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        哮喘患兒血清CircZNF652的表達水平及其臨床意義▲

        2023-09-07 04:56:38榮會蓉周金成
        廣西醫(yī)學(xué) 2023年13期
        關(guān)鍵詞:血清水平

        榮會蓉 周金成 夏 思 楊 凡

        (1 長江大學(xué)附屬仙桃市第一人民醫(yī)院兒科,湖北省仙桃市 433000;2 湖北省仙桃市仙桃職業(yè)學(xué)院醫(yī)學(xué)院,湖北省仙桃市 433000;3 長江大學(xué)附屬仙桃市第一人民醫(yī)院內(nèi)科,湖北省仙桃市 433000)

        哮喘是一種臨床上常見的慢性呼吸道疾病,兒童的肺功能發(fā)育尚未成熟,免疫功能尚不健全,因此哮喘在兒童中的發(fā)生風(fēng)險較高[1]。近年來,兒童哮喘的發(fā)病率呈逐年上升趨勢[2-3]。哮喘患兒主要癥狀為咳嗽、胸悶等,同時伴隨喘息反復(fù)發(fā)作,長期反復(fù)的炎癥刺激還可能會引起氣道重塑及氣道狹窄,嚴重影響患兒日常生活及健康[4-6]。哮喘的發(fā)病機制尚不十分明確,目前認為與遺傳因素、環(huán)境因素、免疫功能等有關(guān)[7]。因此,積極探索兒童哮喘的發(fā)病機制,尋找相關(guān)治療靶點對于改善哮喘患兒預(yù)后具有重要意義。環(huán)狀RNA(circular RNA,CircRNA)是環(huán)狀共價閉合環(huán)狀非編碼RNA,2013年Hansen等發(fā)現(xiàn)CircRNA可以通過靶向調(diào)控miRNA參與各種生理過程的調(diào)控[8],此后,CircRNA逐漸受到人們的重視。Circ鋅指蛋白652(zinc finger protein 652,ZNF652)是CircRNA家族成員之一,其在炎癥相關(guān)疾病中表達異常[9],推測其可能參與炎癥反應(yīng)過程。哮喘本質(zhì)上是一種氣道炎癥反應(yīng),目前CircZNF652與哮喘的相關(guān)研究鮮有報告。因此,本研究探討哮喘患兒血清CircZNF652表達水平及其臨床意義,旨在為兒童哮喘的診斷及靶向治療提供新方向。

        1 資料與方法

        1.1 臨床資料 選取2019年5月至2021年3月長江大學(xué)附屬仙桃市第一人民醫(yī)院收治的105例哮喘患兒作為觀察組,年齡5~12(7.90±2.25)歲,男童57例、女童48例。納入標準:(1)符合《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》[10]中的相關(guān)診斷標準;(2)患兒配合度較好,患兒家屬同意本研究并簽署知情同意書。排除標準:(1)合并先天性心肺功能不全者;(2)合并肝、腎功能不全者;(3)合并其他過敏性疾病及免疫系統(tǒng)疾病者;(4)一個月內(nèi)出現(xiàn)過呼吸道感染者。另選取同期在長江大學(xué)附屬仙桃市第一人民醫(yī)兒童保健科體檢的80例健康兒童作為對照組,年齡6~12(8.24±2.37)歲,男童43例、女童37例。觀察組與對照組兒童性別、年齡差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05),具有可比性。本研究所有實驗過程均符合《赫爾辛基宣言》相關(guān)要求,并經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準。

        1.2 分組 根據(jù)觀察組患兒的臨床表現(xiàn),依照《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》[10]相關(guān)標準將觀察組的105例哮喘患兒分為急性發(fā)作期組57例和慢性緩解期組48例,其中急性發(fā)作期組男童32例、女童25例,年齡5~11(7.85±2.22)歲;慢性緩解期組男童30例、女童18例,年齡5~12(7.96±2.29)歲。急性發(fā)作期組與慢性緩解期組的性別、年齡差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05),具有可比性。

        1.3 方法

        1.3.1 樣本采集:采集觀察組入院第1天、對照組體檢時晨起空腹的外周靜脈血4 mL,3 000 r/min離心15 min,留取上清液,于-80 ℃條件下保存待檢。

        1.3.2 實時熒光定量PCR法檢測血清CircZNF652的表達水平:取上清液,按照TRIzol試劑(Thermo Fisher Scientific,批號:10296010CN)的操作步驟分離、提取上清液中的總RNA,并檢測其純度和濃度,嚴格按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京索萊寶科技有限公司,批號:RP1105)的操作步驟合成cDNA。采用Bio-Rad T100型實時熒光定量PCR儀(Bio-Rad公司)檢測各組樣品,以GAPDH做內(nèi)參,反應(yīng)條件為95 ℃ 預(yù)變性30 s,95 ℃變性5 s、60 ℃退火20 s、68℃延伸15 s 35個循環(huán)。采用2-ΔΔCt方法計算CircZNF652的相對表達量。CircZNF652上游引物:5′-GGGCACAAACAGTTCATGTG-3′,下游引物:5′-TGCGTTTGAATGATTTTCCA-3′,引物均由上海生工生物工程有限公司合成。

        1.3.3 血清炎癥因子水平檢測:采用ELISA檢測血清腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白細胞介素(interleukin,IL)-6表達水平(試劑盒均購自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司,批號:E-EL-H0109c、E-EL-H6156),嚴格按照說明書方法進行操作。

        1.3.4 肺功能指標檢測:由同一位醫(yī)生操作,指導(dǎo)研究對象按照正確的步驟進行檢測,記錄觀察組入院第1天、對照組體檢時1秒用力呼氣容積(forced expiratory volume in one second,FEV1)、呼氣峰值流速(peak expiratory flow,PEF)、用力肺活量(forced vital capacity,FVC),計算FEV1/FVC值。肺功能指標檢測重復(fù)3次,取平均值。

        1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以(x±s)表示,組間比較采用兩獨立樣本t檢驗;計數(shù)資料以例數(shù)(%)表示,組間比較采用χ2檢驗;采用Pearson檢驗分析觀察組血清CircZNF652表達水平與肺功能指標及血清TNF-α、IL-6表達水平的相關(guān)性;采用受試者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線分析血清CircZNF652表達水平對兒童哮喘的診斷價值,并計算ROC曲線下面積(area under the curve,AUC);采用多因素Logistic回歸模型分析兒童哮喘急性發(fā)作的影響因素。以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié) 果

        2.1 觀察組與對照組血清CircZNF652、TNF-α、IL-6表達水平與肺功能指標的比較 觀察組FEV1、PEF、FEV1/FVC值均低于對照組,而血清CircZNF652、TNF-α、IL-6表達水平均高于對照組(均P<0.05)。見表1。

        表1 觀察組與對照組血清CircZNF652、TNF-α、IL-6表達水平及肺功能指標的比較(x±s)

        2.2 急性發(fā)作期組與慢性緩解期組血清CircZNF652、TNF-α、IL-6表達水平及肺功能指標的比較 急性發(fā)作期組的FEV1、PEF、FEV1/FVC值均低于慢性緩解期組,而血清CircZNF652、TNF-α、IL-6表達水平均高于慢性緩解期組(均P<0.05)。見表2。

        表2 急性發(fā)作期組與慢性緩解期組血清CircZNF652、TNF-α、IL-6表達水平及肺功能指標的比較(x±s)

        2.3 觀察組血清CircZNF652表達水平與肺功能指標及血清TNF-α、IL-6表達水平的相關(guān)性 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示,觀察組血清CircZNF652表達水平與FEV1、PEF、FEV1/FVC值均呈負相關(guān),與血清TNF-α、IL-6表達水平均呈正相關(guān)(均P<0.05)。見表3。

        表3 血清CircZNF652表達水平與肺功能指標及血清TNF-α、IL-6表達水平的相關(guān)性

        2.4 血清CircZNF652表達水平對兒童哮喘的診斷價值 以是否哮喘作為狀態(tài)變量(無哮喘=0,哮喘=1),以血清CircZNF652表達水平作為檢驗變量繪制ROC曲線。結(jié)果顯示,血清CircZNF652表達水平診斷兒童哮喘的AUC為0.741(95%CI:0.671,0.802),靈敏度和特異度分別為75.24%、67.50%,最佳截斷值為1.12。見圖1。

        圖1 血清CircZNF652水平對兒童哮喘診斷價值的ROC曲線圖

        2.5 哮喘患兒急性發(fā)作的影響因素分析 以哮喘患兒哮喘發(fā)展期作為因變量(0=急性發(fā)作期,1=慢性緩解期),以FEV1、PEF、FEV1/FVC值及血清CircZNF652、TNF-α、IL-6表達水平作為自變量進行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,FEV1、PEF、FEV1/FVC值,以及血清TNF-α、IL-6、CircZNF652表達水平均是哮喘患兒急性發(fā)作的影響因素(均P<0.05)。見表4。

        表4 多因素Logistic回歸分析兒童哮喘急性發(fā)作的影響因素

        3 討 論

        哮喘是兒童常見的一種慢性呼吸道疾病之一,是由多種炎癥因子共同參與導(dǎo)致的變態(tài)反應(yīng)性疾病[11-12],以持續(xù)性氣道炎癥、氣道高反應(yīng)為主要特征[13],患兒會出現(xiàn)反復(fù)咳嗽、呼吸困難等臨床表現(xiàn),嚴重影響患兒的生活質(zhì)量。由于呼吸系統(tǒng)處于高敏狀態(tài),哮喘患兒氣道極易受到外界因素的影響[14],誘發(fā)哮喘急性發(fā)作,嚴重時可危及生命。哮喘的發(fā)病機制十分復(fù)雜,受多種因素的影響,若能盡早評估哮喘發(fā)生的風(fēng)險,及時采取早期預(yù)防手段,將極大地降低高風(fēng)險兒童哮喘的發(fā)病率,具有重要的臨床意義。

        血清生物學(xué)分子標志物是近年來疾病研究的熱點,其能夠客觀快速地反映疾病進程,這為哮喘的早期診斷及靶向治療提供了新的研究方向。目前仍無特異性較強的血清生物學(xué)分子標志物用于診斷早期哮喘的發(fā)生,因此尋找與哮喘相關(guān)的血清生物學(xué)分子標志物具有重要的臨床意義。CircRNA是近年來新發(fā)現(xiàn)的非編碼RNA,許多研究已經(jīng)報告了CircRNA作為血清生物學(xué)分子標志物用于診斷疾病具有巨大的潛力,但目前相關(guān)研究多集中在腫瘤領(lǐng)域[15-16]。例如,CircRNA-100367被發(fā)現(xiàn)能夠增強抗輻射的食管鱗狀細胞癌細胞(KYSE-150R)的抗放射性,促進KYSE-150R細胞的生長,促進食管癌進展[17];CircWHSC1在子宮內(nèi)膜癌組織中表達上調(diào),能夠促進子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖和侵襲[18]。研究表明,CircRNA與支氣管哮喘具有密切的關(guān)系,CircRNA可以通過參與先天免疫應(yīng)答過程和調(diào)控支氣管上皮的炎癥反應(yīng)過程來調(diào)節(jié)支氣管哮喘的發(fā)病過程,CircRNA為哮喘的早期診斷提供了新的研究思路[19],但不同的刺激源、不同的CircRNA會對支氣管上皮炎癥反應(yīng)發(fā)揮不同的作用,具體的作用機制還需更深入的研究。

        CircZNF652是最新發(fā)現(xiàn)的一類CircRNA分子,Liu等[20]發(fā)現(xiàn)下調(diào)CircZNF652的表達可以緩解脂多糖誘導(dǎo)的炎癥損傷,提示CircZNF652可能參與炎癥反應(yīng)的調(diào)控過程。本研究結(jié)果顯示,觀察組血清CircZNF652表達水平高于對照組(P<0.05),與Wang等[21]的研究結(jié)果一致,提示CircZNF652可能參與兒童哮喘的發(fā)病過程。本研究結(jié)果顯示,急性發(fā)作期組患兒的血清CircZNF652表達水平高于慢性緩解期組(P<0.05),提示血清CircZNF652表達水平與兒童哮喘的疾病發(fā)展期具有一定的相關(guān)性。本研究Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示,哮喘患兒血清CircZNF652表達水平與FEV1、PEF、FEV1/FVC值均呈負相關(guān),與血清TNF-α、IL-6表達水平均呈正相關(guān),而FEV1、PEF、FEV1/FVC值及血清CircZNF652、TNF-α、IL-6表達水平均是哮喘患兒急性發(fā)作的影響因素(均P<0.05),提示臨床監(jiān)測肺功能和血清CircZNF652、TNF-α、IL-6表達水平對哮喘患兒病情判定、疾病發(fā)展具有重要意義。本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示,血清CircZNF652表達水平診斷兒童哮喘的AUC為0.741,靈敏度和特異度分別為75.24%、67.50%,提示CircZNF652表達水平診斷的效能良好,當血清CircZNF652表達水平>1.12時,應(yīng)采取合理的防治措施,預(yù)防兒童出現(xiàn)哮喘癥狀。目前關(guān)于CircZNF652在哮喘發(fā)病過程中的作用機制尚不完全清楚,Wang等[21]認為CircZNF652的作用機制可能是通過充當miR-452-5p的海綿體并激活miR-452-5p/酪氨酸激酶2的信號通路及轉(zhuǎn)錄激活因子6信號通路促進杯狀細胞化生,導(dǎo)致氣道阻塞,進而誘發(fā)哮喘,但具體的作用機制還有待更深入的研究。

        肺功能檢測對哮喘的診斷、鑒別、病情嚴重程度評估、治療效果判斷及預(yù)后起著重要作用,也是臨床診斷兒童哮喘的重要指標。FEV1反映中央氣道的氣流流速,PEF反映大氣道流速,二者均能評估哮喘患者未來不良事件的發(fā)生風(fēng)險;FEV1/FVC值是臨床醫(yī)生判斷哮喘嚴重程度的重要因素,有研究證實FEV1/FVC值每下降5%,受試者哮喘嚴重程度表型可能會增加2.36倍[22-24]。另外,炎癥因子表達水平升高也能增加氣道炎癥,容易出現(xiàn)氣道管壁增厚、管腔狹窄,增加氣道外周阻力,促進哮喘的發(fā)展[25]。許惠娟等[26]發(fā)現(xiàn),急性發(fā)作期哮喘患者FEV1、PEF、FEV1/FVC值低于緩解期患者和健康受試者,且哮喘患者血清IL-33表達水平高于健康受試者。本研究結(jié)果顯示,觀察組FEV1、PEF、FEV1/FVC值均低于對照組(均P<0.05),而血清TNF-α、IL-6表達水平均高于對照組(均P<0.05);急性發(fā)作期組患兒的FEV1、PEF、FEV1/FVC值均低于慢性緩解期組(均P<0.05),而血清TNF-α、IL-6表達水平均高于慢性緩解期組(均P<0.05),這一研究結(jié)果與許惠娟等[26]研究結(jié)果相似。

        綜上所述,哮喘患兒血清CircZNF652表達上調(diào),并與哮喘急性發(fā)作相關(guān),且血清CircZNF652表達水平與肺功能指標呈負相關(guān),與血清TNF-α及IL-6表達水平呈正相關(guān),因此檢測血清CircZNF652表達水平有助于哮喘患兒的病情判定,但其具體作用機制尚不十分明確,今后還需增加樣本量、延長觀察時間,并開展多中心的深入研究。

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