石永林

摘要：目的 探討不同免疫檢驗法對乙肝病毒感染血清標(biāo)志物檢測的效果。方法 選取我院2021年5月～2023年3月接收的40例疑似乙肝病毒感染患者為研究對象，均實施ECL檢測（電化學(xué)發(fā)光法檢測）及ELISA檢測（酶聯(lián)免疫吸附試驗），將實時熒光定量多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)。比較乙肝病毒感染血清標(biāo)志物檢測結(jié)果陽性率、HBV-DNA水平和檢測成本。結(jié)果 開展不同免疫檢驗法后，ECL檢測對于檢出乙肝病毒感染血清標(biāo)志物陽性率有明顯提升（P＜0.05）；同時，HBV-DNA水平及檢測成本也有較大差異（P＜0.05）。結(jié)論 對比ELISA檢測方法，ECL檢測檢出乙肝病毒感染血清標(biāo)志物陽性率更高，臨床應(yīng)用價值顯著。

關(guān)鍵詞：電化學(xué)發(fā)光法檢測；酶聯(lián)免疫吸附試驗；乙肝病毒感染；血清標(biāo)志物

乙肝是由乙型肝炎病毒引起的一種傳染性疾病。乙肝病毒主要通過血液和體液傳播，包括性傳播、血液傳播（如共用注射器、輸血和器官移植）、母嬰傳播（妊娠期間、分娩或母乳喂養(yǎng)）以及通過其他感染者的打孔皮膚、黏膜接觸傳播。乙肝病毒是DNA病毒，包裹在核心顆粒和表面抗原上。病毒的表面抗原（HBsAg）是診斷乙肝感染的關(guān)鍵標(biāo)志物。在癥狀和并發(fā)癥方面，乙肝感染者可能在起初階段沒有明顯的癥狀，也可能表現(xiàn)為疲勞、食欲不振、惡心、嘔吐、腹痛等，而長期慢性感染可能導(dǎo)致肝硬化、肝癌等嚴(yán)重并發(fā)癥。乙肝是一種需要高度關(guān)注和管理的重要傳染病，可以通過預(yù)防措施和適當(dāng)?shù)尼t(yī)療干預(yù)減少感染的風(fēng)險，防止病情惡化。本文旨在探討不同免疫檢驗法檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的效果。

1研究對象和方法

1.1 研究對象

選取我院2021年5月～2023年3月接收的40例疑似乙肝病毒感染患者為研究對象，男26例，女14例，年齡22～64歲，平均（43.12±0.33）歲。

1.2 研究方法

1.2.1 ECL檢測

（1）準(zhǔn)備樣本：獲取合適類型的乙肝病毒樣本，如血液、血清或血漿。確保樣本收集過程遵循相關(guān)的安全和無菌操作規(guī)范。（2）樣本處理：根據(jù)需要，進(jìn)行必要的預(yù)處理步驟，如離心和去除雜質(zhì)，獲得純凈的樣本。（3）準(zhǔn)備試劑與設(shè)備：準(zhǔn)備電化學(xué)發(fā)光法檢測所需的試劑盒和儀器設(shè)備。按照操作手冊中的說明，正確配制試劑，并將其預(yù)熱至適當(dāng)溫度。（4）標(biāo)準(zhǔn)品與質(zhì)控品：根據(jù)要求，配制并標(biāo)記乙肝病毒檢測的標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品。（5）操作步驟：按照所用試劑盒和儀器的操作指南，進(jìn)行相應(yīng)的實驗步驟，包括樣品加入、試劑加入、孵育時間和溫度等。（6）電化學(xué)發(fā)光測定：將處理好的樣本和試劑加載至電化學(xué)發(fā)光儀器中。根據(jù)儀器操作指南設(shè)置適當(dāng)?shù)膮?shù)，執(zhí)行電化學(xué)發(fā)光測定，并記錄結(jié)果。（7）數(shù)據(jù)分析與解讀：根據(jù)儀器自動生成的測定數(shù)據(jù)，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和結(jié)果解讀。檢測結(jié)果可以定性或定量方式表示，根據(jù)需要確定閾值和判斷標(biāo)準(zhǔn)。（8）結(jié)果報告：根據(jù)實驗室或醫(yī)療機構(gòu)的要求，將乙肝病毒的檢測結(jié)果記錄并報告給相關(guān)人員。在進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光法檢測乙肝病毒樣本之前，請確保儀器和試劑的正常工作狀態(tài)，并嚴(yán)格按照操作手冊中的指導(dǎo)進(jìn)行操作。此外，及時清理廢棄物。需要注意的是，具體的操作步驟和要求可能因試劑盒和儀器的不同而有所變化。因此，在進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光法檢測乙肝病毒樣本前，應(yīng)當(dāng)仔細(xì)閱讀和遵循相關(guān)試劑盒和儀器的操作手冊。

1.2.2 ELISA檢測

酶聯(lián)免疫吸附試驗是一種常用的生物醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)，用于測定體液中特定抗原或抗體的存在和濃度。

（1）樣品處理：收集待檢測的樣本，包括血清、尿液、唾液或其他體液，離心除去固體顆粒。（2）吸附：將待檢測的抗原或抗體溶液加入微孔板中，使其吸附在孔板表面上。通常使用多孔板，每個孔內(nèi)都有特定的吸附劑，用于捕獲待檢測物質(zhì)。（3）阻斷：為了防止非特異性吸附，需要將孔板中的空白孔款進(jìn)行阻斷處理。一般使用類似牛血清蛋白或牛血清的無關(guān)蛋白質(zhì)，添加到孔中，以減少非特異性結(jié)合。（4）反應(yīng)：將待檢測樣本加入包含抗原或抗體的孔中，使其與吸附的抗體或抗原發(fā)生特異性結(jié)合。經(jīng)過一定的反應(yīng)時間，待檢測物質(zhì)與孔中的抗原或抗體發(fā)生免疫反應(yīng)。（5）清洗：在反應(yīng)完成后，需要對孔板進(jìn)行清洗，以去除非特異性結(jié)合物質(zhì)。多次用緩沖液或洗滌溶液洗滌，以減少干擾。（6）酶標(biāo)記：加入酶標(biāo)記的二抗或單抗溶液，其可以識別目標(biāo)分子的另外一個表位，并與其發(fā)生特異性結(jié)合。這些二抗或單抗通常與酶（如辣根過氧化物酶）結(jié)合，使得使用底物后能夠產(chǎn)生可量化的酶反應(yīng)產(chǎn)物。（7）底物反應(yīng)：加入底物溶液，被酶催化反應(yīng)后產(chǎn)生可觀察和測定的信號。常見的底物包括TMB或ABTS。（8）反應(yīng)停止：加入停止溶液，終止酶反應(yīng)，使其產(chǎn)生的顏色發(fā)生變化或停止。（9）讀取結(jié)果：使用酶標(biāo)儀讀取吸光度（OD）值，通過比較樣品與標(biāo)準(zhǔn)曲線的關(guān)系，可以確定待檢測分子的濃度或陽性與陰性結(jié)果。需要注意的是，細(xì)節(jié)和具體的實驗步驟可能會因不同的ELISA類型、廠家或試劑組合而有所不同。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察不同檢測方法乙肝病毒感染血清標(biāo)志物檢測結(jié)果陽性率、HBV-DNA水平和檢測成本。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 28.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計量資料以（±s）表示，采用ｔ檢驗，計數(shù)資料用比率表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 乙肝病毒感染血清標(biāo)志物檢測陽性率比較

ECL檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物檢測結(jié)果陽性率高于ELISA檢測，P＜0.05。見表1。

2.2 HBV-DNA水平比較

ECL檢測HBV-DNA水平高于ELISA檢測，P＜0.05。見表2。

2.3 檢測成本比較

ECL檢測檢測成本高于ELISA檢測，P＜0.05。見表3。

3討論

乙肝極易出現(xiàn)肝硬化等諸多問題，未得到及時治療可能會發(fā)展為肝癌，嚴(yán)重威脅患者身體健康，降低生活品質(zhì)[1]。因此，面對乙肝病毒感染人員應(yīng)秉持早診斷、早治療的原則，采取適宜的干預(yù)方法，優(yōu)化治療效果。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）廣泛應(yīng)用于乙肝病毒感染血清標(biāo)志物檢測。ELISA對乙肝病毒感染血清中的抗原或抗體具有高度敏感性，可以檢測到低濃度的乙肝病毒標(biāo)志物[2]。ELISA使用特異性的抗體與乙肝病毒感染血清中的抗原或抗體結(jié)合，因此具有較高的特異性，可以準(zhǔn)確區(qū)分乙肝病毒感染和其他相關(guān)疾病。ELISA可以同時檢測多個不同的乙肝病毒標(biāo)志物，包括乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）、乙肝病毒核心抗體（HBcAb）等，從而提供更全面的信息[3]。通過對比待測樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線上的標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)程度，可以得出乙肝病毒標(biāo)志物在血清中的濃度，為疾病的診斷和監(jiān)測提供定量結(jié)果[4]。但ELISA通常需要一定的實驗時間，包括樣本處理、孔板吸附、反應(yīng)、洗滌和染色等步驟。因此，無法實現(xiàn)實時或快速的結(jié)果檢測。ELISA通常是批量進(jìn)行的，需要同時處理多個樣本，這可能會增加實驗的復(fù)雜性和手工操作的風(fēng)險[5]。ELISA主要用于檢測乙肝病毒感染血清中的抗體或抗原，可能無法直接檢測其他類型的乙肝病毒相關(guān)標(biāo)志物，如核酸。ELISA需要具備特定的實驗室設(shè)施、試劑和設(shè)備，操作要求較為嚴(yán)格。對初學(xué)者或非專業(yè)人員而言，可能需要一定的培訓(xùn)才能正確進(jìn)行實驗[6]?？傊珽LISA在乙肝病毒感染血清標(biāo)志物檢測方面具有高度敏感性、特異性強和多參數(shù)檢測的優(yōu)點，然而也存在不能即時檢測、批量化操作和特定實驗條件要求等缺點。

電化學(xué)發(fā)光法是一種常用于檢測乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的方法。與傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）相比，電化學(xué)發(fā)光法可以檢測非常低濃度的乙肝病毒指標(biāo)，具有優(yōu)異的靈敏度，可提供高準(zhǔn)確性的結(jié)果，并能夠檢測早期感染或低病毒載量的情況[7]。電化學(xué)發(fā)光法具有較寬的線性測量范圍，可以適應(yīng)不同樣本中乙肝病毒指標(biāo)的廣泛濃度，能在同一份樣本中同時檢測高濃度和低濃度的病毒抗原或抗體。電化學(xué)發(fā)光法具有快速的分析速度和高通量測試的能力，可以在較短時間內(nèi)處理大批樣本，適用于臨床診斷實驗室或大規(guī)模篩查項目。通過使用特異性的抗原-抗體反應(yīng)體系，電化學(xué)發(fā)光法可以準(zhǔn)確檢測乙肝病毒指標(biāo)，而不受其他物質(zhì)的干擾[8]，確保了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。電化學(xué)發(fā)光法可以與自動化的儀器平臺集成，使得操作更加簡便、快捷和標(biāo)準(zhǔn)化，有助于提高實驗室工作效率，減少人為誤差的風(fēng)險。電化學(xué)發(fā)光法可同時檢測多個乙肝病毒指標(biāo)，如乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝核心抗體（anti-HBc）等，對全面評估乙肝感染狀態(tài)和監(jiān)測治療效果有很高的應(yīng)用價值。

綜上所述，電化學(xué)發(fā)光法在乙肝病毒感染的檢測中具有高靈敏度、寬線性范圍、快速高通量、特異性、自動化和多指標(biāo)檢測等應(yīng)用優(yōu)勢。對比ELISA檢測方法，ECL檢測檢出乙肝病毒感染血清標(biāo)志物陽性率更高，臨床應(yīng)用價值顯著。

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