覃春梅 李斌 傅鵬 盤涌 譚小明 姚紹嫦

摘要：為獲得一套完整高教的白花懸鉤子（Rubus leucanthus Hance）組培快繁技術(shù)體系，以葉片為外植體，系統(tǒng)研究了外植體不同滅菌時(shí)間、不同植物激素配比及濃度對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)及叢生芽分化、增殖和生根的影響，并進(jìn)行了組培苗移栽。結(jié)果表明：最佳的外植體滅菌方式為2% NaCIO溶液2 min+0.1% HgCI2溶液5min，實(shí)現(xiàn)了污染率最低（23.33%）、存活率最高（73.33%）；最佳的叢生芽分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+3.0 mg．L-16-BA+0.5 mg.L-1 KT+0.5 mg·L-1 NAA，愈傷組織誘導(dǎo)率為100%，芽誘導(dǎo)率為93.33%；6-BA與KT對(duì)增殖系數(shù)有顯著影響，最佳的繼代增殖培養(yǎng)基為MS+2.5 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1 KT+0.4 mg·L-1 NAA，培養(yǎng)20 d的增殖系數(shù)達(dá)7.84；最適的生根培養(yǎng)基為1/2MS+1.0 mg·L-1 IBA，生根率為100%，移栽成活率為86.67%，實(shí)現(xiàn)平均株高3.02 cm、平均根長(zhǎng)6.16 cm、平均根數(shù)8.67條與平均葉數(shù)2.47片。本研究結(jié)果既可為白花懸鉤子優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化生產(chǎn)提供技術(shù)支持，又可為懸鉤子屬植物葉片組培快繁體系的建立提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：白花懸鉤子；葉片；組培快繁；植物激素；移栽

中圖分類號(hào)：S567.1+9：Q949.751.8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2023）02-0071-07

白花懸鉤子（Rubus leucanthus Hance）是薔薇科懸鉤子屬的落葉灌木，又名白鉤筋藤、南蛇筋，以根或果實(shí)入藥，分布于湖南、福建、廣東、廣西、貴州、云南等地，常見于低海拔至中海拔的疏林或曠野中。白花懸鉤子是一種傳統(tǒng)的壯瑤藥材，被廣泛收載于《藥用植物辭典》《中國(guó)中藥資源志要》《廣西中藥資源名錄》等中醫(yī)藥學(xué)文獻(xiàn)資料中。據(jù)《嶺南中草藥遷地保護(hù)圖譜》記載，白花懸鉤子味苦，性涼，具有利濕、解毒的功效，民間常用于治療腹瀉、赤痢口]。類似于同屬植物掌葉覆盆子（Rubus chingii Hu），白花懸鉤子的果實(shí)成熟時(shí)呈紅色，味道酸甜可口，也是一種重要的功能性食品，營(yíng)養(yǎng)豐富，可食用或藥用，常用于治療遺尿、腎虛、陽(yáng)痿早泄、尿頻、遺精等疾病。雖然白花懸鉤子的化學(xué)成分尚未有相關(guān)的研究報(bào)道，但是懸鉤子屬植物的化學(xué)成分分析已有報(bào)道，可分為酚酸類、黃酮、三萜、揮發(fā)油、甾體和生物堿、多糖等類型。白花懸鉤子藥材目前仍以野生資源為主，隨著近年來(lái)生長(zhǎng)環(huán)境惡化及人為采挖加劇，野生資源已日益枯竭，根本無(wú)法滿足醫(yī)藥市場(chǎng)的需求，開展人工種植前景廣闊、勢(shì)在必行。

在自然狀態(tài)下，白花懸鉤子主要依靠種子繁殖．但由于種子小、成熟果實(shí)常被鳥啄食、資源分布零散等因素，難以采收其種子進(jìn)行人工繁殖。利用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行白花懸鉤子的種苗繁育，具有繁殖速度快、繁殖系數(shù)高、后代遺傳穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn)，可在短時(shí)間內(nèi)獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗，對(duì)白花懸鉤子種質(zhì)資源保存與產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)具有重要意義。然而，目前尚未發(fā)現(xiàn)白花懸鉤子組培再生體系的相關(guān)研究報(bào)道。有關(guān)掌葉覆盆子、樹莓（Rubus idaeusL.）等同屬植物的組培快繁研究報(bào)道可為白花懸鉤子組培快繁體系的建立提供一定的參考依據(jù)。謝從壽等以掌葉覆盆子當(dāng)年生莖段為外植體成功建立了組培快繁體系，分別在誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+1.5mg.L-1 6-BA+0.15 mg.L-1 NAA與增殖培養(yǎng)基MS+1.5 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 NAA上實(shí)現(xiàn)了較高的誘導(dǎo)率（68％）與增殖系數(shù)（4.87）；最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.6 mg·L-1 NAA+0.2 mg·L-IBA +0.8 mg·L-1活性炭，生根率達(dá)到95.3%，生根數(shù)達(dá)到5.7條，根長(zhǎng)達(dá)到5.8 cm，根系發(fā)達(dá)，幼苗生長(zhǎng)健壯。王利平等利用同樣的材料也成功建立了掌葉覆盆子的組培再生體系，獲得了更高的萌發(fā)率（>80％）與增殖系數(shù)（15.1），但使用了更低濃度的植物激素組合。徐亞英等以新生腋芽為外植體，著重探討了不同濃度的6-BA、NAA、IBA在樹莓離體快繁中的作用。

在懸鉤子屬植物的組培實(shí)驗(yàn)中，通常選取的外植體材料是一年生帶芽嫩莖（單芽莖段）、莖尖或未萌發(fā)的腋芽，目前尚未發(fā)現(xiàn)使用葉片作為外植體材料來(lái)建立其組培快繁體系的研究報(bào)道。因此，本研究以白花懸鉤子葉片為外植體，篩選出外植體滅菌的最佳方法及愈傷組織誘導(dǎo)、叢生芽分化和增殖、生根的最佳培養(yǎng)基配方，建立了其離體快繁體系，以期為白花懸鉤子優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化生產(chǎn)和懸鉤子屬植物葉片組培快繁體系的建立提供參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試材料為白花懸鉤子（Rubus leucanthus Hance），取自廣西中醫(yī)藥大學(xué)科研種植基地，于晴天上午選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害的白花懸鉤子植株，剪取嫩葉帶回實(shí)驗(yàn)室。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1外植體滅菌處理 將白花懸鉤子的嫩葉放入燒杯中，經(jīng)0.05％的洗潔精水浸泡15 min后，流水沖洗30 min，然后在超凈工作臺(tái)上用不同的外植體滅菌方法（表1）進(jìn)行滅菌；用無(wú)菌水浸洗滅菌后的嫩葉3-5次，再用無(wú)菌濾紙吸干表面水分，用滅菌解剖刀將嫩葉切成1 cm2左右的小塊接種到初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織與叢生芽。每個(gè)處理接種30瓶，每瓶接種1塊葉片，3次重復(fù)，共90瓶。培養(yǎng)10 d，觀察記錄外植體的污染情況。

1.2.2初代誘導(dǎo)培養(yǎng) 以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同質(zhì)量濃度的6-BA、KT與NAA組合，并附加3.0％的蔗糖和0.5%的瓊脂，調(diào)pH 6.0，配制成不同的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基（表2）。將葉片接種到不同的培養(yǎng)基上，每處理接種10瓶，每瓶接種3塊葉片，重復(fù)3次，然后在（26±2）℃、光照強(qiáng)度2 000 lx、光照時(shí)間10 h/d的條件下培養(yǎng)30 d，觀察記錄愈傷組織誘導(dǎo)與叢生芽分化情況，以篩選出最佳的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

1.2.3繼代增殖培養(yǎng) 待初代培養(yǎng)的叢生芽長(zhǎng)至1.5-2.0 cm時(shí)，選擇生長(zhǎng)一致的單芽轉(zhuǎn)接至以MS添加不同激素濃度的繼代增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基附加3.0％蔗糖和0.5％瓊脂（pH 6.0），6-BA、KT、NAA添加濃度采用Lg（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法進(jìn)行篩選，因素與水平見表3。每個(gè)處理接種10瓶，每瓶接種3個(gè)芽，重復(fù)3次。在與初代誘導(dǎo)培養(yǎng)相同條件下培養(yǎng)20 d，觀察記錄增殖系數(shù)及再生芽的生長(zhǎng)情況，以篩選出最佳的繼代增殖培養(yǎng)基。

1.2.4生根培養(yǎng) 當(dāng)繼代增殖無(wú)菌苗長(zhǎng)至1.5cm以上，從基部切下單個(gè)芽，接種至以1/2MS添加不同生長(zhǎng)素的生根培養(yǎng)基中（表4），培養(yǎng)基附加3.0%蔗糖和0.5%瓊脂，pH 6.0。每個(gè)處理接種10瓶，每瓶接種3個(gè)芽，重復(fù)3次。在（26±2）℃、光照強(qiáng)度1 000 lx、光照時(shí)間8 h/d條件下培養(yǎng)20 d，觀察記錄每個(gè)處理的生根情況，統(tǒng)計(jì)生根率、平均株高、平均根長(zhǎng)、平均根數(shù)與平均葉數(shù)，以篩選出最佳的生根培養(yǎng)基。

1.2.5組培苗移栽 選取生長(zhǎng)健壯、根系良好的組培苗，在自然光下馴化煉苗7d，然后打開瓶蓋繼續(xù)煉苗3～5 d，用鑷子將組培苗輕輕從培養(yǎng)瓶中取出，用流水沖洗干凈根部殘留的培養(yǎng)基，移栽到裝有混合基質(zhì)的育苗杯中，混合基質(zhì)為泥炭土+珍珠巖（體積比為3：1）；用塑料薄膜覆蓋7d，之后揭開薄膜，在室內(nèi)自然條件下繼續(xù)培養(yǎng)。移栽后20 d，觀察統(tǒng)計(jì)組培苗的移栽成活率。

1.3數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

污染率（%）=（污染的外植體數(shù)／接種的外植體數(shù)）×100：

存活率（%）=（誘導(dǎo)出愈傷組織或叢生芽的外植體數(shù)／接種的外植體數(shù)）×100：

增殖系數(shù)=高度大于1.0 cm的有效芽數(shù)／接種芽數(shù)；

生根率（%）=（生根的芽數(shù)／接種的芽數(shù)）×100；

平均根數(shù)=總生根條數(shù)／生根的組培苗數(shù)；

移栽成活率（%）=（成活的組培苗數(shù)／移栽的組培苗數(shù)）×100。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2010和SPSS24.0軟件進(jìn)行處理分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的方式表示，組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVE）、Duncan's新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表中的小、大寫英文字母分別表示在0.05、0.01水平上差異顯著、極顯著。

2結(jié)果與分析

2.1不同滅菌方法對(duì)外植體滅菌效果的影響

由表5可知，不同滅菌方法的外植體污染率與存活率存在顯著差異。單獨(dú)使用0.1% HgCI2或2qo NaCIO進(jìn)行處理時(shí)，外植體的污染率均高于50％，存活率均低于50％，與兩者的組合處理相比存在極顯著差異。當(dāng)使用0.1％HgCl2與2％NaCLO進(jìn)行組合處理時(shí)，污染率均低于30%，存活率均高于50%。當(dāng)滅菌處理為2％ NaClO溶液2min+0.1％ HgCl2，溶液5 min時(shí)，外植體的污染率較低（23.33%），存活率最高（73.33%）且極顯著高于其它處理。可見，當(dāng)外植體在2% NaCLO溶液中滅菌2 min后繼續(xù)在0.1% HgCl2溶液中處理較短時(shí)間，可獲得較高的存活率，說明HgCl2可有效抑制外植體的污染，但滅菌時(shí)間過長(zhǎng)容易對(duì)外植體造成毒害作用。綜合污染率與存活率，我們認(rèn)為白花懸鉤子葉片最佳的滅菌方法為2% NaCIO溶液2 min+0.1% HgCl2溶液5min。

2.2不同植物激素種類與濃度對(duì)初代誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響

由表6可知，不同激素種類與濃度配比的培養(yǎng)基均能使葉片誘導(dǎo)出愈傷組織，但叢生芽誘導(dǎo)率存在極顯著差異。當(dāng)6-BA濃度為2.0 mg·L-1、NAA濃度為0.2 mg·L-1時(shí)，隨著KT濃度的逐漸升高，芽誘導(dǎo)率逐漸增加，變化范圍為36.67％-60.00％；當(dāng)6-BA濃度為3.0 mg.L-1、NAA濃度為0.5 mg.L-1時(shí)，配合較低濃度的KT（0.5 mg·L-1），獲得了較好的叢生芽誘導(dǎo)效果，芽誘導(dǎo)率最高，達(dá)到93.33%，極顯著高于其它處理。因此，我們認(rèn)為白花懸鉤子最佳的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+3.0mg.L-1 6-BA+0.5 mg.L-1 KT+0.5 mg.L-1 NAA。

2.3不同植物激素種類與濃度配比對(duì)繼代增殖培養(yǎng)的影響

由表7可知，不同植物激素種類與濃度配比的培養(yǎng)基對(duì)白花懸鉤子叢生芽的繼代增殖存在極顯著影響。當(dāng)6-BA用量較低（1.5 mg·L-1）時(shí)，叢生芽的增殖系數(shù)隨著KT與NAA濃度增加而極顯著下降，此時(shí)叢生芽的生長(zhǎng)情況不理想：若KT濃度過低，叢生芽的基部容易褐化，葉片容易變黃；若NAA的濃度過高，叢生芽容易長(zhǎng)不定根。增加6-BA用量有利于獲得較強(qiáng)的叢生芽生長(zhǎng)勢(shì)，6-BA、KT和NAA三種激素組合使用可獲得較好的叢生芽增殖效果與生長(zhǎng)狀況，在2.5 mg·1-1 6-BA+1.5mg.L-1 KT+0.4 mg·L-1 NAA處理下叢生芽的增殖系數(shù)較高，生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)且葉片保綠較好。

從正交試驗(yàn)的結(jié)果來(lái)看，在添加2.5 mg·L-16-BA+1.5 mg·L-1 KT+0.4 mg·L-1 NAA的培養(yǎng)基中，白花懸鉤子叢生芽的增殖系數(shù)最高，達(dá)到了7.84，極顯著高于其它處理。根據(jù)極差分析結(jié)果K值大小，我們初步確定最優(yōu)組合為A383C2，即2.5 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1 KT+0.4 mg·L-1NAA。從方差分析結(jié)果（表8）可見，6-BA（ P<0.01）和KT（P<0.04）均對(duì)增殖倍數(shù)有顯著影響，而NAA對(duì)結(jié)果無(wú)顯著影響（P>0.87），表明在白花懸鉤子叢生芽繼代增殖過程中6-BA為主要因素，KT為次要因素。綜合方差分析、極差分析和增殖系數(shù)，確定白花懸鉤子繼代增殖的最佳培養(yǎng)基為 MS+2.5 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1 KT+0.4mg.L-1 NAA。

2.4不同質(zhì)量濃度IBA與NAA對(duì)生根與移栽的影響

由表9可知，在1/2MS培養(yǎng)基中單獨(dú)或者配合使用IBA與NAA均能使白花懸鉤子的組培苗生根。當(dāng)單獨(dú)使用1.0 mg.L-1 IBA時(shí)，組培苗的平均株高、平均根長(zhǎng)、平均根數(shù)與平均葉數(shù)均最高，分別達(dá)到了3.02 cm、6.16 cm、8.67條與2.47片，極顯著高于其它處理；當(dāng)單獨(dú)使用1.0 mg·L-1NAA進(jìn)行生根培養(yǎng)時(shí)，組培苗的平均根長(zhǎng)、平均株高與平均葉數(shù)均處于較低水平，說明較高濃度的NAA會(huì)抑制組培苗的根與芽生長(zhǎng)。當(dāng)配合使用IBA與NAA時(shí)，組培苗的平均根長(zhǎng)、平均株高與平均葉數(shù)等指標(biāo)均顯著低于單獨(dú)使用1.0mg·L-1IBA（處理2）。因此，我們認(rèn)為白花懸鉤子的最佳生根培養(yǎng)基是1/2MS+1.0 mg·L-1 IBA。

將白花懸鉤子生根的組培苗經(jīng)過馴化煉苗后移栽到泥炭土+珍珠巖（3：1，體積比）的混合基質(zhì)中，20 d后植株生長(zhǎng)良好，在生根培養(yǎng)基1/2MS+1.0 mg.L-1 IBA中培養(yǎng)獲得的生根無(wú)菌苗移栽成活率最高，達(dá)到了86.67%，極顯著高于其它處理。

綜合上述分析，我們建立了白花懸鉤子的葉片組培快繁體系，獲得了生長(zhǎng)良好的生根苗（圖1）。

3討論與結(jié)論

外植體滅菌是組織培養(yǎng)中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，自然環(huán)境中采集的外植體往往攜帶大量的微生物，因此要求在滅菌過程中既能有效殺滅微生物，又不能損傷植物組織，以保證植物體活性。HgCI2、INaCIO、C2HSOH與KMnO4等溶液常被單獨(dú)或者組合用于外植體的滅菌，其組合方式與使用時(shí)間常會(huì)因材料而有所不同，需要經(jīng)過試驗(yàn)才能確定最佳的滅菌方法。在同屬植物樹莓組織培養(yǎng)中，于丹考察了單獨(dú)使用5% NaCl0與0.1% HgCl2的滅菌效果，認(rèn)為用0.1％ HgCl2處理3min的效果最好：李艷霞等發(fā)現(xiàn)樹莓“波拉納”品種的莖段在75％酒精30 s+0.1％升汞8min+2%次氯酸鈉2 min中滅菌可獲得最低的污染率與最高的成活率。魏海霞等認(rèn)為在對(duì)中國(guó)檉柳（Tamanx chinensis Lour.）進(jìn)行外植體滅菌時(shí)采取75％酒精浸泡30 s、2％次氯酸鈉浸泡3-5 min和升汞浸泡5 min最適宜。在本研究中，我們考察了單獨(dú)使用與組合使用2％ NaClO與0.1％HgCl2溶液對(duì)白花懸鉤子葉片滅菌的影響，發(fā)現(xiàn)當(dāng)兩者組合使用時(shí)可達(dá)到較好的滅菌效果，污染率均小于30%。由于滅菌劑的穿透力強(qiáng)，應(yīng)嚴(yán)格掌握好處理時(shí)間，時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)破壞外植體的組織結(jié)構(gòu)從而引起褐變，降低外植體的成活率。本研究采用2% NaCIO溶液滅菌2 min之后再使用0.1% HgCI2溶液滅菌5 min，能達(dá)到既有效殺死白花懸鉤子葉片上的微生物又最小限度傷害外植體的目的，污染率僅23.33%，存活率達(dá)73.33％且極顯著高于其它處理。

外植體的污染和褐化嚴(yán)重影響組培快繁技術(shù)成功水平，選擇適宜的外植體，不僅可以大大降低其污染率與褐化率，還可進(jìn)一步提高其成活率。在已有的懸鉤子屬植物組培試驗(yàn)中，通常選取的外植體材料是一年生帶芽嫩莖（單芽莖段）、莖尖或以未萌發(fā)的腋芽作為材料，目前尚未發(fā)現(xiàn)用該屬植物葉片進(jìn)行組培快繁的研究報(bào)道。我們以白花懸鉤子葉片為外植體，建立了其組培快繁技術(shù)體系，研究結(jié)果既可為白花懸鉤子優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化生產(chǎn)提供技術(shù)支持，又可為懸鉤子屬植物葉片組培快繁體系的建立提供參考依據(jù)。

對(duì)于懸鉤子屬植物，已有研究表明常見的MS、MT、White、N6、B5、NT等培養(yǎng)基均能滿足其生長(zhǎng)需要，但國(guó)內(nèi)外的研究者們更多地選擇MS培養(yǎng)基。Poothong等研究發(fā)現(xiàn)合理增加MS培養(yǎng)基中CaCl2、MgSO4和KH2PO4等無(wú)機(jī)鹽的含量能顯著促進(jìn)懸鉤子屬植物的生長(zhǎng)。本研究也選擇MS作為基本培養(yǎng)基，探討了不同植物激素種類及濃度對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)、叢生芽分化和增殖以及生根培養(yǎng)的影響。

楊鼎元等對(duì)懸鉤子屬植物的組培快繁技術(shù)研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，發(fā)現(xiàn)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類與劑量會(huì)因物種、外植體類型與組培過程的不同階段而各不相同。比如，紅樹莓（Rubus idaeus）的啟動(dòng)培養(yǎng)與增殖培養(yǎng)均需要較高濃度的GA3（2-8 mg·L-1）以促進(jìn)叢生芽的誘導(dǎo)與增殖，而掌葉覆盆子僅需要添加6-BA單一細(xì)胞分裂素即可達(dá)到較好的叢生芽誘導(dǎo)與增殖效果。徐亞英等以新生腋芽為外植體，著重探討了不同濃度的6-BA、NAA與IBA在樹莓離體快繁中的作用。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)3.0mg.L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 KT+0.5 mg·L-1 NAA組合使用時(shí)，白花懸鉤子的芽誘導(dǎo)率最高，達(dá)到了93.33％，極顯著高于其它處理：對(duì)于叢生芽的增殖培養(yǎng)，3.0 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1 KT+ 0.4mg·L-1 NAA組合使用也能在培養(yǎng)20 d后獲得最高的增殖系數(shù)（7.84），這一結(jié)果與劉潤(rùn)和王鵬等分別在紅葉石楠與路易斯安娜鳶尾‘Noble Moment上的研究結(jié)果一致。因此，我們認(rèn)為6-BA與KT配合能有效提高白花懸鉤子叢生芽的誘導(dǎo)率與增殖系數(shù)，效果優(yōu)于單獨(dú)使用的。前人在懸鉤子屬植物的生根培養(yǎng)中均使用1/2MS培養(yǎng)基，使用最多的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是NAA和IBA這兩種生長(zhǎng)素，其劑量范圍較低，通常為0.05-1.0 mg/L NAA、0.05-1.0mg/L IBA。我們通過對(duì)白花懸鉤子組培苗的生根研究發(fā)現(xiàn)，白花懸鉤子的組培苗較容易生根，在營(yíng)養(yǎng)成分減半的MS培養(yǎng)基中添加利于根系生長(zhǎng)的IBA或者NAA均能促進(jìn)其生根，這一結(jié)果也驗(yàn)證了楊鼎元等的研究結(jié)論。

綜合本研究結(jié)果，白花懸鉤子最佳的葉片外植體滅菌方式為2qo NaClO溶液2min+0.1％HgCl2溶液5min，最佳的叢生芽分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+3.0mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 KT+0.5 mg·L-1NAA，最佳的繼代增殖培養(yǎng)基為MS+2.5 mg.L-16-BA+1.5 mg·L-1 KT+0.4 mg·L-1 NAA，最適的生根培養(yǎng)基為1/2MS+1.0 mg·L-1 IBA。白花懸鉤子組培快繁技術(shù)體系的建立既可為白花懸鉤子優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化生產(chǎn)提供技術(shù)支持，又可為懸鉤子屬植物葉片組培快繁體系的建立提供參考依據(jù)。