萬力華,楊從武,鄒大維,譚霖

(黔東南州食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心,貴州 凱里 556011)

油麻血藤Caultsmucunaesempervirentis飲片是貴州省苗族、侗族等習(xí)用中藥飲片。取原藥材(常春油麻藤M(fèi)ucunasempervirensHemsl.的干燥藤莖),凈制,浸潤,切片,曬干,篩去灰屑或取片狀藥材,除去雜質(zhì),加工炮制即得。在貴州分布于黔東南州、黔西南州和黔南州等地。其性味甘、微苦、溫,具有活血調(diào)經(jīng),補(bǔ)血舒筋等功效。用于月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、閉經(jīng)、產(chǎn)后血虛、風(fēng)濕痹痛、四肢麻木、跌撲損傷[1]。成分指標(biāo)為:脂肪酸占1%～10%[2]、總黃酮類占12.43%[3]、酚類、蛋白質(zhì)[4]、七個(gè)成分一致的揮發(fā)油(比較主要的包括3-辛醇、β-紫羅蘭酮等)[5]。我省《貴州省中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003版[1]收錄其藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),而《貴州省中藥飲片炮制規(guī)范》1986年版未對(duì)其收錄,為控制油麻血藤飲片質(zhì)量,本試驗(yàn)對(duì)10批次油麻血藤飲片性狀鑒定;橫切面、粉末顯微特征進(jìn)行鑒定;TLC對(duì)照藥材定性鑒定;參照《中國藥典》測(cè)定水分、總灰分、浸出物含量;UV測(cè)定總黃酮含量研究,為黔產(chǎn)油麻血藤飲片質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 材料與儀器。

1.1 藥材

10批樣品收集于黔東南凱里、黔西南興義等地,經(jīng)黔東南苗族侗族自治州食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心譚霖副主任藥師鑒定,為油麻血藤Caults mucunae sempervirentis飲片,飲片信息見表1。

表1 10批飲片收集信息

1.2 儀器

紫外光度計(jì)UV-2600;萊卡DM500顯微鏡和LAS V3.8顯像系統(tǒng);5L-DK-98-ⅡA型數(shù)控電熱恒溫水浴鍋單列六;DYF-500搖擺式高速中藥粉粹機(jī);XPE205型萬分之一電子天平(梅特勒);玻璃儀器;SK8200HP—型數(shù)控超聲波清洗器(500 W;53 kHz);鼓風(fēng)烘箱。

1.3 材料

蘆丁(中檢院;92.4%;10080-201811;供UV含量測(cè)定用),硅膠G板(青島勝海20170811);甲醇(川東化工試劑公司,AR),氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁,乙酸乙酯(川東化工試劑公司,AR),石油醚(60～90)、環(huán)己烷、甲酸等購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司,均為AR。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒定

本品為橢圓形、長矩圓形或不規(guī)則的厚片(斜切片),厚0.2～2.0 cm。表面極粗糙灰褐色至棕褐色,具橫向疣狀凸起皮孔。切面韌皮部具黑褐色樹脂狀分泌物,灰黃色木質(zhì)部,孔洞狀導(dǎo)管,放射狀整齊排列,韌皮部與木質(zhì)部相間排列呈數(shù)層同心性環(huán),具不規(guī)則分布裂隙,髓部細(xì)小[1]。質(zhì)堅(jiān)韌,氣微,味微澀而甜[1]。見圖1。

圖1 油麻血藤飲片性狀圖

2.2 橫切面鑒定

木栓層由數(shù)列木栓細(xì)胞組成,含晶厚壁細(xì)胞在栓內(nèi)層排列整齊,褐色或棕色物質(zhì)多見,石細(xì)胞散在[1]。中柱鞘為石細(xì)胞和纖維組成的厚壁細(xì)胞環(huán)帶,含草酸鈣方晶并形成晶鞘[1]。維管系統(tǒng)異型,由多數(shù)維管束排列成數(shù)輪同心性環(huán)。韌皮射線寬至10 余列細(xì)胞;分泌細(xì)胞2～11 個(gè)相聚成切向條狀,層狀排列,韌皮纖維束多分布于韌皮部周圍,形成纖維束鞘。形成層不明顯[1]。木射線由非木化薄壁細(xì)胞組成,寬至10余列細(xì)胞;導(dǎo)管形大,多單個(gè)散在,纖維束為晶纖維,多分布于導(dǎo)管周圍,少數(shù)散在于薄壁組織中[1]。髓由大型薄壁細(xì)胞組成,紋孔明顯,環(huán)髓有少數(shù)分泌細(xì)胞及草酸鈣方晶[1],見圖2。

1.木栓層;2.皮層;3.石細(xì)胞群;4.中柱鞘;5.分泌細(xì)胞;6.韌皮射線;7.韌皮部;8.木質(zhì)部;9.木質(zhì)射線;10.導(dǎo)管;11.髓。圖2 橫切面顯微鑒定圖(10×10倍)

2.3 粉末鑒定

粉末為灰棕色。石細(xì)胞淡黃色或黃棕色,呈類圓形、類方形或類三角形,直徑15～75 μm,層紋、孔溝明顯,散在或成群。纖維成束或散在,直徑7～20 μm,孔溝及胞腔明顯,表面具斜紋理。草酸鈣方晶多見,散在。晶纖維較多,成束,周圍薄壁細(xì)胞中含多數(shù)草酸鈣方晶。棕紅色或棕黃色不規(guī)則塊狀分泌物多見。導(dǎo)管較大,多破碎,無色或黃棕色,為具緣紋孔導(dǎo)管。木栓細(xì)胞棕黃色至棕紅色,多角形或類方形,排列緊密。見圖3。

A.石細(xì)胞;B.草酸鈣方晶;C.晶鞘纖維;D.木質(zhì)纖維;E.木栓細(xì)胞;F.導(dǎo)管;G.棕色塊。圖3 粉末顯微鑒定圖(10×40倍)

2.4 薄層鑒定

取樣品粉末約2.0 g,加乙醇40 mL,超聲30 min,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)铀?0 mL溶解,用乙酸乙酯10 mL提取,揮干乙酸乙酯,殘?jiān)蛹状? mL溶解,即得。同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2020版四部 通則0502)試驗(yàn)[6],取樣品溶液5 μL、對(duì)照藥材溶液5 μL,點(diǎn)于硅膠G薄層板上,在石油醚(60～90)-環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(體積比6∶3∶1∶0.2)體系中展開,取出,揮干,1%香草醛硫酸溶液,105 ℃下顯色,見圖4。

1.對(duì)照藥材;2.S1飲片;3.S2飲片;4.S3飲片;5.S4飲片;6.S5飲片;7.S6飲片;8.S7飲片;9.S8飲片;10.S9飲片;11.S10飲片。圖4 樣品及對(duì)照藥材TLC色譜圖

2.5 水分檢查

依照《中國藥典》2020版第四部 通則0832水分測(cè)定法(第二法 烘干法)[6],分別取10批飲片樣品測(cè)定水分。其值7.3%～9.0%,均值為8.1%,見表2。

表2 10批次飲片水分測(cè)定結(jié)果(n=2)

2.6 總灰分檢查

依照《中國藥典》2020版第四部 通則2302[6],分別取10批次飲片樣品測(cè)定總灰分。其值5.5%～7.3%,均值為6.4%,見表3。

表3 10批次飲片總灰分測(cè)定結(jié)果(n=2)

2.7 浸出物檢查

用水作溶劑,按《中國藥典》2020版第四部 通則2201熱浸法[6],取10批次飲片樣品測(cè)定,以干燥品計(jì)算浸出物的含量,其值19.0%～22.1%,均值為20.4%,見表4。

表4 10批次飲片樣品浸出物測(cè)結(jié)果

2.8 含量測(cè)定

2.8.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密稱取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)11.75 mg(蘆丁),用85%甲醇適量,超聲充分溶解為217.14 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.8.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

量取2.6.1項(xiàng)下溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0 mL,各置25 mL量瓶中,各加水至6 mL,加5%亞硝酸鈉溶液1 mL,搖勻,放置6 min[7],加10%硝酸鋁溶液1 mL,搖勻,放置6 min[10],加氫氧化鈉試液10 mL,再加水至刻度,搖勻,放置15 min[7],即得。立即在 510 nm 處測(cè)定各個(gè)溶液的吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[8]。其回歸方程為Y=0.013 794 4X-0.019 471 4,r=0.999 65,在測(cè)定濃度為8.685 6～52.113 6 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,可以進(jìn)行定量分析[12]。

2.8.3 樣品溶液的配制

精密稱取粉末約0.25 g,置具塞錐形瓶,加85%甲醇 100 mL,稱重,超聲30 min,冷卻再稱重,用85%甲醇進(jìn)行補(bǔ)重,搖均勻之后進(jìn)行過濾操作,取續(xù)濾液 5.00 mL置 25 mL 量瓶中,照2.7.2項(xiàng)下方法,從“加水至6 mL”起依法操作,并測(cè)定吸光度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁濃度[9]。

2.8.4 樣品含量測(cè)定

精密稱取10批次飲片樣品粉末各2份,照2.7.3項(xiàng)下依法操作,計(jì)算總黃酮量,10批飲片樣品總黃酮測(cè)定結(jié)果6.2%～9.2%,平均值為8.0%,見表5。

表5 10批次飲片樣品總黃酮含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 水分限度值的確定

10批飲片樣品測(cè)定水分,其值7.3%～9.0%,均值為8.1%,上浮20%,限度值為不得過10.0%。

3.2 總灰分限度值的確定

10批次飲片樣品測(cè)定總灰分,其值5.5%～7.3%,均值為6.4%,上浮20%,限度值為不得過8.0%。

3.3 浸出物限度值的確定

10批次飲片樣品測(cè)定,以干燥品計(jì)算浸出物的含量,其值19.0%～22.1%,均值為20.4%,下浮20%,限度值為不得低于16.0%。

3.4 含量測(cè)定總黃酮限度值的確定

10批飲片樣品總黃酮測(cè)定結(jié)果6.2%～9.2%,均值為8.0%,下否20%,限度值為不得低于6.0%。

4 總結(jié)

通過對(duì)10批次油麻血藤飲片鑒別、檢查和含量測(cè)定研究,可為黔產(chǎn)油麻血藤飲片質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù),本方法可行性強(qiáng),為貴州省地方中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。