葛雯雯 徐 婷 宋 磊

江蘇省南通市第一人民醫(yī)院兒科，江蘇南通 226014

肺炎支原體肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）是由肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，MP）感染引起的肺部疾病，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽等癥狀，若病情嚴重甚至?xí)霈F(xiàn)肺壞死、肺不張等并發(fā)癥[1-2]。因此，為預(yù)防MPP 病情的發(fā)展，兒科醫(yī)生可對患兒預(yù)后進行預(yù)測，為臨床治療方案的調(diào)整提供合理依據(jù)，改善預(yù)后[3-4]。微RNA（microRNA，miRNA）屬于非編碼小RNA，長度為18～24 個核苷酸，參與調(diào)節(jié)細胞增殖、凋亡等多種生理過程[5-6]。研究顯示，mRNA在MPP 中具有重要調(diào)節(jié)作用，如miR-126[7]、miR-138[8]均可參與MPP 的發(fā)生發(fā)展，可作為診斷或預(yù)測MPP的重要生物標志物。但目前miR-126 聯(lián)合miR-138應(yīng)用于MPP 患兒預(yù)后的預(yù)測研究較少?；诖?，本研究旨在探討二者聯(lián)合對MPP 患兒預(yù)后的預(yù)測價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年7 月至2022 年10 月江蘇省南通市第一人民醫(yī)院兒科MPP 患兒114 例，其中男50 例，女64 例；年齡1～10 歲，平均（5.50±2.11）歲；發(fā)熱時間2～8 d，平均（5.51±1.26）d；病情嚴重程度[9]：輕癥78例，重癥36 例。本研究經(jīng)江蘇省南通市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準（2022KT264）。

1.2 納入及排除標準

納入標準：①符合《中國兒童肺炎支原體感染實驗室診斷規(guī)范和臨床實踐專家共識（2019 年）》[10]中MPP 診斷標準；②入院時表現(xiàn)為咳嗽、發(fā)熱、肺聽診異常；③單次MP-IgM 抗體滴度≥1∶160。排除標準：①合并其他呼吸系統(tǒng)疾病，如肺結(jié)核、哮喘等；②合并支氣管發(fā)育不良；③合并先天性心臟病、心肌炎等心臟功能障礙；④服用免疫調(diào)節(jié)或糖皮質(zhì)激素類藥物；⑤合并凝血功能障礙、自身免疫系統(tǒng)疾病；⑥合并精神或意識障礙無法配合治療檢查；⑦合并惡性腫瘤或肝腎功能障礙；⑧臨床資料不完整。

1.3 治療及分組方法

參考《兒童肺炎支原體肺炎診治專家共識（2015年版）》[9]給予標準治療方案，治療1 個療程后評估預(yù)后，其中癥狀體征消失或改善，X 線片結(jié)果正?；蚍尾筷幱翱s?。?0%則定義為預(yù)后良好，否則為預(yù)后不良。

1.4 觀察指標

1.4.1 血清miR-126、miR-138 水平檢測 入院次日采集患者空腹靜脈血5 ml，室溫下置于EDTA 抗凝管中靜置，3 500 r/min 離心10 min（離心半徑為8 cm），取血清置于-80℃下保存?zhèn)溆?。采用qRT-PCR 測定血清總RNA 后反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，反應(yīng)總體系為20 μl（正反向引物各1.0 μl，cDNA 0.8 μl，RNaseH2O 10.2 μl，SYBR Premix Ex TaqTM7 μl）。反應(yīng)條件為95℃75 s，95℃45 s，60℃30 s，70℃15 s，共40 個循環(huán)，每個樣品3 個復(fù)孔，以U6 為內(nèi)參，采用2-△△ct法分析血清miR-126、miR-138 水平。引物由上海吉瑪公司設(shè)計合成，見表1。

表1 引物序列

1.4.2 一般資料及臨床資料 入院次日統(tǒng)計患者信息，包括性別、年齡、發(fā)熱時間、病情嚴重程度、血常規(guī)指標[白細胞計數(shù)（white blood cell count，WBC）、血小板計數(shù)（platelet count，PLT）、紅細胞沉降率（erythrocyte se di-mentation rate，ESR）]、炎癥因子指標[白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、C 反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，比較采用t 檢驗；計數(shù)資料用例數(shù)或百分率表示，比較采用χ2檢驗；MPP患兒預(yù)后的影響因素采用分析logistic 回歸分析；繪制受試者操作特征（receiver operating characteristic curve，ROC）曲線分析miR-126 聯(lián)合miR-138 對預(yù)后的預(yù)測價值。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MPP 患兒預(yù)后不良的單因素分析

114 例MPP 患兒治療1 個療程后預(yù)后不良19例。預(yù)后不良組重癥者占比及WBC、PLT、IL-6、TNF-α、CRP、miR-126、miR-138 水平高于預(yù)后良好組（P＜0.05）；兩組性別、年齡、發(fā)熱時間、ESR 比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 MPP 患兒預(yù)后不良的單因素分析

2.2 MPP 患兒預(yù)后不良的多因素分析

以病情嚴重程度（輕癥=0，重癥=1）、WBC（原值帶入）、PLT（原值帶入）、IL-6（原值帶入）、TNF-α（原值帶入）、CRP（原值帶入）、miR-126（原值帶入）、miR-138為自變量（原值帶入），以預(yù)后為因變量賦值（預(yù)后良好=0，預(yù)后不良=1）進行l(wèi)ogistic 回歸分析。結(jié)果顯示，病情嚴重程度及WBC、TNF-α、CRP、miR-126、miR-138水平為MPP 患兒預(yù)后不良的影響因素（OR＞1，P＜0.05）。見表3。

表3 MPP 患兒預(yù)后不良的多因素分析

2.3 miR-126 聯(lián)合miR-138 水平對MPP 患兒預(yù)后的預(yù)測價值

miR-126 聯(lián)合miR-138 水平預(yù)測MPP 患兒預(yù)后的曲線下面積高于各指標單獨檢測。見圖1、表4。

圖1 miR-126 聯(lián)合miR-138 檢測對MPP 患兒預(yù)后預(yù)測的ROC 曲線

表4 miR-126 聯(lián)合miR-138 檢測對MPP 患兒預(yù)后的預(yù)測價值

3 討論

MPP 是兒科常見疾病之一，臨床主要表現(xiàn)為咳嗽、胸悶等，且可能表現(xiàn)出不同程度驚厥和發(fā)熱，嚴重影響患兒身心健康及生長發(fā)育，預(yù)后不佳[11-15]。臨床通過篩選預(yù)測因子對預(yù)后進行評估有助于治療方案的調(diào)整及結(jié)局的改變。

miRNA 抑制mRNA 翻譯轉(zhuǎn)錄或降解可以影響蛋白合成，參與免疫應(yīng)答、調(diào)控造血、炎癥反應(yīng)[16-17]。有研究證實，miRNA 在多種呼吸系統(tǒng)疾病中有廣泛應(yīng)用，如miRNA 在感染性肺炎、慢性阻塞性肺疾病、創(chuàng)傷性肺炎等疾病的發(fā)生發(fā)展、診斷治療、預(yù)后評估中發(fā)揮著不同作用，且在特定炎癥信號傳導(dǎo)通路研究中存在不可或缺的作用[18]。miR-126、miR-138 水平作為常見miRNA，也具有調(diào)節(jié)激活轉(zhuǎn)錄因子和炎癥因子的作用，但目前二者聯(lián)合評估MPP 患兒預(yù)后的研究較少?；诖?，本研究對MPP 患兒血清miR-126、miR-138水平進行檢測分析。結(jié)果顯示，預(yù)后不良組miR-126、miR-138 水平高于預(yù)后良好組，miR-126、miR-138 水平為MPP 患兒預(yù)后不良的影響因素。miR-126 是由內(nèi)皮細胞生成，位于人類9 號染色體的表皮生長因子基因區(qū)域內(nèi)，可抑制阻礙代償性新生血管生成，如血管內(nèi)皮生長因子、血管細胞黏附因子-1 等，從而減少血管炎癥反應(yīng)，有助于肺部炎癥疾病的恢復(fù)[19-21]。miR-138 為競爭性結(jié)合炎癥因子的miRNA，促進巨噬細胞及肺上皮細胞中炎癥因子的分泌與釋放，增強MP 感染所致的肺部炎癥反應(yīng)，促進肺炎疾病的發(fā)展[22-24]；且miR-138 還會通過激活NF-κB 通路促進炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激，進一步加重MPP[25-26]。但是細胞生物學(xué)具有易變性、多態(tài)性、復(fù)雜性的特點，因此單一miRNA 標志物應(yīng)用于MPP 患兒預(yù)后的預(yù)測中存在一定局限性。因此，本研究采用miR-126、miR-138 聯(lián)合檢測預(yù)測MPP 患兒預(yù)后，結(jié)果顯示，miR-126 聯(lián)合miR-138 水平預(yù)測MPP 患者預(yù)后的曲線下面積高于各指標單獨檢測。因此，臨床治療MPP 患兒，可監(jiān)測miR-126、miR-138 水平，并及時根據(jù)病情變化對治療方案進行調(diào)整，對于預(yù)后的改善具有重要臨床意義[27-28]。

綜上所述，血清miR-126 聯(lián)合miR-138 水平對MPP 患兒預(yù)后的預(yù)測價值較高，有望成為MPP 診斷治療和預(yù)后評估的新型生物標志物。但由于目前所能查詢到的相關(guān)文獻有限，未能與前人研究進行比較，因此仍需進一步開展前瞻性、多中心研究加以證實。