王新利

（輝縣市人民醫(yī)院輸血科，河南 新鄉(xiāng) 453600）

新生兒溶血病（HDN）主要是因母嬰血型不合，母體的ⅠgG 抗體可經(jīng)胎盤進(jìn)入到胎兒體內(nèi)，破壞胎兒紅細(xì)胞，誘發(fā)免疫性反應(yīng)而發(fā)生溶血，可致患兒出現(xiàn)多種異常情況，如貧血、高膽紅素血癥、溶血、黃疸等，嚴(yán)重時(shí)可引起流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)等[1]。ABO-HDN 是HDN 常見類型之一，其患兒血型多為B 型或A 型，母親血型為O 型，且患兒體內(nèi)存在母親抗體，無法根據(jù)常規(guī)方式實(shí)施同型輸血，防止溶血反應(yīng)加重[2]。故，輸血前新生兒血型進(jìn)行準(zhǔn)確檢驗(yàn)對(duì)保障輸血安全具有積極意義。臨床常用血清游離抗體試驗(yàn)、紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)、抗人球蛋白試驗(yàn)鑒別HDN，其中血清游離抗體試驗(yàn)檢測(cè)新生兒血清內(nèi)有無過度抗體未結(jié)合到紅細(xì)胞；抗人球蛋白試驗(yàn)可檢測(cè)新生兒紅細(xì)胞有無受外在抗體致敏的影響，兩者均是輔助診斷方式[3]。紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)是對(duì)HDN 最有價(jià)值的診斷方式，可檢測(cè)釋放液與酶處理后新生兒紅細(xì)胞上ABO 血型ⅠgG 抗體。但傳統(tǒng)方式是利用試管法實(shí)施檢測(cè)，需對(duì)患兒血液樣本中紅細(xì)胞反復(fù)清洗，操作步驟相對(duì)繁瑣，且檢查結(jié)果易受人為因素影響，降低診斷準(zhǔn)確性，且具有用時(shí)長(zhǎng)、重復(fù)性不好等缺陷，臨床應(yīng)用受到一定局限性[4]。

因此，本研究分析微柱凝膠技術(shù)MGT 與凝聚胺技術(shù)在ABO-HDN 輸血前檢驗(yàn)中應(yīng)用效果，為臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇48 例疑似ABO-HDN 患兒為研究對(duì)象，于2021 年3 月至2023 年2 月就診于本院。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過。45 例患兒日齡1～5d，平均（2.35±0.44）d；男25 例，女20 例；出生體質(zhì)量2.41～3.62kg，平均（3.10±0.21）kg。納入標(biāo)準(zhǔn)：主要癥狀為黃疸或黃疸進(jìn)行性加重；母體血型為O 型；間接膽紅素水平增高；血常規(guī)檢查顯示網(wǎng)織紅細(xì)胞增高、有核紅細(xì)胞增多、血紅蛋白降低；患兒家長(zhǎng)簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：家族心臟病史；先天性心臟病；畸形兒；臨床資料不完整者。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑與儀器

北京榮興光恒科技有限公司生產(chǎn)的奧林巴斯顯微鏡；長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)的血型血清學(xué)用離心機(jī)，金壇區(qū)西城新瑞儀器廠生產(chǎn)的金壇電子恒溫水浴箱；長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)的免疫微柱孵育器（FYQ 型）。Diagnostic Grifols S.A.提供的抗人球蛋白卡；上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)的ABO 血型反定型試劑盒；上海潤(rùn)普生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的凝聚胺檢測(cè)試劑盒。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法

采集入組患兒血樣，離心10 min，離心半徑為13.5 cm，轉(zhuǎn)速2000 rpm。分離血清與紅細(xì)胞，紅細(xì)胞用0.9%氯化鈉注射液洗滌，配置紅細(xì)胞懸液，濃度為3%，將0.9%氯化鈉注射液1 mL 加入1 mL 的紅細(xì)胞懸液內(nèi)，水浴7 min（56℃），離心取上清液，作為放散液備用。

（1）MGT

用微柱凝膠試劑卡標(biāo)記患兒血液標(biāo)本，將血液標(biāo)本置于凝膠試管內(nèi)，離心，對(duì)其有無凝聚反應(yīng)進(jìn)行觀察。若在凝膠底部則評(píng)定為陰性，若凝膠上層或中間分散則評(píng)定為陽性。

（2）凝聚胺技術(shù)

取1 支試管，將紅細(xì)胞放散液或1 滴配型紅細(xì)胞懸液、0.7mL 低離子介質(zhì)、2 滴血清置入，混合均勻，加入2 滴凝聚胺溶液，離心棄上清液，搖勻試管，查看是否有凝集現(xiàn)象。若無凝集發(fā)生則重復(fù)上述操作，有凝集發(fā)生后，將2 滴混合重懸液加入，，若有凝集反應(yīng)則評(píng)定為配血不合，反之則評(píng)定為配血合。每例患兒實(shí)施交叉配血試驗(yàn)3～6 次，以確保研究的準(zhǔn)確性，共實(shí)施了258 次。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）對(duì)比放散液MGT 與凝聚胺技術(shù)交叉配血結(jié)果；（2）比較血清MGT 與凝聚胺技術(shù)交叉配血結(jié)果；（3）分析放散液、血清MGT 與凝聚胺技術(shù)交叉配血結(jié)果的一致性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 診斷結(jié)果

48 例患兒均確證為ABO-HDN，其中血清游離抗體試驗(yàn)檢測(cè)陽性率為81.25%（39/48）、紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)檢測(cè)陽性率為100.00%（48/48）、改良抗人球蛋白試驗(yàn)檢測(cè)陽性率為 50.00%（24/48）。見表1。

表1 三項(xiàng)血清試驗(yàn)診斷結(jié)果（n）

2.2 放散液MGT 與凝聚胺技術(shù)交叉配血結(jié)果對(duì)比

放散液MGT 共檢出陽性108 次（41.86%），放散液凝聚胺技術(shù)共檢出陽性24 例（9.30%）。見表2。放散液MGT 陽性檢出率較放散液凝聚胺技術(shù)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=71.830，P=0.000）。經(jīng)kappa檢驗(yàn)顯示，放散液MGT 與凝聚胺技術(shù)交叉配血結(jié)果一致性較差（kappa=0.249，P=0.000）。

表2 放散液MGT 與凝聚胺技術(shù)交叉配血結(jié)果（n）

2.3 血清MGT 與凝聚胺技術(shù)交叉配血結(jié)果對(duì)比

血清MGT 共檢出陽性118 次（45.74%），血清凝聚胺技術(shù)共檢出陽性21 例（8.14%）。見表3。血清MGT 陽性檢出率較血清凝聚胺技術(shù)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=92.648，P=0.000）。經(jīng)kappa檢驗(yàn)顯示，血清MGT 與凝聚胺技術(shù)交叉配血結(jié)果一致性較差（kappa值=190，P=0.000）。

表3 血清MGT 與凝聚胺技術(shù)交叉配血結(jié)果（n）

3 討論

HDN 發(fā)病機(jī)制是胎兒階段從父親基因方面遺傳了母體不存在的抗原，當(dāng)母體抗體經(jīng)胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)后，抗原與抗體難以相互容納，進(jìn)而發(fā)生免疫作用，損傷紅細(xì)胞，可致患兒出現(xiàn)貧血、水腫、黃疸等，嚴(yán)重時(shí)可致患兒死亡[5]。HDN 患兒體內(nèi)含有母源溶血性ⅠgG 抗體，部分抗體可經(jīng)分解進(jìn)入血液，其余部分會(huì)在紅細(xì)胞表面附著，尋找時(shí)機(jī)與紅細(xì)胞相結(jié)合[6]。

臨床常用血清游離抗體試驗(yàn)、紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)、抗人球蛋白試驗(yàn)鑒別HDN。但傳統(tǒng)方式是利用試管法實(shí)施檢測(cè)，需對(duì)患兒血液樣本中紅細(xì)胞反復(fù)清洗，操作步驟相對(duì)繁瑣，且檢查結(jié)果易受人為因素影響，降低診斷準(zhǔn)確性，且具有用時(shí)長(zhǎng)、重復(fù)性不好等缺陷，臨床應(yīng)用受到一定局限性[6,7]。

輸血前須對(duì)患兒行交叉配血試驗(yàn)，其包含游離血清、紅細(xì)胞放散液，放散液檢測(cè)能夠反映結(jié)合在細(xì)胞上的溶血性抗體與輸注紅細(xì)胞間的不相容性，血清檢測(cè)可反映輸注紅細(xì)胞與患兒血液內(nèi)溶血性抗體的不相容性[6,7]。本研究中，放散液、血清MGT 陽性檢出率較凝聚胺技術(shù)高，放散液、血清MGT 與凝聚胺技術(shù)交叉配血結(jié)果一致性較差，提示ABO-HDN 輸血前采用MGT 檢測(cè)準(zhǔn)確性高于凝聚胺技術(shù)。凝聚胺技術(shù)檢驗(yàn)的主要原理是凝聚胺自身帶正電荷，能夠經(jīng)結(jié)合紅細(xì)胞，減少紅細(xì)胞表面電荷數(shù)，導(dǎo)致紅細(xì)胞發(fā)生非特異性凝聚，加入枸櫞酸鈉葡糖糖溶液再懸時(shí)，可有效中和凝聚胺的正電荷，促使非特性凝集紅細(xì)胞重新散開，但特異性的抗原抗體凝集散開難度較大，進(jìn)而判斷有無抗原存在[7]。凝聚胺技術(shù)檢驗(yàn)具有用時(shí)短、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，但對(duì)結(jié)果評(píng)定相對(duì)嚴(yán)格，抗體濃度較低時(shí)易有假陰性出現(xiàn)，易發(fā)生漏檢，診斷敏感度較低。MGT 檢驗(yàn)原理是將符合血清學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的稀釋液制作呈凝膠，用微管柱灌注對(duì)紅細(xì)胞凝膠顆粒分子進(jìn)行過濾，保留聚集的紅細(xì)胞，明確凝聚反應(yīng)結(jié)果[8]。MGT 檢驗(yàn)具有標(biāo)本少、特異性強(qiáng)、敏感度高、結(jié)果可直觀觀察、重復(fù)性好、結(jié)果穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)其無需使用顯微鏡，離心后沉于凝膠底部為陽性，在凝膠上層或中間分散即為陽性。但MGT 難以識(shí)別紅細(xì)胞上的不完全抗體，且檢驗(yàn)操作時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，不適用于急性患兒群體。

綜上所述，ABO-HDN 輸血前采用MGT 檢測(cè)準(zhǔn)確性高于凝聚胺技術(shù)，但MGT 檢測(cè)存在不足，無法完全替代凝聚胺技術(shù)，臨床可結(jié)合患兒生理特征與血清免疫學(xué)特點(diǎn)，靈活選擇多種方式聯(lián)合診斷篩查抗原抗體，提高輸血安全性。