許品，李鋒，張雙，紀(jì)大雙，馬燁

[湖北文理學(xué)院附屬醫(yī)院（襄陽(yáng)市中心醫(yī)院） 放射影像科，湖北 襄陽(yáng) 441021]

前列腺癌是男性常見(jiàn)惡性腫瘤，發(fā)病早期無(wú)明顯癥狀，隨著病情進(jìn)展可表現(xiàn)為尿頻、尿急、尿痛或排尿困難等，部分患者表現(xiàn)為骨盆處或大腿根部疼痛，與前列腺增生、前列腺炎癥狀相似，臨床診斷易被遺漏[1-2]。目前多數(shù)前列腺癌患者確診時(shí)已處于晚期，錯(cuò)失了最佳手術(shù)時(shí)機(jī)。前列腺癌的臨床篩查多采用前列腺特異性抗原及前列腺穿刺活檢，前列腺炎、良性前列腺增生、前列腺癌均可造成前列腺特異性抗原異常升高。前列腺穿刺活檢的病理診斷是臨床診斷前列腺癌的金標(biāo)準(zhǔn)，但為有創(chuàng)檢查，易引起感染及出血[3-4]。目前影像學(xué)檢查仍是診斷前列腺癌的重要手段，多種磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）技術(shù)聯(lián)合使用可提高腫瘤惡性風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)檢測(cè)的準(zhǔn)確度，其中擴(kuò)散加權(quán)成像（diffusion-weighted imaging,DWI）、動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描（dynamic contrast enhanced,DCE）可全方位反映腫瘤血流動(dòng)力學(xué)及新生血管生物學(xué)特性，明顯提高前列腺癌檢出率[5-6]。

近年來(lái)，隨著對(duì)癌癥發(fā)生、發(fā)展表觀遺傳學(xué)研究的不斷深入，從基因領(lǐng)域探尋癌癥發(fā)生的相關(guān)生物學(xué)標(biāo)志物已成為現(xiàn)階段熱門研究。MicroRNA（miRNA）參與人體細(xì)胞增殖、分化、凋亡等基因調(diào)控過(guò)程，與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移、浸潤(rùn)緊密相關(guān)[7]。國(guó)內(nèi)外研究均已證實(shí)microRNA-221（miR-221）參與前列腺癌、宮頸鱗狀細(xì)胞癌等多種癌癥的病理過(guò)程，且影響癌細(xì)胞增殖、凋亡、黏附、遷移等生物學(xué)行為[8-9]。然而，目前關(guān)于MRI結(jié)合血清miR-221檢測(cè)在前列腺癌診斷中的價(jià)值尚缺乏報(bào)道。本研究特針對(duì)上述問(wèn)題開(kāi)展研究，以便尋找高效診斷前列腺癌的指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019年5月—2023年1月襄陽(yáng)市中心醫(yī)院收治的103例疑似前列腺癌患者的臨床資料。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①前列腺病變均為單發(fā)病灶；②未接受任何治療；③伴有不同程度的排尿不暢、血尿等癥狀或總前列腺特異性抗原增高；④臨床資料完整。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①有MRI禁忌證，醫(yī)患溝通障礙；②影像學(xué)檢查資料不全或圖像偽影影響測(cè)定；③合并其他類型惡性腫瘤；④血液系統(tǒng)疾?。虎葜匾K器嚴(yán)重功能障礙；⑥自身免疫缺陷。

1.3 MRI檢查

所有患者采用德國(guó)西門子公司MAGNETOM Verio 3.0T超導(dǎo)磁共振掃描儀行MRI檢查。患者掃描前適度充盈患者膀胱，取仰臥位，掃描中心：恥骨及其上方2.0 cm；腹部相控陣線圈：接受線圈；體線圈：射頻發(fā)射線圈，掃描序列包括AX-T1WI、AXT2WI、AXT2-SPAIR、SAG及COR-T2-SPAIR；DWI采用單次激發(fā)自旋回波平面成像，b值取1 500 s/mm2進(jìn)行掃描，同時(shí)利用系統(tǒng)軟件自動(dòng)生成表現(xiàn)彌散系數(shù)（apparent diffusion coefficient,ADC）圖；DCE使用軸位DIXON序列掃描，層厚4 mm，層數(shù)40層，連續(xù)進(jìn)行30期掃描，對(duì)比劑使用釓噴酸葡胺注射液，劑量0.2 mL/kg，采用雙筒高壓注射器，掃描結(jié)束后經(jīng)自帶軟件工作站處理得到病灶區(qū)時(shí)間-信號(hào)強(qiáng)度曲線，對(duì)病灶局部測(cè)量時(shí)采用同樣大小的感興趣區(qū)，擬合患者時(shí)間-信號(hào)曲線時(shí)參照Tofts雙室藥代動(dòng)力學(xué)模型，測(cè)定速率常數(shù)Kep值、容積轉(zhuǎn)運(yùn)常數(shù)Ktrans值、細(xì)胞外間隙對(duì)比劑容積分?jǐn)?shù)Ve值。

1.4 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)血清miR-221的表達(dá)

治療前取患者靜脈血液3 mL，冷藏儲(chǔ)存送外檢測(cè)，離心收集血清，TRIzol法提取血清總RNA，采用RNAiso for Small RNA 試劑（大連寶生生物物工程有限公司）分離miRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）（美國(guó)ABI 7500 Fast Real-Time PCR System PCR儀）。反應(yīng)體系20 μL：cDNA 1 μL，正反向引物各0.5 μL，PCR緩沖液10 μL，蒸餾水8 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min，93 ℃變性30 s，53 ℃退火30 s，60 ℃延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)。內(nèi)參選用U6，擴(kuò)增結(jié)束后繪制熔解曲線，以CT值為基礎(chǔ)，采用2-ΔΔCt法計(jì)算血清miR-221相對(duì)表達(dá)量，qRT-PCR引物序列見(jiàn)表1。

表1 qRT-PCR引物序列

1.5 病理檢查

將前列腺穿刺病理結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，MRI檢查后7 d內(nèi)采用直腸超聲引導(dǎo)下“12+x”針前列腺活檢穿刺，對(duì)異?；芈晠^(qū)域加穿1或2針，每個(gè)標(biāo)本應(yīng)標(biāo)記具體的穿刺部位，參照《前列腺癌規(guī)范化標(biāo)本取材及病理診斷共識(shí)（2021版）》[10]，由2名經(jīng)驗(yàn)豐富病理科醫(yī)師進(jìn)行病理診斷，意見(jiàn)不一致時(shí)協(xié)商至一致。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比或率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)；繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲線。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 穿刺活檢病理診斷結(jié)果

穿刺活檢病理診斷結(jié)果顯示，103例前列腺癌疑似患者中，73例診斷為前列腺癌，18例前列腺增生，12例慢性前列腺炎。

2.2 前列腺癌及非前列腺癌患者M(jìn)RI-DWI檢查指標(biāo)比較

前列腺癌與非前列腺癌患者的ADC值分別為（0.74±0.12）、（0.93±0.18）×10-3mm2/s，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.263，P=0.000），前列腺癌患者的ADC值低于非前列腺癌患者。

2.3 前列腺癌與非前列腺癌患者M(jìn)RI-DCE指標(biāo)比較

前列腺癌與非前列腺癌患者Ktrans比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），前列腺癌患者Ktrans高于非前列腺癌患者。前列腺癌與非前列腺癌患者Kep、Ve比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 前列腺癌與非前列腺癌患者M(jìn)RI-DCE指標(biāo)比較（±s）

表2 前列腺癌與非前列腺癌患者M(jìn)RI-DCE指標(biāo)比較（±s）

組別前列腺癌患者非前列腺癌患者t 值P 值n Ve 73 30 Kep/min 0.73±0.11 0.69±0.09 1.762 0.081 Ktrans/min 0.52±0.08 0.41±0.06 6.780 0.000 0.51±0.07 0.49±0.05 1.421 0.158

2.4 前列腺癌與非前列腺癌患者血清miR-221相對(duì)表達(dá)量比較

前列腺癌與非前列腺癌患者miR-221相對(duì)表達(dá)量分別為（0.69±0.09）、（0.57±0.06），經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.706，P=0.000），前列腺癌患者miR-221相對(duì)表達(dá)量高于非前列腺癌患者。

2.5 ADC、Ktrans、miR-221診斷前列腺癌的價(jià)值

ROC曲線分析結(jié)果顯示，ADC、Ktrans、miR-221及3者聯(lián)合診斷前列腺癌的敏感性分別為72.60%（95% CI：0.607，0.821）、69.86%（95% CI：0.578，0.798）、73.97%（95% CI：0.622，0.832）、82.19%（95% CI：0.711，0.898），特異性分別為80.00%（95% CI：0.609，0.916）、73.33%（95% CI：0.538，0.870）、70.00%（95% CI：0.504，0.846）、86.67%（95% CI：0.684，0.956），AUC分別為0.756（95% CI：0.651，0.860）、0.741（95% CI：0.633，0.848）、0.739（95% CI：0.631，0.846）、0.907（95% CI：0.842，0.972）。見(jiàn)表3和圖1。

圖1 ADC、Ktrans、miR-221診斷前列腺癌的ROC曲線

表3 ADC、Ktrans、miR-221對(duì)前列腺癌的診斷效能

3 討論

前列腺癌發(fā)生與遺傳、年齡、飲食、肥胖等多種復(fù)雜因素有關(guān)，是中老年男性常見(jiàn)病和多發(fā)病[11]。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示，全世界每年約140萬(wàn)前列腺癌新發(fā)病例，且40萬(wàn)患者死于該疾病，我國(guó)前列腺癌發(fā)病率位于男性惡性腫瘤第6位，病死率位于第7位[12-13]。盡早診斷前列腺癌后可通過(guò)根治性手術(shù)來(lái)改善預(yù)后，使患者獲取更大生存收益。前列腺影像報(bào)告和數(shù)據(jù)系統(tǒng)（prostate imaging reporting and data system，PIRADS）自2012年推出就獲得臨床廣泛認(rèn)可，目前已更新至PI-RADS V2.1，其指出采用DWI、DCE等多參數(shù)MRI技術(shù)更有利于準(zhǔn)確診斷前列腺癌。近年來(lái)，MRI技術(shù)已在前列腺癌診斷中廣泛應(yīng)用，相比其他影像學(xué)檢查，其軟組織分辨率更高，可以更加詳細(xì)地觀察前列腺組織內(nèi)部結(jié)構(gòu)和血流情況，其診斷敏感性和特異性得到進(jìn)一步提高[14]。前列腺癌的發(fā)生涉及癌細(xì)胞浸潤(rùn)、入侵血管、增殖分化等一系列生理病理過(guò)程。miRNA是調(diào)節(jié)基因表達(dá)的表觀遺傳機(jī)制，miRNA表達(dá)變化可作為診斷惡性腫瘤的高效生物標(biāo)志物。MRI結(jié)合血清miR-221檢測(cè)是否可進(jìn)一步提高前列腺癌的診斷準(zhǔn)確度值得探討。

本研究結(jié)果顯示，前列腺癌患者ADC值低于非前列腺癌患者，前列腺癌患者Ktrans高于非前列腺癌患者，提示MRI-DWI、MRI-DCE檢查指標(biāo)在診斷前列腺癌方面具有一定應(yīng)用價(jià)值。DWI是MRI功能成像技術(shù)之一，MRI-DWI是目前唯一能夠呈現(xiàn)細(xì)胞膜完整性信息、活體組織中水分子擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)的無(wú)創(chuàng)性影像學(xué)檢查技術(shù)，可以反映不同介質(zhì)中水分子運(yùn)動(dòng)差異，可通過(guò)定量分析ADC值評(píng)估活體組織中水分子微觀運(yùn)動(dòng)情況。前列腺癌等惡性腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖活躍，侵襲性強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖速度較快，致使惡性腫瘤細(xì)胞呈高密度，腫瘤細(xì)胞內(nèi)部水分子運(yùn)動(dòng)受限，擴(kuò)散作用不明顯，使DWI采集信號(hào)強(qiáng)度改變，與正常組織或良性病變相比ADC值明顯降低。DCEMRI是反映對(duì)比劑進(jìn)入腫瘤及對(duì)比劑滲漏至細(xì)胞外，并提供組織灌注直接信息的影像學(xué)方法，是形態(tài)學(xué)與血流動(dòng)力學(xué)相結(jié)合的技術(shù)，可通過(guò)定量分析血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)反映腫瘤血管生成、血管滲透性等生物學(xué)改變。Ktrans可反映人體毛細(xì)血管通透性、血管灌注量等血流動(dòng)力學(xué)改變。生長(zhǎng)繁殖快、侵襲性強(qiáng)的前列腺癌，其局部新生血管較多、新生血管也生長(zhǎng)較快，內(nèi)皮細(xì)胞間隙較周圍正常血管內(nèi)皮間隙變大，相對(duì)血管灌注量、血管滲透面積也較高，易造成血漿對(duì)比劑外滲，Ktrans值增大。與正常前列腺組織相比，良性前列腺病變區(qū)域血流灌注雖有一定增加，但對(duì)血管結(jié)構(gòu)及內(nèi)皮細(xì)胞間隙改變較小，因此Ktrans變化并不十分明顯。李志平等[15]研究顯示，初次前列腺活檢前多參數(shù)MRI檢查有較高的前列腺癌檢出率。ZIAYEE等[16]研究指出，前列腺癌患者Ktrans值顯著高于良性病變患者。

本研究結(jié)果顯示，前列腺癌患者的miR-221相對(duì)表達(dá)量高于非前列腺癌患者，說(shuō)明miR-221在前列腺癌患者中異常高表達(dá)。miRNA可通過(guò)堿基配對(duì)與靶基因結(jié)合，轉(zhuǎn)錄后可調(diào)節(jié)多個(gè)基因的表達(dá)，使靶基因降解或抑制靶基因翻譯，miRNA能夠通過(guò)識(shí)別目標(biāo)mRNA的3'-非翻譯區(qū)末端的非必要互補(bǔ)序列來(lái)與許多基因結(jié)合，控制基因表達(dá)并影響細(xì)胞代謝、增殖、DNA修復(fù)和細(xì)胞凋亡等過(guò)程。miR-221是位于染色體Xp11.3上的基因，其啟動(dòng)子區(qū)域包括位于pre-miR-221下游的3個(gè)poly-A序列，屬于促癌分子。miR-221參與雄激素受體軸的控制和表型發(fā)展，以及前列腺癌細(xì)胞遷移、侵襲等生物學(xué)行為，并可抑制多種細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶復(fù)合物合成，并被建議作為診斷前列腺癌的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。PENG等[17]研究指出，miR-221在前列腺腺癌組織中明顯過(guò)表達(dá)。MARRA等[18]的體內(nèi)研究顯示，通過(guò)誘導(dǎo)miR-221下調(diào)可抑制肝細(xì)胞癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖。本研究ROC曲線分析結(jié)果表明，ADC、Ktrans、miR-221聯(lián)合診斷前列腺癌效能良好。腫瘤在生物學(xué)上具有異質(zhì)性，血液指標(biāo)聯(lián)合MRI影像學(xué)參數(shù)可提供更全面的腫瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)、灌注等生物學(xué)信息，提升臨床診斷前列腺癌的準(zhǔn)確度。

綜上所述，ADC、Ktrans、miR-221聯(lián)合預(yù)診斷前列腺癌效能良好。但本研究仍存在一定局限性，僅納入103例疑似前列腺癌患者，樣本量小，統(tǒng)計(jì)效能有限，仍需增加樣本量，進(jìn)一步證實(shí)研究結(jié)果。