陳濤，林詩(shī)鈴，林逸凡，陳雪婷，鄭燕芳，黃鳴清（福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122）

萬(wàn)氏牛黃清心丸是由牛黃、黃連、朱砂、梔子、郁金、黃芩共6 味中藥材制備而成的中藥復(fù)方制劑，現(xiàn)收載于《中國(guó)藥典》（2020年版一部）[1]，具有清熱解毒，鎮(zhèn)驚安神的功效。臨床上用于熱入心包、熱盛動(dòng)風(fēng)證，癥見(jiàn)高熱煩躁、神昏譫語(yǔ)及小兒高熱驚厥。方中的牛黃清心解毒、豁痰開(kāi)竅，黃連清熱燥濕、瀉火解毒，為君藥。萬(wàn)氏牛黃清心丸以牛黃為君藥，決定其質(zhì)量控制的重點(diǎn)是牛黃及其代用品的質(zhì)量[2]，牛黃中的膽酸類(lèi)成分是其主要活性成分，因此對(duì)萬(wàn)氏牛黃清心丸中的膽汁酸成分進(jìn)行定量研究具有重要意義。牛黃含有甘氨膽酸、?；蛆Z去氧膽酸、甘氨鵝脫氧膽酸、甘氨脫氧膽酸、鵝去氧膽酸等多種膽汁酸[3-5]。藥理研究[6-9]表明，膽汁酸類(lèi)成分具有保肝、利膽、降壓、抗炎、解熱、鎮(zhèn)痛等作用。萬(wàn)氏牛黃清心丸現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)對(duì)牛黃質(zhì)控只規(guī)定其膽紅素含量的測(cè)定[1]，相關(guān)報(bào)道[10]也僅對(duì)膽紅素含量進(jìn)行測(cè)定。因此建立萬(wàn)氏牛黃清心丸中膽汁酸成分的含量測(cè)定方法對(duì)評(píng)價(jià)其質(zhì)量具有重要意義。超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）具有分析速度快、效率高、檢測(cè)靈敏度高等特點(diǎn)，在中藥分析以及質(zhì)量控制領(lǐng)域的應(yīng)用越來(lái)越多[11-12]。故本實(shí)驗(yàn)采用UPLC-MS/MS 法同時(shí)測(cè)定萬(wàn)氏牛黃清心丸中牛磺膽酸、7-酮脫氧膽酸、甘氨膽酸、3-氧代脫氧膽酸、?；蛆Z去氧膽酸、?；敲撗跄懰徕c、膽酸、甘氨鵝脫氧膽酸、甘氨脫氧膽酸、?；鞘懰徕c、甘氨石膽酸、鵝去氧膽酸、去氧膽酸、石膽酸的含量，同時(shí)以化學(xué)模式識(shí)別法對(duì)其含量測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期為萬(wàn)氏牛黃清心丸的質(zhì)量控制提供新的依據(jù)。

1 材料與試藥

1.1 儀器DIONEX UITIMATE 3000 超高效液相色譜系統(tǒng)串聯(lián)四級(jí)桿-靜電軌道肼質(zhì)譜儀（美國(guó)賽默飛世爾公司），配備加熱電噴霧離子源（HESI）；MILLI-Q Direct16 超純水制備儀（美國(guó)Millipore 公司）；CPA225D 十萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)Sartorius 公司）；XM-400UHP 小美靜音超聲儀（昆山小美超聲儀器有限公司）。

1.2 材料與試劑甘氨膽酸（批號(hào)：Y08A9E57765）、3-氧代脫氧膽酸（批號(hào)：N07GY167164）、?；蛆Z去氧膽酸（批號(hào)：Y09S8K43540）、膽酸（批號(hào)：T16J8Q28663）、甘氨鵝脫氧膽酸（ 批號(hào)：Y29M9K57235）、甘氨脫氧膽酸（批號(hào) ：Y27M9E56969）、鵝去氧膽酸（批號(hào)：Z01011LA14）、甘氨石膽酸（批號(hào)：B29J11K119775）、去氧膽酸（批號(hào)：S05N6I5476）、石膽酸（批號(hào)：B24S10J98701）、脫氫膽酸（批號(hào)：S30J9I64022）、7-酮脫氧膽酸（批號(hào)N30GB169735），經(jīng)HPLC 測(cè)定，純度均大于98%，?；悄懰幔兌取?5%，批號(hào)：B15J11J118403）、?；鞘懰徕c（純度≥97%，批號(hào)：Y06N9K74072），以上對(duì)照品均為上海源葉生物科技有限公司產(chǎn)品；?；敲撗跄懰徕c（批號(hào)：B26J9J53831），美國(guó)Sigma-Aldrich 公司，經(jīng)HPLC 測(cè)定，純度≥95%。質(zhì)譜甲醇為L(zhǎng)C-MS級(jí)（美國(guó)賽默飛世爾公司），甲酸為HPLC級(jí)（上海阿拉丁生化科技股份有限公司），其余試劑均為分析純。萬(wàn)氏牛黃清心丸[S1，批號(hào)：200002；S2，批號(hào)：190006；S3，批號(hào)：200003，S4，批號(hào)：210001；S5，批號(hào)：210002；S6，批號(hào)：201005；S7，批號(hào)：210006；S8，批號(hào)：210007；S9，批號(hào)：220002；S10，批號(hào)：220003，S11，批號(hào)：210005；S12，批號(hào)：210008；S13，批號(hào)：190008；S14，批號(hào)：210003；S15，批號(hào)：210004，國(guó)藥集團(tuán)馮了性（佛山）藥業(yè)有限公司]。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜和質(zhì)譜條件

2.1.1色譜條件 Thermo Fisher Scientfic Bremen Hypersil GOLD 色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.9 μm）；流動(dòng)相：甲醇（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脫（0～0.5 min，20%A；0.5～1.5 min，20%A～70%A；7～8 min，70%A～61%A；8～14 min，61%A～80%A；14～15 min，80%A～85%A；15～16 min，85%A～90%A；16～17.5 min，90%A～20%A；17.5～19 min，20%A）；流速：0.2 mL·min-1；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：2 μL。

2.1.2質(zhì)譜條件 采用加熱電噴霧離子源（HESI）負(fù)離子模式，噴霧電壓：-3.0 kV，毛細(xì)管溫度：325 ℃，輔助氣加熱溫度：350 ℃，鞘氣流速：45 Arb，輔助氣流速：10 Arb，質(zhì)譜測(cè)定數(shù)據(jù)采用平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)（PRM）掃描模式，各待測(cè)成分及內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜優(yōu)化參數(shù)見(jiàn)表1，對(duì)照品溶液及供試品溶液中各成分的色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 萬(wàn)氏牛黃清心丸中14 種膽汁酸成分UPLC-MS/MS 色譜圖Figure 1 UPLC-MS/MS chromatogram of 14 cholic acids in Wanshi Niuhuang Qingxin Pills

表1 萬(wàn)氏牛黃清心丸各待測(cè)成分及內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜優(yōu)化參數(shù)Table 1 Optimum parameters of mass spectrum for each component in Wanshi Niuhuang Qingxin Pills and internal standard

2.2 溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液及內(nèi)標(biāo)溶液的配制 分別精密稱(chēng)取14種對(duì)照品，用甲醇溶解配制為2 mg·mL-1的單一對(duì)照品母液。分別精密量取各對(duì)照品母液適量，用甲醇稀釋?zhuān)吹没旌蠈?duì)照品溶液。精密稱(chēng)取脫氫膽酸對(duì)照品（內(nèi)標(biāo)）適量，用甲醇溶解配制為濃度2 mg·mL-1的內(nèi)標(biāo)母液，用甲醇溶液稀釋至濃度為20 ng·mL-1的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取萬(wàn)氏牛黃清心丸0.1 g，加入10 mL 甲醇，超聲提取30 min 后，放冷，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取適量供試品溶液，置于棕色進(jìn)樣瓶中，按1∶1體積比加入內(nèi)標(biāo)溶液，得到含有內(nèi)標(biāo)10 ng·mL-1的供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1線(xiàn)性關(guān)系及定量限考察 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品母液，用甲醇稀釋制成一系列濃度的混合對(duì)照品溶液，按照1∶1體積比加入內(nèi)標(biāo)溶液，得各濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)待測(cè)對(duì)照品混合溶液。按“2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定，考察待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)的峰面積比（Ai/As）與待測(cè)物濃度（C）的線(xiàn)性關(guān)系，用Ai/As 對(duì)待測(cè)物濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，建立回歸方程。以信噪比S/N≈3 和S/N≈10 分別作為各對(duì)照品的檢測(cè)限（LOD）和定量限（LOQ）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 萬(wàn)氏牛黃清心丸待測(cè)成分的線(xiàn)性方程Table 2 Linear equation of tested components in Wanshi Niuhuang Qingxin Pills

2.3.2精密度試驗(yàn) 精密量取混合對(duì)照品溶液適量，制備成各成分濃度依次為640.0、40.0、414.0、5.0、31.0、141.0、1740.0、23.0、103.0、2.0、0.8、42.0、412.0、3.0 ng·mL-1的對(duì)照品混合液，對(duì)半稀釋兩次，得到低、中、高濃度的混合對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下條件連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6次，測(cè)定日內(nèi)精密度，連續(xù)測(cè)定3 d，測(cè)定日間精密度。結(jié)果見(jiàn)表3。計(jì)算得到14 種成分的日內(nèi)精密度RSD 在1.12%～4.56%之間，日間精密度RSD 在0.59%～4.43%之間，表明儀器精密度良好。

表3 萬(wàn)氏牛黃清心丸的精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Test results of precision，repeatability and stability of Wanshi Niuhuang Qingxin Pills

2.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取萬(wàn)氏牛黃清心丸（S1）0.1 g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下條件，于0、2、4、6、8、12、24、48 h進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表3。計(jì)算得到14種成分峰面積的RSD在1.25%～4.33%之間，表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.4重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批萬(wàn)氏牛黃清心丸（S1），按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備6 份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算得到各成分濃度及其RSD。結(jié)果見(jiàn)表3。14 個(gè)成分RSD 在0.73%～4.50%之間，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.5加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知成分含量的萬(wàn)氏牛黃清心丸（S1）0.05 g，平行9 份，分別加入約相當(dāng)于供試品50%、100%、150%含量的14種成分對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算14 種成分的平均加樣回收率及其RSD。結(jié)果見(jiàn)表4。平均加樣回收率在95.6%～103.6%之間，RSD 在0.52%～4.62%之間。

表4 萬(wàn)氏牛黃清心丸的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（±s，n=3）Table 4 Test results of recovery rate of Wanshi Niuhuang Qingxin Pills（±s，n=3）

表4 萬(wàn)氏牛黃清心丸的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（±s，n=3）Table 4 Test results of recovery rate of Wanshi Niuhuang Qingxin Pills（±s，n=3）

化合物牛磺膽酸樣品含量/μg 16.01化合物甘氨鵝脫氧膽酸樣品含量/μg 0.59 7-酮脫氧膽酸1.00甘氨脫氧膽酸2.58甘氨膽酸10.36?；鞘懰徕c0.05 3-氧代脫氧膽酸0.13甘氨石膽酸0.02牛磺鵝去氧膽酸0.78鵝去氧膽酸1.06?；敲撗跄懰徕c3.52去氧膽酸10.29膽酸43.49加入量/μg 8.00 16.01 24.01 0.50 1.00 1.51 5.18 10.36 15.54 0.06 0.13 0.19 0.39 0.78 1.16 1.76 3.52 5.29 21.75 43.49 65.24測(cè)得量/μg 23.78±0.097 31.83±0.075 39.55±0.383 1.50±0.011 1.99±0.027 2.56±0.056 15.81±0.085 20.84±0.298 25.43±0.184 0.19±0.001 0.26±0.003 0.32±0.009 1.17±0.018 1.51±0.016 1.98±0.017 5.33±0.024 6.90±0.112 8.83±0.234 66.40±0.336 86.55±0.686 106.54±1.528平均回收率/%97.1±1.2 98.8±0.5 98.0±1.6 97.8±2.3 97.8±2.7 103.1±3.7 103.2±1.6 101.1±2.9 96.9±1.2 103.3±1.1 101.7±2.5 100.5±4.5 101.9±4.7 95.6±2.1 103.6±1.4 102.7±1.3 95.7±3.2 100.3±4.4 103.3±1.5 99.0±1.6 96.6±2.3 RSD/%1.21 0.52 1.64 2.35 2.73 3.64 1.64 2.81 1.22 1.11 2.41 4.54 4.62 2.21 1.41 1.34 3.38 4.49 1.55 1.64 2.47石膽酸0.07加入量/μg 0.29 0.59 0.88 1.29 2.58 3.87 0.03 0.05 0.08 0.01 0.02 0.03 0.53 1.06 1.59 5.14 10.29 15.43 0.03 0.07 0.10測(cè)得量/μg 0.87±0.015 1.16±0.024 1.46±0.048 3.90±0.049 5.21±0.094 6.20±0.098 0.07±0.001 0.10±0.002 0.13±0.003 0.03±0.001 0.04±0.001 0.05±0.001 1.58±0.016 2.08±0.011 2.62±0.029 15.59±0.268 20.23±0.327 25.81±0.602 0.10±0.001 0.14±0.003 0.18±0.003平均回收率/%97.7±5.0 98.7±4.2 99.9±5.4 102.5±3.8 102±3.6 95.7±2.5 95.6±1.6 96.6±3.1 100.6±4.0 97.9±3.5 102.3±2.4 101.3±3.2 98.5±3.0 96.4±1.1 98.3±1.8 103.1±5.2 96.7±3.2 100.6±3.9 96.0±2.5 102.1±5.0 100.8±2.5 RSD/%3.17 4.25 4.55 3.71 3.62 2.73 1.74 3.32 3.94 3.51 2.44 3.17 3.19 1.14 1.91 3.12 3.34 3.91 2.74 4.61 2.51

2.4 含量測(cè)定分別精密稱(chēng)取不同批次的萬(wàn)氏牛黃清心丸適量，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備樣品，以“2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定，根據(jù)內(nèi)標(biāo)法計(jì)算各批次萬(wàn)氏牛黃清心丸中14種化合物的含量。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 15 批萬(wàn)氏牛黃清心丸中14 種成分含量測(cè)定（n=3）Table 5 Determination of 14 components content in 15 batches of Wanshi Niuhuang Qingxin Pills（n=3）

2.5 化學(xué)計(jì)量學(xué)分析

2.5.1聚類(lèi)分析 為考察不同批次萬(wàn)氏牛黃清心丸之間的成分含量差異性，采用SPSS 26.0 軟件，以所測(cè)得的15批萬(wàn)氏牛黃清心丸中14種膽汁酸成分含量為變量，用瓦爾德法進(jìn)行聚類(lèi)分析。結(jié)果見(jiàn)圖2。15批藥材可聚為2 類(lèi)，其中S12、S14、S15 聚為一類(lèi)，S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8、S9、S10、S11、S13 聚為一類(lèi)，可見(jiàn)不同批次樣品成分存在一定的差異。

圖2 15 批萬(wàn)氏牛黃清心丸的聚類(lèi)分析Figure 2 Cluster analysis of 15 batches of Wanshi Niuhuang Qingxin Pills

2.5.2主成分分析（PCA） 采用SPSS 26.0軟件對(duì)不同批次的萬(wàn)氏牛黃清心丸中14 個(gè)膽汁酸成分含量進(jìn)行主成分分析。前3 個(gè)主成分累計(jì)方差貢獻(xiàn)率達(dá)到91.622%，說(shuō)明3 個(gè)主成分能充分體現(xiàn)萬(wàn)氏牛黃清心丸樣品的原始變量信息。以前3 個(gè)主成分進(jìn)行投影，計(jì)算不同批次的萬(wàn)氏牛黃清心丸的綜合評(píng)價(jià)得分，用于分析單個(gè)樣品在整體中的分布情況，將綜合評(píng)價(jià)得分導(dǎo)入SIMCA 14.1 軟件中，繪制主成分分析圖。見(jiàn)圖3。

圖3 15 批萬(wàn)氏牛黃清心丸的PCA 散點(diǎn)得分圖Figure 3 PCA scatter scores of 15 batches of Wanshi Niuhuang Qingxin Pills

2.5.3正交偏最小二乘法-判別分析（OPLS-DA） 為分析不同批次萬(wàn)氏牛黃清心丸之間各膽汁酸成分含量的相似性和差異性，篩選出其差異標(biāo)志物，采用SIMCA 14.1 軟件對(duì)14 種膽汁酸成分含量建立OPLSDA 模型。見(jiàn)圖4-A。該模型中自變量擬合指數(shù)（R2x）為0.909，因變量擬合指數(shù)（R2y）為0.932，模型預(yù)測(cè)指數(shù)（Q2）為0.841，R2和Q2都超過(guò)0.5，表示模型擬合結(jié)果可被接受[13]。通過(guò)置換檢驗(yàn)，置換次數(shù)為200驗(yàn)證該模型是否過(guò)擬合。見(jiàn)圖4-B。結(jié)果Q2回歸線(xiàn)截距小于0，說(shuō)明模型不存在過(guò)擬合，表明模型有效，認(rèn)為其結(jié)果可用于分析不同批次萬(wàn)氏牛黃清心丸之間的差異性。同時(shí)，計(jì)算不同成分的VIP值。見(jiàn)表6。

圖4 15 批萬(wàn)氏牛黃清心丸的OPLS-DA 得分圖（A）和模型交叉驗(yàn)證結(jié)果（B）Figure 4 OPLS-DA score chart （A）and model cross validation results（B）of 15 batches of Wanshi Niuhuang Qingxin Pills

3 討論

3.1 色譜條件的選擇比較了Acauity UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm.1.7 μm）、Themo Bremen Hypersil GOLD（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）等色譜柱。結(jié)果Thermo Bremen Hypersil GOLD 對(duì)樣品中膽汁酸成分的保留和分離效果較好，峰型尖銳，能實(shí)現(xiàn)對(duì)萬(wàn)氏牛黃清心丸中14種膽汁酸成分的快速、有效的分離。

本研究還比較了不同流動(dòng)相體系（乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%甲酸水、甲醇-0.1%甲酸水）對(duì)色譜圖峰型及各待測(cè)成分間分離的影響。用甲醇-0.1%甲酸水溶液作為流動(dòng)相時(shí)，色譜圖的峰型較好，無(wú)拖尾現(xiàn)象，萬(wàn)氏牛黃清心丸各成分的分離度及響應(yīng)值也較好。

3.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化本研究?jī)?nèi)標(biāo)物選擇脫氫膽酸，脫氫膽酸與本研究中測(cè)定的14 個(gè)膽汁酸成分具有相同的膽烷酸母核，且在萬(wàn)氏牛黃清心丸樣品中未檢出該成分，與其他化合物之間不存在基質(zhì)效應(yīng)，不會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響，故選擇脫氫膽酸作為內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行測(cè)定。

同時(shí)，比較了在正、負(fù)離子掃描模式下，14 種膽汁酸成分的響應(yīng)強(qiáng)度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在負(fù)離子模式下各成分響應(yīng)豐度高，且在PRM 掃描模式下，通過(guò)改變碰撞能量，可篩選出響應(yīng)較高的碎片離子作為定量子離子。

3.3 化學(xué)計(jì)量學(xué)分析通過(guò)對(duì)不同批次萬(wàn)氏牛黃清心丸中的14 種膽汁酸成分含量進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)各批次樣品之間的膽汁酸成分含量有一定的差異。聚類(lèi)分析可將所有批次樣品聚為兩類(lèi)，S12、S14、S15聚為一組，其他批次樣品聚為一組。進(jìn)一步對(duì)各成分含量進(jìn)行主成分分析，主成分分析散點(diǎn)得分圖中，不同批次樣品在圖上呈分散狀，根據(jù)樣品散點(diǎn)之間距離，S12、S14、S15歸為一組，其他批次樣品歸為一組。結(jié)果與聚類(lèi)分析結(jié)果一致。采用OPLS-DA 方法，以P＜0.05，VIP ≥1 為條件篩選不同批次萬(wàn)氏牛黃清心丸差異成分，獲得?；悄懰?、甘氨膽酸、牛磺鵝去氧膽酸、?；敲撗跄懰徕c、甘氨鵝脫氧膽酸、甘氨脫氧膽酸、甘氨石膽酸、去氧膽酸、膽酸等9 個(gè)成分。根據(jù)含量測(cè)定的結(jié)果，9 個(gè)差異性成分中?；悄懰?、甘氨膽酸、去氧膽酸、膽酸等成分的含量較高，占成分總量的89%以上，它們的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為217.08～664.53、119.79～334.06、767.89～983.58、146.32～263.03 μg·g-1。依據(jù)本次測(cè)定的萬(wàn)氏牛黃清心丸樣品結(jié)果，若本品每丸含有的牛黃以?；悄懰帷⒏拾蹦懰?、去氧膽酸、膽酸總量計(jì)，則每丸中牛黃含量范圍為159.8～430.8 mg。藥理研究[6，14]表明，?；悄懰?、甘氨膽酸、去氧膽酸、膽酸具有保肝、利膽、抗炎等功效。因此，其可作為差異性指標(biāo)成分對(duì)不同批次萬(wàn)氏牛黃清心丸進(jìn)行區(qū)分。

本研究結(jié)果顯示，同一廠(chǎng)家中的不同批次產(chǎn)品在含量上存在較大差異，其原因可能是不同批次產(chǎn)品中的牛黃存在質(zhì)量差異，導(dǎo)致了最終成藥檢測(cè)時(shí)的差異。建議將差異性化合物（?；悄懰?、甘氨膽酸、去氧膽酸、膽酸）作為評(píng)價(jià)指標(biāo)建立質(zhì)量控制體系，從而監(jiān)測(cè)制劑的批間質(zhì)量差異。

本研究基于UPLC-MS/MS技術(shù)建立了同時(shí)測(cè)定萬(wàn)氏牛黃清心丸中14 種膽汁酸成分的定量分析方法，該方法靈敏度高、專(zhuān)屬性好，在19 min 內(nèi)可對(duì)膽汁酸成分進(jìn)行分離，可用于萬(wàn)氏牛黃清心丸的膽汁酸成分的測(cè)定，為其質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。不同批間樣品膽汁酸成分含量存在一定的差異，?；悄懰?、甘氨膽酸、去氧膽酸、膽酸可作為產(chǎn)品質(zhì)量的差異性指標(biāo)成分監(jiān)控其質(zhì)量。