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        蒜芥茄PR-10基因的克隆與表達(dá)分析

        2023-09-20 11:23:02程捷張涵雪蔚亞楠尹夢(mèng)瑩董相書吳麗艷杜光輝
        熱帶作物學(xué)報(bào) 2023年8期
        關(guān)鍵詞:表達(dá)分析基因克隆

        程捷 張涵雪 蔚亞楠 尹夢(mèng)瑩 董相書 吳麗艷 杜光輝

        關(guān)鍵詞:蒜芥茄;PR10蛋白;基因克?。槐磉_(dá)分析

        病程相關(guān)蛋白(pathogenesisrelatedproteins,PRs)是植物受生物或非生物脅迫后誘導(dǎo)產(chǎn)生并積累的一類蛋白質(zhì)總稱。PR蛋白主要分為17個(gè)亞類[1],廣泛存在于單子葉和雙子葉植物中。部分PR蛋白(PR2、PR3、PR4、PR8)具有幾丁質(zhì)酶或葡聚糖酶的活性,對(duì)于真菌有一定抑制性[2]。而PR10具有核糖核酸酶活性,可以裂解入侵病毒的RNA,在植物抗病毒途徑中發(fā)揮著重要作用[3]。除此之外,PR10對(duì)植物的生長(zhǎng)、發(fā)育和衰老也有一定作用[4]。PR10基因受多種激素誘導(dǎo)表達(dá),如JA、SA、ABA、GA3,也受部分病原體或冷害、干旱等非生物脅迫的誘導(dǎo)表達(dá),一些外源物質(zhì)H2O2、CuCl2也可以誘導(dǎo)PR10基因的表達(dá)[5];PR10在植物不同組織器官中的表達(dá)量也不同,如,PR10基因在大豆的根、莖及葉中均有表達(dá),其中葉部表達(dá)最高[6]。多個(gè)研究表明,PR10蛋白是分子量為16~19kDa,等電點(diǎn)偏酸性的小分子量蛋白;該蛋白作為一種胞內(nèi)蛋白,一般定位在細(xì)胞質(zhì)中[7-9]。PR10蛋白可分為特異性細(xì)胞因子結(jié)合蛋白和乳膠蛋白兩大類[10]。雖然,PR10蛋白參與植物抗病相關(guān)途徑的調(diào)控,但PR10受各種因素誘導(dǎo)表達(dá)的機(jī)制尚不明確;PR10蛋白具有核酸酶活性和體外抑菌的特性,但其如何抵御病菌的侵害也有待揭示。

        黃萎病是影響茄子產(chǎn)量、由輪枝菌(Verticilliumspp.)引起的一種土傳病害,發(fā)病快、危害面積廣。有研究表明,PR10蛋白具有高效的抗真菌作用[11],對(duì)輪枝菌也表現(xiàn)出一定的抗性。例如,棉花的GaPR10基因在受到大麗輪枝菌(Verticilliumdahliae)侵染時(shí),表達(dá)水平顯著增高,該基因可能參與了相應(yīng)的防御反應(yīng)[12-13];ZANDVAKILI等[14]發(fā)現(xiàn)玉米PR10蛋白有良好的體外抗真菌活性,在接種了黃萎病病菌、菌核病菌等4種真菌后,PR10蛋白均可不同程度地抑制其孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)。并且,PR10基因?qū)煵莼ㄈ~病毒(TMV)也表現(xiàn)出很高的抗性,辣椒CaPR10[3]、刺茄SsPR10[4]與煙草NtPR10[15]基因在TMV侵染過程中表達(dá)水平顯著上調(diào),有很好的抗TMV的作用。除此之外,PR10蛋白對(duì)疫霉菌[3]、稻瘟病菌[4]、青霉菌[16]等多種病菌都表現(xiàn)出一定的抑制作用,在植物抗病方面發(fā)揮重大作用。

        蒜芥茄(SolanumsisymbriifoliumLam.),為茄科、茄屬植物,一年生草本,屬于野生茄的一種。蒜芥茄由于長(zhǎng)期在野外生存,具有良好的抗逆性,研究表明,蒜芥茄是黃萎病的高抗材料[17]。本研究在前期建立的蒜芥茄轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫[18]的基礎(chǔ)上,通過RT-PCR技術(shù),從蒜芥茄中克隆獲得病程相關(guān)蛋白PR-10基因,即SsPR-10。并對(duì)該基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析及預(yù)測(cè),利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)SsPR-10基因在蒜芥茄不同器官的表達(dá)特性以及接種黃萎病病菌后表達(dá)水平的變化,對(duì)蒜芥茄SsPR-10基因應(yīng)對(duì)生物脅迫的表達(dá)機(jī)制提供一定的理論基礎(chǔ),有助于進(jìn)一步開發(fā)利用蒜芥茄優(yōu)良的抗病性狀。

        1材料與方法

        1.1材料

        供試材料野生蒜芥茄由云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝作物研究所提供。將蒜芥茄種子用500mg/L的赤霉素(GA3)溶液催芽24h,待種子露白轉(zhuǎn)移到育苗基質(zhì),取成熟期的根、莖、葉進(jìn)行混樣,作為基因克隆和表達(dá)分析材料;待第一片真葉完全展開時(shí)用大麗輪枝菌菌株QZ-S(V.dahliaeKleb.)接種,接菌后0、24、48、72h取葉片進(jìn)行RNA提取,用于目的基因表達(dá)分析。

        1.2方法

        1.2.1SsPR-10基因克隆采用PlantRNAKit試劑盒(Omega,美國(guó))提取蒜芥茄不同器官(根、莖、葉)的RNA,并用分光光度計(jì)檢測(cè)RNA的純度。再采用5×all-In-OneRTMasterMix(withAccuRTGenomicDNARemovalKit)試劑盒(ABM,加拿大)將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。利用PrimerPremier5.0軟件設(shè)計(jì)引物(F:AAAGGCAAATACTAATCAAAC;R:AGAAAACACACAACAAAAAAC),以cDNA為模板,進(jìn)行目的基因ORF的擴(kuò)增,引物合成委托昆明擎科生物科技有限公司進(jìn)行。PCR擴(kuò)增體系(25μL)為:cDNA1μL,10μmol/L的正反引物各1μL,ddH2O12μL,EsTaqMasterMix(Dye)10μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5min,94℃變性30s,54℃退火30s,72℃延伸2min,35個(gè)循環(huán)后72℃延伸10min,4℃保存。取5μL的PCR產(chǎn)物在1.0%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè),將目的基因條帶進(jìn)行回收后送昆明擎科生物科技有限公司進(jìn)行測(cè)序,將測(cè)序結(jié)果應(yīng)用DNAMAN軟件進(jìn)行序列比對(duì)。通過NCBI在線網(wǎng)站的ORFFinder程序(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/)對(duì)SsPR-10進(jìn)行開放閱讀框預(yù)測(cè)。

        1.2.2生物信息分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建利用ExPasy在線ProtParam軟件(http://www.expasy.org/tools/protparam.html)對(duì)SsPR-10蛋白氨基酸的理化性質(zhì)、親水性、穩(wěn)定性等進(jìn)行預(yù)測(cè);使用ProtScale(https://web.expasy.org/cgi-bin/protscale/protscale.pl)對(duì)親水性進(jìn)行進(jìn)一步分析。分別用SOPMA(https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=npsa_sopma.html)、SWISS-MODEL(https://swissmodel.expasy.org/)在線網(wǎng)站分析SsPR-10蛋白的二、三級(jí)結(jié)構(gòu),再用Cell-PLoc2.0在線網(wǎng)站(http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/)預(yù)測(cè)SsPR-10的亞細(xì)胞定位。使用推定的ORF序列在網(wǎng)站NetPhos(http://www.cbs.dtu.dk/services/NetPhos/)中預(yù)測(cè)SsPR-10蛋白的磷酸化位點(diǎn)。在TMHMM2.0在線軟件(http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM-2.0/)上預(yù)測(cè)Ss-PR-10蛋白的跨膜區(qū);利用InterProScan在線網(wǎng)站(http://www.ebi.ac.uk/cgi-bin/iprscan/)對(duì)SsPR-10蛋白進(jìn)行保守結(jié)構(gòu)域分析預(yù)測(cè)。利用NCBI數(shù)據(jù)庫Blast工具(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)對(duì)SsPR-10蛋白的氨基酸序列進(jìn)行同源序列比對(duì),并選取相似度高的蛋白序列應(yīng)用DNAMAN軟件進(jìn)行序列比對(duì)分析,再使用MEGA軟件利用鄰接法(neighbor-joining,NJ),構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

        1.2.3基因表達(dá)分析應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)技術(shù)對(duì)SsPR-10基因在蒜芥茄不同器官中的表達(dá)進(jìn)行分析。引物設(shè)計(jì)通過PrimerPremier5.0軟件進(jìn)行,以CYP為內(nèi)參基因(表1)。對(duì)蒜芥茄接種大麗輪枝菌,并在一定時(shí)間內(nèi)(0、24、48h)測(cè)定SsPR-10基因的表達(dá),以無菌水處理為對(duì)照,具體接種方法參照吳麗艷等[19]進(jìn)行。試劑盒選用MonAmpTMSYBR?GreebqPCRMix(LowRox)(莫納生物科技有限公司),具體操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行試驗(yàn),每個(gè)樣品設(shè)置3次重復(fù)。PCR反應(yīng)體系如下:MonAmpTMSYBR?GreebqPCRMix10μL,cDNA溶液1μL,正向引物及反向引物各0.8μL,ddH2O7.4μL,共20μL。PCR擴(kuò)增程序:95℃預(yù)變性2min,繼續(xù)95℃變性10s,55℃退火15s,72℃延伸15s,35個(gè)循環(huán),72℃終延伸5min。

        2結(jié)果與分析

        2.1SsPR-10基因的克隆與ORF序列分析

        以蒜芥茄為材料,提取RNA(圖1A),反轉(zhuǎn)錄后獲得cDNA。以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到與預(yù)期長(zhǎng)度符合的PR10基因(圖1B)。測(cè)序后,獲得基因序列,全長(zhǎng)645bp,命名為SsPR-10。將克隆得到的SsPR-10基因與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的cDNA序列進(jìn)行比對(duì),相似度為99.85%,其中只有1個(gè)堿基變異(圖2)。以測(cè)序結(jié)果為準(zhǔn),利用NCBI的ORFFinder基因開放閱讀框分析工具進(jìn)行預(yù)測(cè),結(jié)果顯示開放閱讀框?yàn)?80bp,共編碼159個(gè)氨基酸(圖3)。

        2.2SsPR-10基因的生物信息學(xué)分析

        2.2.1SsPR-10蛋白理化特性預(yù)測(cè)利用在線網(wǎng)站ProtParam對(duì)SsPR-10進(jìn)行分析,結(jié)果表明SsPR-10編碼的蛋白分子式為C794H1247N207O245S3,總分子量17.71kDa,共編碼159個(gè)氨基酸,其中帶正電荷殘基數(shù)(Arg+Lys)17個(gè),帶負(fù)電荷殘基數(shù)(Asp+Glu)25個(gè),理論等電點(diǎn)為5.54,推測(cè)該蛋白為酸性蛋白;不穩(wěn)定系數(shù)(II)為34.34,小于40;該蛋白的親水性平均值(GRAVY)為–0.325,為親水性蛋白。在ProtScale程序中,對(duì)該蛋白的親疏水性進(jìn)一步分析(圖4),第23位亮氨酸的疏水性最高為1.733,第122位蘇氨酸親水性最高為–2.267。總體來看,疏水區(qū)主要集中在前部,親水區(qū)集中在中部、后部,預(yù)測(cè)該蛋白為親水性蛋白。

        2.2.2SsPR-10蛋白二、三級(jí)結(jié)構(gòu)和亞細(xì)胞定位分析利用在線軟件SOPMA進(jìn)行SsPR-10蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)(圖5A),結(jié)果顯示SsPR-10蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)主要由4種結(jié)構(gòu)構(gòu)成,分別為43.40%的α-螺旋、23.27%的β-折疊、8.81%的β-轉(zhuǎn)角、24.53%的無規(guī)卷曲。在線網(wǎng)站SWISS-MODEL對(duì)SsPR-10的三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)(圖5B),結(jié)果顯示SsPR-10的三級(jí)結(jié)構(gòu)與草莓過敏原Fraa1-2的相似度達(dá)到53.16%,以6stb.1.A作為模板構(gòu)建。通過Cell-PLoc2.0在線網(wǎng)站對(duì)SsPR-10進(jìn)行亞細(xì)胞定位,結(jié)果顯示SsPR-10定位在細(xì)胞質(zhì)中。

        2.2.3SsPR-10蛋白磷酸化位點(diǎn)及信號(hào)肽分析通過在線網(wǎng)站NetPhos對(duì)SsPR-10蛋白進(jìn)行磷酸化位點(diǎn)的預(yù)測(cè)(磷酸化位點(diǎn)閾值為0.5),共預(yù)測(cè)了12個(gè)磷酸化位點(diǎn)(圖3),第10、52、84、107位的絲氨酸;第12、99、117、122位的蘇氨酸;第83、100、120位的絡(luò)氨酸。信號(hào)肽預(yù)測(cè)結(jié)果顯示該蛋白無信號(hào)肽。

        2.2.4SsPR-10蛋白跨膜區(qū)和結(jié)構(gòu)域分析利用TMHMM2.0在線軟件對(duì)SsPR-10蛋白跨膜區(qū)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)該蛋白無跨膜區(qū)(圖6A)。通過InterProScan在線網(wǎng)站對(duì)SsPR-10蛋白進(jìn)行保守結(jié)構(gòu)域分析預(yù)測(cè)(圖6B),發(fā)現(xiàn)其含有1個(gè)BetvⅠ過敏原結(jié)構(gòu)域(IPR024949),其中88~120位存在局部保守序列(圖3);1個(gè)START脂質(zhì)結(jié)合結(jié)構(gòu)域(IPR023393);1個(gè)BetvI/MLP乳膠蛋白結(jié)構(gòu)域(IPR000916)。

        2.2.5SsPR-10蛋白同源序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化分析利用NCBI在線網(wǎng)址中BLAST的功能檢索與蒜芥茄SsPR-10蛋白序列相近的其他植物,發(fā)現(xiàn)SsPR-10與黃果茄(Solanumvirginianum)、馬鈴薯(Solanumtuberosum)、番茄(Solanumlycopersicum)、辣椒(Capsicumannuum)、煙草(Nicotianabenthamiana)等的識(shí)別度較高。再通過DNAMAN軟件將SsPR-10蛋白序列和這幾種植物PR10蛋白序列進(jìn)行序列比對(duì)分析(圖7),發(fā)現(xiàn)它們?cè)谖恢?7~52有一個(gè)保守序列,富含甘氨酸的環(huán)狀結(jié)構(gòu)“P-LOOP”環(huán)。

        選擇上述與蒜芥茄SsPR-10蛋白序列相似度較高的植物蛋白序列和SsPR-10序列進(jìn)行比對(duì)(圖7),運(yùn)用MEGA軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(圖8),結(jié)果顯示,蒜芥茄SsPR-10蛋白與黃果茄的PR10蛋白親緣關(guān)系最近,其次與馬鈴薯的STH-2蛋白較近。

        2.3SsPR-10基因的表達(dá)分析

        利用RT-qPCR技術(shù)對(duì)SsPR-10基因在蒜芥茄根、莖、葉中表達(dá)情況進(jìn)行分析(圖9),結(jié)果顯示,SsPR-10在根部表達(dá)最高,其次是葉,在莖部表達(dá)較低。

        用黃萎病病菌接種蒜芥茄,對(duì)接種后0、24、48、72h的SsPR-10基因的表達(dá)情況進(jìn)行分析(圖10),發(fā)現(xiàn)接種后SsPR-10總體表達(dá)情況呈先上升后下降的趨勢(shì)。當(dāng)接菌24h后,SsPR-10表達(dá)水平增加了3倍左右,且達(dá)到最高水平;48h后,其表達(dá)水平明顯下降且低于對(duì)照;72h后,對(duì)照組與接種病菌組中基因表達(dá)水平相差不大。

        3討論

        PR10蛋白是植物病程相關(guān)蛋白家族中的第10類蛋白,因其具有一定核酸酶活性,在植物生長(zhǎng)發(fā)育、抵御病原菌和非生物脅迫方面都有作用,并且在多種植物,如蘋果[20]、大豆[6]、棉花[12]、百合[21]等中都有發(fā)現(xiàn),而受廣大研究者的關(guān)注。多個(gè)研究表明,PR10基因編碼的氨基酸中都具有一個(gè)高度保守的GXGGXG(X是任意氨基酸)序列模型,被稱為“P-LOOP”環(huán)[5,22],這一保守結(jié)構(gòu)可能與PR10蛋白的磷酸化有關(guān)。PARK等[3]研究發(fā)現(xiàn),辣椒CaPR10蛋白磷酸化的活性比未磷酸化的活性高約12倍,并預(yù)測(cè)了其絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸磷酸化位點(diǎn);同樣,OZYIGIT等[22]預(yù)測(cè)了大豆、水稻、番茄等6種植物的PR10蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)和它們的配體結(jié)合位點(diǎn),這些結(jié)合位點(diǎn)上的殘基有著更高程度的變異,可能形成具有不同功能、新的催化位點(diǎn)。

        蒜芥茄作為重要的野生茄資源,其部分抗病性狀比栽培茄更有優(yōu)勢(shì),但對(duì)其有利基因的挖掘還不深入。目前,關(guān)于蒜芥茄抗黃萎病相關(guān)基因Ve基因與泛素結(jié)合酶(E2s)UBC基因的分子機(jī)制已經(jīng)得到初步分析[17,23],而對(duì)于蒜芥茄PR-10基因的研究還未被報(bào)道。本研究通過RT-PCR技術(shù)獲得蒜芥茄PR-10基因的序列,并對(duì)其進(jìn)行相關(guān)生物信息學(xué)分析和表達(dá)分析。對(duì)預(yù)測(cè)的蛋白序列進(jìn)行理化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SsPR-10蛋白大小為17.71kDa,等電點(diǎn)為5.54,屬于親水性蛋白,而LIU等[4]研究刺茄SsPR10蛋白,發(fā)現(xiàn)其大小為17.58kDa,等電點(diǎn)為5.29,共編碼160個(gè)氨基酸。ZHOU等[12]從棉花中分離的GaPR-10基因所編碼的PR10蛋白分子量為17.3kDa,等電點(diǎn)為4.95,編碼159個(gè)氨基酸;張弛等[9]研究了楊樹PR10基因編碼的蛋白,發(fā)現(xiàn)其分子量為17.6kDa,等電點(diǎn)為5.20,編碼158個(gè)氨基酸,也為親水性蛋白。以上研究結(jié)果與本研究相近,可證明PR10蛋白為小分子量(不超過20kDa)酸性親水性蛋白。本研究預(yù)測(cè)了SsPR-10蛋白在細(xì)胞中的定位,結(jié)果顯示在細(xì)胞質(zhì)中,對(duì)SsPR-10進(jìn)行跨膜區(qū)分析,發(fā)現(xiàn)SsPR-10無跨膜區(qū);信號(hào)肽分析也表明SsPR-10無信號(hào)肽。張玉等[15]研究了煙草NtPR10蛋白的定位,發(fā)現(xiàn)其定位在細(xì)胞質(zhì),并對(duì)NtPR10蛋白進(jìn)行了信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)該蛋白無信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)域;NAOKI等[24]在研究水稻PR蛋白時(shí),也發(fā)現(xiàn)其定位在細(xì)胞質(zhì),這些研究結(jié)果與本研究預(yù)測(cè)蒜芥茄PR10蛋白的定位一致,而OZYIGIT等[22]對(duì)于海島棉、王百合和藏紅花的亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示PR10蛋白在葉綠體和細(xì)胞質(zhì)中。這些結(jié)果表明PR10蛋白是不含信號(hào)肽的胞內(nèi)蛋白。

        本研究對(duì)SsPR-10以及其近緣物種進(jìn)行序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)存在保守序列GXGXG(47~51位,X為任意氨基酸),稱為“P-LOOP”結(jié)構(gòu),且存在結(jié)構(gòu)域Bet-v1?!癙-LOOP”是一個(gè)有關(guān)磷酸結(jié)合激酶以及核苷酸結(jié)合蛋白的結(jié)構(gòu)域,是PR10蛋白家族的特征結(jié)構(gòu)。而BetvⅠ相關(guān)蛋白家族由許多結(jié)構(gòu)相關(guān)的植物過敏原組成;該結(jié)構(gòu)中存在若干疏水配體結(jié)合位點(diǎn),這些位點(diǎn)可以形成一個(gè)大的“Y”型疏水配體結(jié)合口袋,可以結(jié)合油菜素內(nèi)酯(brassinolide,BR)等并起到轉(zhuǎn)移極性配體的作用,可能參與到植物的病理防御作用[21]。前人研究表明,刺茄的SsPR10蛋白[4]以及辣椒的CaPR10蛋白[3]均含有保守序列GXGGXG(47~52位),與本研究結(jié)果相比較這2種蛋白在第50位多了一個(gè)甘氨酸;而馬鈴薯的PR10蛋白在第45~47位含有保守序列GXG[4],這與本研究結(jié)果也有一定差異。推測(cè)不同的P-LOOP模式和甘氨酸殘基的位置變化可能是PR10基因進(jìn)化過程中替換、缺失和插入的結(jié)果。

        有研究表明,在植物的根、側(cè)根和根尖等易受機(jī)械干擾和病原菌侵襲的部位,PR10表達(dá)量會(huì)顯著增加[22,25]。本研究發(fā)現(xiàn)SsPR-10基因在根部的表達(dá)明顯高于在莖、葉的表達(dá)量,存在明顯的組織特異性。在接種大麗輪枝菌24h后,蒜芥茄PR-10基因的表達(dá)量最高,相當(dāng)于對(duì)照組的4~5倍;而24~48h,PR-10的表達(dá)量下降較多,SsPR-10表達(dá)水平由上調(diào)變?yōu)橄抡{(diào);72h后,該基因表達(dá)量與對(duì)照組相差不大。亞洲棉GaPR10基因[12]在根部有低水平的轉(zhuǎn)錄,而在葉片、花、莖中都不表達(dá),也屬于組成型表達(dá);楊樹PR10基因[9]與刺茄的PR10基因[4]在根系的表達(dá)量也高于葉片和莖。但是,大豆PR10基因在葉部的表達(dá)量高于莖部和根部[6]。辣椒和刺茄在接種TMV后,其PR10基因表達(dá)量均大幅增加[3-4];同樣,亞洲棉用大麗輪枝菌處理后,PR10基因在12h內(nèi)達(dá)到最高水平的表達(dá),并在24h內(nèi)保持高水平的表達(dá)[12],這與本研究SsPR-10響應(yīng)大麗輪枝菌接種的反應(yīng)相近。雖然SsPR-10在根、莖、葉等部位可以表達(dá),但比接種病菌后其表達(dá)是明顯較低的,這表明SsPR-10受到病菌誘導(dǎo)時(shí),表達(dá)水平會(huì)顯著上升。

        4結(jié)論

        本研究從蒜芥茄中克隆得到了病程相關(guān)蛋白SsPR-10基因,該基因編碼區(qū)全長(zhǎng)480bp,共編碼159個(gè)氨基酸。SsPR-10蛋白無跨膜區(qū)和信號(hào)肽,屬于胞內(nèi)蛋白,與黃果茄PR10蛋白親緣關(guān)系最近。蒜芥茄SsPR-10基因的表達(dá)具有組織特異性,并受大麗輪枝菌的誘導(dǎo)而高表達(dá),說明SsPR-10基因可能參與蒜芥茄抗黃萎病的應(yīng)答過程。

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