◎ 劉八斤，汪婷婷，劉昌福，歐陽敏，吳劍華，鄧 鋼

（萍鄉(xiāng)衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，江西 萍鄉(xiāng) 337000）

吳茱萸始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有散寒止痛、降逆止嘔、降壓等功能。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，其化學(xué)成分吳茱萸堿具有較強(qiáng)的抗炎、抗癌、抗氧化及修復(fù)腦細(xì)胞治療中風(fēng)等作用[1]。近年，吳茱萸不同部位在治療心血管疾病的前景受到人們密切關(guān)注，但關(guān)于不同采收期的吳茱萸品質(zhì)研究及其抗氧化活性未有報(bào)道。通過本課題的研究，有助于明確不同采收期的吳茱萸品質(zhì)及其抗氧化活性。

吳茱萸的有效成分具有護(hù)心降血壓、調(diào)脂、鎮(zhèn)痛及抗炎等作用[2]。吳茱萸不同部位具有廣泛的藥理活性，能夠?qū)岚逯峦春投妆街卵仔∈缶哂忻黠@的鎮(zhèn)痛和抗炎作用，并表現(xiàn)出一定的中樞神經(jīng)作用[3]。然而，當(dāng)前學(xué)界對(duì)于不同采收期和部位的吳茱萸品質(zhì)未有研究，本研究擬通過檢測(cè)吳茱萸在不同采收期的有效成分含量，檢測(cè)抗氧化活性，以期闡明不同采收期吳茱萸品質(zhì)及其抗氧化活性。

1 材料

吳茱萸樣品：2022年，采集于萍鄉(xiāng)衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院；采集方法：采用五點(diǎn)采樣法，選定35株吳茱萸的樣株，每次采集其部分果實(shí)混勻，開始每隔2 d采集1次，后采集間隔延至6 d或更長(zhǎng)，采集后立即暴曬干。

吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內(nèi)酯購(gòu)自大連美侖有限公司，供含量測(cè)定。

2 方法

2.1 色譜條件

高效液相色譜儀（Agilent，包括Agilent 1290系列泵及 G1314A檢測(cè)器）；色譜柱為Kromsol MG C18柱（4.6×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-水；流速為 1 mL?min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為 225 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量： 20 μL。

2.2 含量測(cè)定

吳茱萸打碎過5號(hào)篩，取約0.6 g，稱量后置容量瓶中，精密加入75%乙醇50 mL，稱重，超聲處理30 min，放置冷卻后用75%乙醇補(bǔ)重，濾過即得。按2.1方法分別對(duì)吳茱萸進(jìn)行有效成分（吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內(nèi)酯）的定量分析。

2.3 抗氧化活性測(cè)定

2.3.1 測(cè)定 1,2-二苦基-2-三硝基苯亞肼（DPPH ）

自由基清除率取3支潔凈離心管，分別準(zhǔn)確吸取1 mL樣品溶液（樣品組）、抗壞血酸溶液 （陽性對(duì)照組）和純凈水（空白組），然后分別加入0.004%的DPPH自由基溶液5 mL，混勻冷卻即得，測(cè)吸光值，計(jì)算DPPH自由基清除率。

自由基清除率/% =（1-Ab-AcAa）×100% （1）

式中：Ab為樣品吸光度；Ac為陽性對(duì)照吸光度；Aa為空白對(duì)照吸光度。

2.3.2 測(cè)定過氧化氫清除率

向3支空試管中各吸取1.7 mL樣品溶液（樣品組）、維生素C（Vitamin C，VC）溶液（陽性對(duì)照組）和蒸餾水（空白組），再各加入40 mmol/L過氧化氫溶液 （用0.1 mol/L的磷酸鹽緩沖溶液配制）0.3 mL，混勻即得，于230 nm處測(cè)吸光值，根據(jù)公式（1）計(jì)算樣品H2O2清除率。

3 統(tǒng)計(jì)分析

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)通過x（平均值）的方式表示，采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行偏最小二乘法、回歸性分析，用GraphPad Prism 8進(jìn)行圖形繪制。

4 結(jié)果

4.1 不同采收期的吳茱萸有效成分含量測(cè)定

不同時(shí)期的吳茱萸品種的吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿的變化趨勢(shì)如表1所示。結(jié)果顯示，在吳茱萸結(jié)果后，吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿的含量逐漸增加，且吳茱萸果實(shí)中吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿成分在9月份增加速度最快，在9月下旬仍呈增加趨勢(shì)；10月吳茱萸老熟且成分開始降低，因此沒有繼續(xù)進(jìn)行樣品采集，連續(xù)采樣時(shí)間持續(xù)了2個(gè)月。從有效成分含量變化可以看出，9月底是最佳采收時(shí)間。

表1 不同采收期吳茱萸有效成分含量表

4.2 不同采收期吳茱萸的抗氧化活性

不同采收期吳茱萸的DPPH自由基和過氧化氫清除能力結(jié)果見表2。通過并應(yīng)用偏最小二乘法分析、回歸分析3個(gè)主要成分的含量與DPPH自由基和過氧化氫清除能力的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)吳茱萸的DPPH自由基和過氧化氫清除能力與3個(gè)主要成分的含量，呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)。

表2 不同采收期吳茱萸的DPPH和H2O2清除率表

5 結(jié)語

研究表明，吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿是吳茱萸的主要有效成分，且吳茱萸堿具有內(nèi)皮依賴性血管擴(kuò)張作用[4]。近年，人們對(duì)吳茱萸次堿的藥理特性進(jìn)行了廣泛的研究。吳茱萸有效成分具有積極的肌力和變時(shí)作用，可調(diào)節(jié)葡萄糖代謝以及動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵分子，因此，具有特殊的心血管保護(hù)作用[5]。本實(shí)驗(yàn)通過不同時(shí)期采收吳茱萸果實(shí)，進(jìn)行吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿的含量測(cè)定，發(fā)現(xiàn)其最佳采收期是9月底。同時(shí)，根據(jù)體外DPPH和H2O2消除實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其有效成分含量與抗氧化消除作用呈正相關(guān)，結(jié)論與過往文獻(xiàn)結(jié)論相近，且能為萍鄉(xiāng)地區(qū)采收和使用吳茱萸提供依據(jù)。

綜上所述，萍鄉(xiāng)安源地區(qū)吳茱萸的最佳采收期是9月底，同時(shí)，抗氧化作用和其有效成分含量呈正相關(guān)。因此，本研究可以為吳茱萸的采收和臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

樹立節(jié)糧意識(shí)，珍惜勞動(dòng)成果。