針灸， 2022， 42（12）：1395-1402.

Yang YC， Zhou ZX， Xue T， et al. Effect of electroacupuncture on visceral sensitivity and colonic NGF， TrkA， TRPV1 expression in IBS-D rats［J］. Chin Acupunct Moxibustion， 2022， 42（12）：1395-1402.

［15］ 周鈺點(diǎn)，楊姝瑞，王雅媛，等. 不同腧穴配伍電針對肥胖大鼠腸道炎性反應(yīng)和腸道菌群的影響［J］. 中國針灸， 2022， 42（10）：1145-1152.

Zhou YD， Yang SR， Wang YY， et al. Effect of electroacupuncture at different acupoint combination on intestinal inflammatory response and intestinal flora in obese rats［J］. Chin Acupunct Moxibustion， 2022， 42（10）：1145-1152.

［16］ 楊星月，馬玉俠，杜冬青，等. 基于代謝組學(xué)的隔藥灸臍法治療原發(fā)性痛經(jīng)的機(jī)理研究［J］. 上海針灸雜志， 2015， 34（8）：707-710.

Yang XY， Ma YX， Du DQ， et al. Metabonomics-based mechanism study on herb-partitioned moxibustion at umbilicus for primary dysmenorrhea［J］. Shanghai Acupunct Moxibustion， 2015， 34（8）：707-710.

［17］ Wu QF， Zhang Q， Sun B， et al.1HNMR-based metabonomic study on the metabolic changes in the plasma of patients with functional dyspepsia and the effect of acupuncture［J］. J Pharm Biomed Anal， 2010， 51（3）：698-704.

［18］ 劉霞. 基于16S rDNA和1H NMR技術(shù)探討隔藥餅灸對腸易激綜合征大鼠腸道菌群和代謝物的影響［D］. 長沙：湖南中醫(yī)藥大學(xué)， 2019.

Liu X. Effects of herb-partitioned moxibustion on intestinal flora and metabolites in rats with irritable bowel syndrome based on 16S rDNA and1H NMR techniques［D］. Changsha： Hunan University of Chinese Medicine， 2019.

［19］ Lu CY， Wang H， Yang JH， et al. Changes in vaginal microbiome diversity in women with polycystic ovary syndrome［J］. Front Cell Infect Microbiol， 2021， 11：755741.

［20］ 鄧淑芳，吳巧鳳，楊明曉，等. 代謝組學(xué)技術(shù)及其在針灸關(guān)鍵科學(xué)問題研究中的應(yīng)用［J］. 世界中醫(yī)藥， 2015， 10（4）：472-476.

Deng SF，Wu QF， Yang XM， et al. Applying metabolomics technology in solving scientific problems of acumoxibustion［J］. World Chin Med， 2015， 10（4）：472-476.

［21］ Dunn WB， Broadhurst D， Begley P， et al. Procedures for large-scale metabolic profiling of serum and plasma using gas chromatography and liquid chromatography coupled to mass spectrometry［J］. Nat Protoc， 2011， 6（7）：1060-1083.

［22］ Varvarousis D， Xanthos T， Ferino G， et al. Metabolomics profiling reveals different patterns in an animal model of asphyxial and dysrhythmic cardiac arrest［J］. Sci Rep， 2017， 7（1）：16575.

［23］ Nicholson JK， Lindon JC. Systems biology： metabonomics［J］. Nature， 2008， 455（7216）：1054-1056.

［24］ 孫軍剛，何曦萌，袁紅，等. 針灸“足三里”對高尿酸血癥小鼠腸道菌群的影響［J］. 四川中醫(yī)， 2023， 41（1）：52-57.

Sun JG， He XM， Yuan H， et al. Effect of acupuncturing at Zusanli （ST36） on intestinal microbiota for hyperuricemia mice［J］. J Sichuan Tradit Chin Med， 2023， 41（1）：52-57.

［25］ 周應(yīng)成，李智強(qiáng)，王磊，等. 針灸干預(yù)兒童原發(fā)性肝癌的臨床效應(yīng)及對免疫功能和腸道菌群代謝功能的影響［J］. 中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志， 2022， 30（12）：854-858.

Zhou YC， Li ZQ， Wang L， et al. Observation of the clinical effects of acupuncture intervention inprimary liver cancer in children and the effects on immune function and metabolic function of intestinal flora［J］. Chin J Integr Tradit West Med Dig， 2022， 30（12）：854-858.

［26］ 王志杰，王文慧，周杰，等. 基于腸道菌群論針灸防治高血壓的思路探析［J］. 針灸臨床雜志， 2022， 38（11）：86-90.

Wang ZJ， Wang WH， Zhou J， et al.Idea of acupuncture and moxibustion in preventing and treating hypertension based on intestinal flora［J］. J Clin Acupunct Moxibustion， 2022， 38（11）：86-90.

［27］ 李超然，孫忠人，王玉琳，等. 從腸道菌群探討針灸治療慢性疲勞綜合征的機(jī)制［J］. 中國針灸， 2022， 42（8）：956-960.

Li CR， Sun ZR， Wang YL， et al. Mechanism of acupuncture and moxibustion in treatment of chronic fatigue syndrome from perspective of intestinal flora［J］. Chin Acupunct Moxibustion， 2022， 42（8）：956-960.

［28］ 袁其倫. 穴位實(shí)質(zhì)及與臟腑相關(guān)的新認(rèn)識和新應(yīng)用［J］. 中國針灸， 2004， 24（6）：55-58.

Yuan QL. New cognition and new application of acupoint essence and acupoints-viscera correlation［J］. Chin Acupunct Moxibustion， 2004， 24（6）：55-58.

［29］ Gasaly N， Hermoso MA， Gotteland M. Butyrate and the fine-tuning of colonic homeostasis： implication for inflammatory bowel diseases［J］. Int J Mol Sci， 2021， 22（6）：3061.

［30］ Portincasa P， Bonfrate L， Vacca M， et al. Gut microbiota and short chain fatty acids： implications in glucose homeostasis［J］. Int J Mol Sci， 2022， 23（3）：1105.

［31］ 滕文彬，李玉紅，祝勝美. 低氧誘導(dǎo)因子的調(diào)控途徑和在腸道疾病中的作用［J］. 中國病理生理雜志， 2019， 35（10）：1894-1900.

Teng WB， Li YH， Zhu SM. Regulatory pathway of hypoxia-inducible factor and its role in intestina diseases［J］. Chin J Pathophysiol， 2019， 35（10）：1894-1900.

［32］ 車浩，應(yīng)曉江，李振軍，等. 丁酸鹽對Toll樣受體及其下游因子的調(diào)節(jié)［J］. 生理學(xué)報， 2022， 74（5）：827-836.

Che H， Ying XJ， Li ZJ， et al. Regulation of Toll-like receptors and their downstream factors by butyrate［J］. Acta Physiol Sin， 2022， 74（5）：827-836.

［33］ 賀洪，劉慧敏. 堿性氨基酸對大強(qiáng)度運(yùn)動后機(jī)體的保護(hù)作用［J］. 湘潭師范學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版）， 2008， 30（4）：30-32.

He H， Liu HM. Protective effect of basic amino acids on body after intensive exercise［J］. J Xiangtan Normal Univ （Nat Sci Ed）， 2008， 30（4）：30-32.

［34］ Fedewa MV， Spencer SO， Williams TD， et al. Effect of branched-chain amino acid supplementation on muscle soreness following exercise： a meta-analysis［J］. Int J Vitam Nutr Res， 2019， 89（5/6）：348-356.

［35］ Nishimura J， Masaki T， Arakawa M， et al. Isoleucine prevents the accumulation of tissue triglycerides and upregulates the expression of PPARα and uncoupling protein in diet-induced obese mice［J］. J Nutr， 2010， 140（3）：496-500.

［36］ Hollenbeck CB. An introduction to the nutrition and metabolism of choline［J］. Cent Nerv Syst Agents Med Chem， 2012， 12（2）：100-113.

［37］ 劉喆佳，王弘浩，姚軍虎，等. 膽堿對奶牛肝臟脂肪代謝的調(diào)控作用及機(jī)制［J］. 草業(yè)科學(xué)， 2021， 38（4）：776-784.

Liu ZJ， Wang HH， Yao JH， et al. The regulatory effect and mechanism of choline on liver fat metabolism in dairy cows［J］. Pratac Sci， 2021， 38（4）：776-784.

［38］ 鄒步，唐瑩，楊文玲，等. 腸道菌群-FXR軸在代謝性疾病中的作用［J］. 中國病理生理雜志， 2019， 35（9）：1716-1720.

Zou B， Tang Y， Yang WL， et al. Role of intestinal microbiota-farnesoid X receptor axis in metabolic diseases［J］. Chin J Pathophysiol， 2019， 35（9）：1716-1720.

［39］ 劉曉永，錢和，楊天寶. 黑曲霉WS-65固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)肌醇的研究［J］. 飼料工業(yè)， 2003， 24（11）：41-43.

Liu XY， Qian H， Yang TB.Study on the production of inositol by solid-state fermentation of aspergillus niger WS-65［J］. Feed Ind， 2003， 24（11）：41-43.

［40］ 唐國慶，熊周漩. 影響肌醇生產(chǎn)得率和質(zhì)量的因素［J］. 糧食與飼料工業(yè)，1991（4）：59-61.

Tang GQ， Xiong ZX.Factors affecting the yield and quality of inositol production［J］. Cereal Feed Ind， 1991（4）：59-61.

［41］ 劉惠娟，歐陽里知，李芊，等. 基于Wnt/β-catenin通路探討隔藥餅灸對高脂血癥兔調(diào)脂機(jī)制的影響［J］. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報， 2023， 43（6）：1098-1104.

Liu HJ， Ouyang LZ， Li Q， et al. Effects of medicinal cake-separated moxibustion on the mechanism of regulating lipid in rabbits with hyperlipidemia based on Wnt/B-cateninpathway［J］. J Hunan Univ Chin Med， 2023， 43（6）：1098-1104.

［42］ 方園，黃河，劉邁蘭，等. 隔藥餅灸對動脈粥樣硬化兔血清脂聯(lián)素與血脂水平的影響［J］. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報， 2021， 41（10）：1477-1481.

Fang Y， Huang H， Liu ML， et al. Effect of herbal cake-separated moxibustion on serum adiponectin and blood lipid levels in rabbits with atherosclerosis［J］. J Hunan Univ Chin Med， 2021， 41（10）：1477-1481.

［43］ Lin L， Zhang J. Role of intestinal microbiota and metabolites on gut homeostasis and human diseases［J］. BMC Immunol， 2017， 18（1）：2.

［44］ 劉苗苗，畢冉冉，孫玉敬. 果蔬與腸道菌群互作及其健康功效研究進(jìn)展［J］. 中國食品學(xué)報， 2022， 22（4）：387-407.

Liu MM， Bi RR， Sun YJ. Recent advances on the interaction between fruits or vegetables and intestinal flora and its effect on health［J］. J Chin Inst Food Sci Technol， 2022， 22（4）：387-407.

［45］ 廖莉，王禾. 雙歧桿菌四聯(lián)活菌片治療老年功能性消化不良的臨床效果［J］. 臨床合理用藥， 2023， 16（17）：13-16.

Liao L， Wang H. Clinical effect of bifidobacterium tetrad tablets in the treatment of functional dyspepsia in the aged［J］. Chin J Clin Ration Drug Use， 2023， 16（17）：13-16.

［46］ 占凱，吳皓萌，鄭歡，等. IBS-D大鼠腸道菌群-短鏈脂肪酸代謝軸變化特點(diǎn)及丁酸鈉干預(yù)作用研究［J/OL］. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志， 2023 （2023-06-16）［2023-06-28］. https：//kns.cnki.net/kcms2/detail/11.4822.R.20230616. 0943.002.html.

Zhan K，Wu HM， Zheng H， et al. Alterations in gut microbiota-short-chain fatty acid axis in rats with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome and the effect of sodium butyrate［J/OL］. Chin J Comp Med， 2023 （2023-06-16）［2023-06-28］. https：//kns.cnki.net/kcms2/detail/11.4822.R.20230616.0943.002.html.

［47］ Zhu HZ， Liang YD， Ma QY， et al. Xiaoyaosan improves depressive-like behavior in rats with chronic immobilization stress through modulation of the gut microbiota［J］. Biomed Pharmacother， 2019， 112：108621.

［48］ 曹莞婷，范一宏，呂賓. 腸道菌群對炎癥性腸病診斷的研究進(jìn)展［J］. 世界華人消化雜志， 2019， 27（3）：190-196.

Cao WT， Fan YH， Lv B. Intestinal microbial markers for diagnosis of inflammatory bowel disease［J］. World Chin J Digestol， 2019， 27（3）：190-196.

［49］ Zhang K， Shen X， Han L， et al. Effects on the intestinal morphology， inflammatory response and microflora in piglets challenged with enterotoxigenic escherichia coli K88［J］. Res Vet Sci， 2023， 157：50-61.

［50］ He HC， Lin M， You L， et al. Gut microbiota profile in adult patients with idiopathic nephrotic syndrome［J］. Biomed Res Int， 2021， 2021：8854969.

Effects of different stimulation methods, acupuncture and moxibustion, on colonic metabolites and intestinal flora in rats analyzed by1H-NMR and 16S rDNA sequencing

CAO Sihui， CHEN Lin， HE Haolong， LI Zuqiang， LIU Qiong， LIU Mi△

（，，，410208，）

To observe the differences in the regulatory effects of acupuncture and moxibustion on colonic metabolites and gut microbiota in healthy SD rats.A total of 33 healthy SD rats were randomly divided into 3 groups： blank group， acupuncture group， and moxibustion group， with 11 rats in each group. The rats in blank group was placed in a supine position on the treatment table without interventions for 7 consecutive days. In acupuncture group， stainless steel acupuncture needles were used to puncture bilateral Shangjuxu and Tianshu points， which was retained for 15 min， and the intervention was performed for 7 consecutive days. In moxibustion group， mild moxibustion was applied by placing moxa sticks on both sides of Shangjuxu and Tianshu points， approximately 3～5 cm above the skin. The skin temperature was maintained at （45±5） ℃ for 15 min during each session， and the intervention continued for 7 days. After collecting colon tissues and fecal samples from the rats in each group， proton nuclear magnetic resonance （1H-NMR） technology was utilized to detect the metabolites in colon tissues， and the differential metabolites were screened and identified. Additionally， the abundance and diversity characteristics of intestinal flora， including differential flora， were examined by 16S ribosomal DNA （rDNA） sequencing.The results of metabolomics detection revealed that the levels of histidine， valine and butyric acid in the colons of rats in acupuncture group were significantly higher than those in blank group （<0.05）. Additionally， the levels of choline and inositol in the colons of rats in moxibustion group showed significant increases （<0.01 or<0.05）. Furthermore， there was a significant increase in the levels of formic acid and acetic acid in the colons of rats in moxibustion group compared with acupuncture group （<0.05）. The analysis of the diversity of intestinal flora showed that the Chao1 index and abundance-based coverage estimator （ACE） of the intestinal flora in acupuncture group and moxibustion group were significantly increased compared with blank group （<0.05）. At the phylum and genus levels， the abundance levels of some beneficial bacteria increased， while the abundance levels of some conditional pathogenic bacteria decreased.Acupuncture and moxibustion have different effects on the regulation of colonic metabolites and gut microbiota in healthy SD rats. Acupuncture is better at regulating gastrointestinal diseases caused by an imbalance of acid metabolism， while moxibustion is more suitable for metabolic diseases caused by abnormal lipid metabolism. Acupuncture and moxibustion have a beneficial regulatory effect on the intestinal microenvironment. Specifically， acupuncture has the potential to improve gastrointestinal diseases by influencing the structure and abundance of gut microbiota.

acupuncture and moxibustion； metabolomics； intestinal flora； proton nuclear magnetic resonance； 16S ribosomal DNA sequencing

R245； R363.2； R333

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2023.09.011

1000-4718（2023）09-1620-14

2023-06-29

2023-08-07

國家自然科學(xué)基金資助項目（No. 81774438）；湖南省教育廳資助科研項目（No. 21A0235）；湖南省中醫(yī)藥科研計劃項目（No. C2022027）；湖南省自然科學(xué)基金資助項目（No. 2023JJ30457）；長沙市自然科學(xué)基金資助項目（No. kq2208183）

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（責(zé)任編輯：盧萍，羅森）