孫宏偉, 李麗娟, 龔 雪

(1.河北省承德市第三醫(yī)院, 河北 承德 067000 2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院, 河北 承德 067000)

子宮內(nèi)膜癌(Endometrial carcinoma,EC)主要表現(xiàn)為陰道不規(guī)則出血、排液癥狀,在晚期可出現(xiàn)惡病質(zhì)表現(xiàn),雖然現(xiàn)代醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展使得子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后有一定的改善,但其發(fā)病率依然處于增長趨勢,及早診治是提高患者預(yù)后的關(guān)鍵[1]。目前臨床診斷EC的方式有細胞學(xué)檢查、刮診、陰道超聲及血清腫瘤標(biāo)志物,其中刮診能夠通過病理學(xué)確診病理類型,但由于其屬于有創(chuàng)性操作,受檢者往往存在抗拒心理而推遲檢查,耽誤診治時機[2];隨著影像學(xué)技術(shù)的發(fā)展,經(jīng)陰道超聲造影(transvaginal sonography contrast-enhanced ultrasonography,TVS-CEUS)技術(shù)憑借其安全性高及動態(tài)觀察病灶等優(yōu)勢在臨床得到了廣泛應(yīng)用[3]。糖類抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VAGF)等血清腫瘤標(biāo)志物對EC的早期診斷有一定的臨床價值,但其效能均不夠理想,而血清微小RNA(micro-RNA,miRNA)作為一種新的生物標(biāo)記,盡管迄今為止尚未將其包括在臨床應(yīng)用規(guī)范中,但一些臨床研究指出,miRNA為疾病的早期臨床監(jiān)測和確定治療方案提供了方向[4]?；诖吮敬窝芯恐荚谔骄砍曉煊奥?lián)合血清腫瘤標(biāo)記物早期診斷EC的臨床價值,以期為臨床診治提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取我院2021年10月至2022年2月診治的120例早期EC患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合EC相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn),且經(jīng)診斷性刮宮后病理診確診為早期EC;②無放、化療病史或?qū)υ煊皠┻^敏;③于本院完成TVS-CEUS檢查;④無手術(shù)禁忌證。排除標(biāo)準(zhǔn):①宮腔手術(shù)史;②其他部位惡性腫瘤或嚴重內(nèi)分泌疾病;③影像學(xué)資料異常。另選取同期120例接受手術(shù)切除的子宮肌瘤患者為對照組,入組患者均經(jīng)術(shù)后病理診斷。EC組患者中年齡38～79歲,平均(56.15±9.67)歲,絕經(jīng)前18例,圍絕經(jīng)39例,絕經(jīng)后63例,術(shù)后病理:內(nèi)膜樣癌106例,漿液性癌14例。對照組患者中年齡36～78歲,平均(57.39±10.24)歲,絕經(jīng)前20例,圍絕經(jīng)35例,絕經(jīng)后65例。兩組患者年齡及絕經(jīng)狀態(tài)比較具有可比性(P>0.05)。

1.2方 法

1.2.1TVS-CEUS:取膀胱截石位,使用GE公司LOGIQ E8彩色多普勒成像儀和RIC 5-9-D陰道探頭,頻率 5 ～ 9MHz行常規(guī)彩超檢查,完成后將儀器調(diào)到超聲造影模式,經(jīng)肘部靜脈團注射2.0mL的Sonovue(意大利Brocca),持續(xù)性觀察180s,記錄好病灶組織的顯影過程,并將獲得的造影劑灌注圖像進行編碼,觀察不同區(qū)域造影劑灌注的先后時間。由2名經(jīng)驗豐富的婦科超聲醫(yī)師進行圖像分析并行診斷。

1.2.2血清CA125、VAGF水平檢測:治療前采集空腹靜脈血,經(jīng)離心處理獲得血清,2h內(nèi)完成檢測,電化學(xué)發(fā)光法檢測血清CA125、VEGF水平。

1.2.3血清miR-125a、miR-200a表達水平的檢測:使用3mL惰性分離凝膠凝結(jié)管采集患者全血,室溫下以4000g離心10min以去除血細胞并收集血清,然后將收集到的血清以16000g離心3min,進一步除去剩余的血細胞,離心后收集血清,并保存在-80℃的冰箱中。將100μL樣品加到300μL水中,充分混合后,加入200μL(pH=4.7-5.5)酸性苯酚。劇烈渦旋后,加入200μL氯仿。再次搖勻后,將混合物在室溫下以16000g離心15min。將上清液(約400μL)小心地移入800μL異丙醇中,并加入40μL、3M(pH=5.2)乙酸鈉。充分混合后,將混合物在-20℃下放置1h,然后在4℃下以16000g離心20min,完全棄掉上清液后,加入1mL的75%乙醇,輕輕顛倒幾次,并在4℃下以16000g離心20min。將上清液完全丟棄并在室溫下干燥。加入20μL DEPC后,沉淀物溶解并儲存在-80℃的冰箱中。按照下列RT-qPCR反應(yīng)體系進行qRT-PCR檢測:TaqMan@SmallRNAAssay(20×)1.0μL,ProductfromRTreaction 2.0μL,TaqMan@UnibersalPCRMasterMixⅡ(2×)10μL,H2O 7μL,cDNA 2μL,共計20μL。反應(yīng)條件:2min,50℃;95min,10℃;15min,95℃;60min,60℃。擴增條件:10min,95℃;15s,95℃;60s,60℃;40個循環(huán)。U6為內(nèi)參,2-△△Ct法計算miR-125a、miR-200a的相對表達水平。

1.3觀察指標(biāo):①根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟的標(biāo)準(zhǔn)進行術(shù)后病理評估并作為金標(biāo)準(zhǔn),分析TVS-CEUS診斷早期EC的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值及kappa一致性;②比較兩組患者血清CA125、VAGF水平;③比較兩組患者血清miR-125a、miR-200a相對表達水平。

2 結(jié) 果

2.1TVS-CEUS診斷早期EC與術(shù)后病理的一致性分析:以術(shù)后病理為金標(biāo)準(zhǔn),TVS-CEUS診斷早期EC的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值及kappa分別為81.67%、71.67%、76.67%、74.24%、79.63%和0.533。見表1。

表1 TVS-CEUS診斷早期EC的效能

2.2兩組患者血清CA125、VEGF水平的比較:EC組患者血清CA125、VEGF水平均顯著高于對照組患者(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者血清CA125 VEGF水平的比較

2.3兩組患者血清miR-125a、miR-200a的相對表達比較:EC組患者血清miR-125a相對表達水平低于對照組患者,miR-200a的相對表達水平高于對照組患者(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者清miR-125a miR-200a的相對表達水平的比較

2.4血清CA125、VEGF水平與miR-125a、miR-200a相對表達水平的相關(guān)性分析:Pearson相關(guān)性分析:結(jié)果顯示,患者血清CA125、VEGF水平與miR-125a相對表達水平呈負相關(guān)(P<0.05),與miR-200a相對表達水平呈正相關(guān)(P<0.05),見表4。

表4 血清CA125 VEGF與miR-125a miR-200a相對表達水平的相關(guān)性分析

2.5TVS-CEUS聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物預(yù)測模型構(gòu)建:以病理診斷結(jié)果為因變量(“EC”=1,“子宮肌瘤”=0),以TVS-CEUS(“陽性”=1,“陰性”=0)、CA125、VEGF、miR-125a、miR-200a為自變量,納入二元Logistic回歸分析,預(yù)測模型為Logit(y)=-3.202+0.489X(TVS-CEUS)+0.547X(CA125)+0.424X(VEGF)-0.580X(miR-125a)+0.658(miR-200a),X表示回歸系數(shù),見表5。

表5 VS-CEUS聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物預(yù)測模型構(gòu)建二元Logistic回歸分析

2.6TVS-CEUS聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物早期診斷EC的ROC分析:以預(yù)測模型所得值、CA125、VEGF、miR-125a、miR-200a為檢驗變量,以病理診斷結(jié)果為狀態(tài)變量,納入ROC分析,ROC結(jié)果顯示:TVS-CEUS聯(lián)合CA125、VEGF、miR-125a、miR-200a早期診斷EC的AUC顯著高于CA125、VEGF、miR-125a、miR-200a單獨診斷的AUC(P<0.05),見表6、圖1。

圖1 TVS-CEUS聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物早期診斷EC的ROC曲線

表6 TVS-CEUS聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物早期診斷EC的效能

3 討 論

超聲造影作為臨床使用比較常見的聲學(xué)造影檢查方法,能夠在造影劑的作用下測定病灶部位的散射回聲、造影參數(shù)及血供情況,因而在多種疾病的診斷中均發(fā)揮著重要的作用[5]。50%確診EC的患者處于I期,準(zhǔn)確的評估病變的大小、肌層浸潤的深度對患者的預(yù)后至關(guān)重要。目前臨床常用的診斷方式雖然能夠?qū)C有明確的診斷,但對肌層侵犯的深度無法做出準(zhǔn)確判斷,而超聲造影則可以有效的展示病灶與子宮肌層的微循環(huán)灌注,對病灶良惡性進行評估并通過病灶與子宮肌層微循環(huán)的差異為早期EC分期提供依據(jù)。本研究結(jié)果顯示,TVS-CEUS診斷早期EC的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為81.67%、71.67%、76.67%,kappa一致性有0.533,具有中度一致性,這主要因為對于不典型的病例患者,即使是超聲造影也沒法顯示出正常肌層與腫瘤侵襲肌層的邊界,但相較于一般的超聲檢查,其診斷效能還是顯著提高了,與廖濤等[6]研究結(jié)果一致。

除了影像學(xué)及病理檢查外,分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展促進了血液學(xué)診斷方式在惡性腫瘤診斷中的應(yīng)用,通過一種及多種血清因子輔助疾病篩查在疾病診斷鑒別中具有重要價值。CA125在女性卵巢組織、輸卵管及子宮內(nèi)膜上均有表達,是一種廣譜的惡性腫瘤標(biāo)志物,但其單獨診斷的意義不大;VEGF作為影響細胞外基質(zhì)變形及血管生成的作用因子,目前對于EC的機理研究認為,子宮內(nèi)膜異常增生后引起細胞間連接受損是CA125釋放進入血液,而VEGF則通過增強血管通透性促進血管生成加速癌細胞增殖[7]。本研究結(jié)果顯示,EC組患者血清CA125、VEGF水平均明顯高于對照組患者,但通過ROC分析結(jié)果顯示,CA125、VEGF用于早期診斷EC的AUC分別為0.651、0.664,效能較低,但李柯[8]的研究認為兩者聯(lián)合診斷EC可在一定程度上彌補單獨CA125檢測的準(zhǔn)確性。血清miRNA將成為一種新的生物標(biāo)記,已發(fā)現(xiàn)在不同體液之間具有不同豐度的miRNA。最近的研究發(fā)現(xiàn),血液循環(huán)和其他體液中存在大量穩(wěn)定的miRNA,血清miRNA可以抵抗核酸酶降解[9]。血清miRNA可以保存很長時間,血清miRNA具有良好的重復(fù)性和再現(xiàn)性,在某些疾病狀態(tài)下,尤其是在腫瘤患者的體液中,某些miRNA的表達會發(fā)生特異性變化,并且這些表達譜的特征變化可以被深入研究,體液miRNA將為疾病提供一種新的非侵入性生物標(biāo)志物,具有良好的臨床應(yīng)用潛力和前景。一項基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn),過表達miR-125a能夠促進EC RD95-2細胞凋亡,抑制細胞增殖,但目前臨床研究尚未明確miR-125a在血清中的表達水平[10];國外的一項回顧性隊列研究結(jié)果顯示,miR-200a在EC患者中表達明顯高于健康對照組,并且與多種miR共同診斷EC的AUC達到了0.958[11]。本研究結(jié)果顯示,EC組患者血清miR-125a相對表達水平顯著低于對照組患者,而miR-200a相對表達水平顯著高于對照組,并且相關(guān)性分析結(jié)果顯示,CA125、VEGF水平與miR-125a相對表達水平呈負相關(guān),與miR-200a相對表達水平呈正相關(guān)。ROC結(jié)果顯示,與CA125、VEGF水平的AUC相比,miR-125a與miR-200a早期診斷EC的AUC為0.827、0.851,具有較高的診斷效能,而聯(lián)合超聲造影與4個血清指標(biāo)后的AUC為0.945,敏感度為90.00%,特異度為94.17%,具有極高的診斷價值。綜上所述,TVS-CEUS在輔助早期EC診斷具有一定的價值,單獨使用血清腫瘤標(biāo)志物的效能較低,但聯(lián)合診斷后的效能較高,可用于早期EC的篩查。