厲莉，史碩碩，王鑫，耿可贊，張飛俊，胡婷

（武漢工程大學(xué) 環(huán)境生態(tài)與生物工程學(xué)院，湖北 武漢 430205）

苦丁茶主要由冬青屬植物的葉子制成，已有2 000多年的歷史[1]。苦丁茶含有豐富的多酚、黃酮、精油、三萜等活性物質(zhì)[2]，具有明顯的降血糖、抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗肥胖、保肝等活性[3-4]。結(jié)合酚是通過(guò)化學(xué)共價(jià)鍵、氫鍵和疏水相互作用與細(xì)胞壁組分（如膳食纖維）結(jié)合，經(jīng)溶劑萃取后，再經(jīng)堿性/酸性/酶解從剩余固體殘?jiān)刑崛《肹5-7]。研究表明，堿性水解釋放出來(lái)的結(jié)合酚物質(zhì)的總量要遠(yuǎn)高于酸水解[8-9]。

調(diào)查表明，我國(guó)的糖尿病患者已達(dá)1.3 億人，其中2 型糖尿病是糖尿病患者中患病最多的類(lèi)型之一，也是世界范圍內(nèi)導(dǎo)致死亡和殘疾的主要原因之一[10-11]。食用碳水化合物是維持血糖的主要途徑之一，胃腸道中存在的α-葡萄糖苷酶，能夠催化人們所食用的碳水化合物中的α-1，4 糖苷鍵裂解，從而形成葡萄糖[12-13]。阿卡波糖是臨床上以α-葡萄糖苷酶為靶點(diǎn)的有效降糖藥，但它對(duì)胃腸道有副作用[14-15]，長(zhǎng)期使用該藥物會(huì)導(dǎo)致腹痛腹瀉、腸胃功能紊亂等癥狀[16]。因此，開(kāi)發(fā)具有維持血糖穩(wěn)定作用的天然有效物質(zhì)具有很大的前景[17-19]。已有研究表明，從植物中提取出的結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性顯著[5，20-21]。

目前鮮有苦丁茶結(jié)合酚的提取和降血糖的活性研究，本文主要以苦丁茶為原料，優(yōu)化其結(jié)合酚的提取工藝并研究其對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用，旨在為苦丁茶結(jié)合酚作為健康食品輔料的開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

苦丁茶：市售；大孔樹(shù)脂（AB-8、NKA-9、HPD-100、D101、X-5、ADS-7 和S-8 型）、α-葡萄糖苷酶（50 U/mg）、對(duì)硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（p-nitrophenyl α-Dglucopyranoside，pNPG）：上海源葉生物科技有限公司；十二水合磷酸氫二鈉、十二水合磷酸二氫鈉、碳酸鈉、無(wú)水乙醇、濃鹽酸、福林酚、氫氧化鈉、沒(méi)食子酸（均為分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（RE-2000A）：上海亞榮生化儀器廠(chǎng)；烘箱（PHG-9246A）：上海龍躍儀器設(shè)備有限公司；可見(jiàn)分光光度計(jì)（V-5100）：上海元析儀器有限公司；電子分析天平（ME104E/O2）、pH 計(jì)（EF-20）：梅特勒-托利儀器有限公司；多功能酶標(biāo)儀（Multiskan FC）：賽默飛世爾科技有限公司；真空冷凍干燥機(jī)（LGJ-60A）：上海豫明儀器有限公司；超聲清洗儀（SB25-12DT）：寧波新芝生物科技股份有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 原料預(yù)處理

首先將苦丁茶研磨并過(guò)40 目篩，隨后置于常溫下儲(chǔ)存。取100 g 苦丁茶粉末，并使用50%乙醇溶液進(jìn)行浸提，乙醇溶液與樣品液料比20∶1（mL/g），將混合物裝入燒杯中，隨后在50 ℃超聲波（600 W）中浸提1.6 h，浸提結(jié)束后，抽濾分離濾液和濾渣。將濾渣再次浸提，盡可能除去游離態(tài)結(jié)合酚，收集苦丁茶濾渣并將其完全干燥，于陰涼干燥處室溫保存。

1.3.2 苦丁茶結(jié)合酚的提取單因素試驗(yàn)

取0.5 g 苦丁茶渣，分別以氫氧化鈉濃度、液料比（即氫氧化鈉溶液與苦丁茶渣之比）及提取時(shí)間為因素，以結(jié)合酚含量為指標(biāo)，進(jìn)行單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)。

1.3.2.1 氫氧化鈉濃度的選擇

在液料比20∶1（mL/g）、提取時(shí)間3 h、提取溫度50 ℃條件下，采用超聲輔助提取法，探究不同氫氧化鈉濃度（5、6、7、8、9 mol/L）對(duì)苦丁茶結(jié)合酚含量的影響。

1.3.2.2 液料比的選擇

在氫氧化鈉濃度8 mol/L、提取時(shí)間3 h、提取溫度50 ℃條件下，采用超聲輔助提取法，探究不同液料比[10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1（mL/g）]對(duì)苦丁茶結(jié)合酚含量的影響。

1.3.2.3 提取時(shí)間的選擇

在氫氧化鈉濃度8 mol/L、液料比40∶1（mL/g）、提取溫度50 ℃條件下，采用超聲輔助提取法，探究不同提取時(shí)間（1、2、3、4、5 h）對(duì)苦丁茶結(jié)合酚含量的影響。

1.3.3 響應(yīng)面設(shè)計(jì)及分析

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以氫氧化鈉濃度、液料比、提取時(shí)間作為自變量，以苦丁茶結(jié)合酚含量作為響應(yīng)值，采用三因素三水平的方法進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化，如表1 所示，使用軟件Design Expert.V8.0.6.1 進(jìn)行分析。

表1 響應(yīng)面因素水平設(shè)計(jì)Table 1 Optimized independent variables and their coded and actual values

表2 底物和α-葡萄糖苷酶溶液濃度Table 2 Substrate and α-glucosidase solution concentrations

1.3.4 結(jié)合酚含量測(cè)定

采用福林酚法測(cè)結(jié)合酚含量。首先稱(chēng)取沒(méi)食子酸0.10 g，配制溶液為1.0 mg/mL。分別取0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 配制完成的沒(méi)食子酸溶液于反應(yīng)管中，補(bǔ)加純水至10 mL；分別取1 mL 沒(méi)食子酸（空白為1 mL 純水）于試管中，加入福林酚0.5 mL，搖勻，反應(yīng)5 min；加1.5 mL 20% Na2CO3，并添加7 mL 純水，搖勻，室溫下放置1 h（黑暗中），使用分光光度計(jì)于765 nm下測(cè)定吸光值。

1.3.5 結(jié)合酚的純化

參考朱潔等[22]的方法并稍加修改。選取AB-8、NKA-9、HPD-100、D101、X-5、ADS-7 和S-8 型7 種常用的大孔樹(shù)脂，分別稱(chēng)1 g，并置于相同規(guī)格大小的錐形瓶中。將凍干的苦丁茶結(jié)合酚粉末用純水復(fù)溶，并測(cè)定其結(jié)合酚含量，將該溶液的結(jié)合酚濃度記為C0（mg/mL）。取20 mL（記為V1）溶液倒入錐形瓶中，將錐形瓶放置在搖床中，180 r/min、30 ℃下振搖24 h，測(cè)定濾液的結(jié)合酚含量，將濾液的結(jié)合酚濃度記為C1（mg/mL）。按照公式（1）計(jì)算大孔樹(shù)脂對(duì)苦丁茶結(jié)合酚吸附率（A，%）。

將濾干的樹(shù)脂用純水洗凈并濾干，將樹(shù)脂重新放入洗凈烘干的錐形瓶中，加入20 mL 配制好的60%乙醇溶液，180 r/min、30 ℃下振搖24 h，60%乙醇洗脫液體積記為V2（mL），測(cè)定溶液的結(jié)合酚濃度，記為C2（mg/mL）。大孔樹(shù)脂解吸率（D，%）按公式（2）計(jì)算。

1.3.6 苦丁茶結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用

1.3.6.1 酶活力的測(cè)定

參考Tian 等[23]和張海龍[24]的方法并稍加修改。采用96 孔板，將20 μL 2.5 mmol/L 的對(duì)硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷和20 μL 0.6 U/mL 的α-葡萄糖苷酶添加到120 μL 的磷酸緩沖液（pH6.8，0.1 mol/L）中，于37 ℃下孵育20 min。加入80 μL 濃度為0.2 mol/L Na2CO3終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀在405 nm 處測(cè)定吸光值。以20 μL 的磷酸緩沖液代替酶作為空白對(duì)照。

1.3.6.2 最適酶濃度的選擇

參考張永軍等[25]的方法并稍加修改。加入適量的α-葡萄糖苷酶，測(cè)定酶反應(yīng)初速率為△A/min，使其速率介于0.03～0.25 之間。加入底物pNPG 后開(kāi)始計(jì)時(shí)，在反應(yīng)進(jìn)行1 min 后，加入Na2CO3以停止反應(yīng)，隨后使用酶標(biāo)儀測(cè)出反應(yīng)溶液的吸光值，吸光值表示酶與底物反應(yīng)后，生成對(duì)硝基苯基（p-nitrophenyl，pNP）在405 nm 下的吸光值。

1.3.6.3 不同濃度的結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶半抑制濃度的確定

將苦丁茶結(jié)合酚配制為0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mg/mL，取20 μL 的苦丁茶結(jié)合酚與20 μL 的α-葡萄糖苷酶反應(yīng)10 min，加入20 μL 的pNPG 于37 ℃下繼續(xù)孵育20 min，反應(yīng)結(jié)束后立即加入80 μL 的Na2CO3終止反應(yīng)。記測(cè)試組的吸光值為AA；以20 μL 的磷酸緩沖液代替酶作為測(cè)試空白組，記Aa；以20 μL 的磷酸緩沖液代替樣品作為對(duì)照組，記AB；以20 μL 的磷酸緩沖液代替樣品，并以20 μL 的磷酸緩沖液代替酶作為空白組，記Ab。使用酶標(biāo)儀于405 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值，并且根據(jù)下列公式計(jì)算抑制率（X，%）[26]。

1.3.6.4 苦丁茶結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制類(lèi)型的研究

參考Xiong 等[27]的方法并稍作修改。選取濃度為2 mg/mL 苦丁茶結(jié)合酚，并測(cè)定酶濃度分別為0.2、0.6、1.0、1.6 U/mL 和2.4 U/mL 的酶反應(yīng)初速率。抑制組添加結(jié)合酚溶液，無(wú)抑制組則用純水代替樣品溶液，利用分光光度計(jì)進(jìn)行吸光值的測(cè)定。以酶濃度（U/mL）為橫坐標(biāo)，酶解速率V 為縱坐標(biāo)作圖。依照動(dòng)力學(xué)圖的特征，分析結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制類(lèi)型。

1.3.6.5 可逆性抑制類(lèi)型的研究

在反應(yīng)體系中，首先加入2.5 mg/mL 和5.0 mg/mL的pNPG，接著加入1.2 U/mL 的α-葡萄糖苷酶，最后加入濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.5 mg/mL 的結(jié)合酚溶液，使用酶標(biāo)儀測(cè)出反應(yīng)的吸光值，并由此求出反應(yīng)速率。按Dixon 的雙倒數(shù)作圖法作圖，橫坐標(biāo)為結(jié)合酚濃度（mg/mL），縱坐標(biāo)為酶反應(yīng)速率的倒數(shù)1/V，根據(jù)圖確定α-葡萄糖苷酶的可逆性抑制的類(lèi)型。

1.4 數(shù)據(jù)處理

圖像采用Origin 和Design-Expert.V8.0.6.1 繪制，利用SPSS 軟件處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)并分析數(shù)據(jù)顯著性，當(dāng)P＜0.05 表示顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦丁茶結(jié)合酚單因素試驗(yàn)結(jié)果

各因素對(duì)苦丁茶結(jié)合酚含量的影響見(jiàn)圖1。

圖1 苦丁茶結(jié)合酚提取單因素結(jié)果Fig.1 Single factor results of the extraction of Kuding tea binding polyphenols

由圖1A 可知，氫氧化鈉濃度在5.0～8.0 mol/L 時(shí)，結(jié)合酚含量隨著氫氧化鈉濃度的增加而增加，當(dāng)濃度為8.0～9.0 mol/L 時(shí)，結(jié)合酚含量隨著氫氧化鈉濃度的增加而減少。可能是由于堿濃度過(guò)高，導(dǎo)致酚基發(fā)生氧化反應(yīng)，從而破壞結(jié)合酚的結(jié)構(gòu)，使其無(wú)法被提取。因此，選取7、8、9 mol/L 這3 個(gè)濃度進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化。由圖1B 可知，液料比為10∶1～40∶1（mL/g）時(shí)，結(jié)合酚含量隨著溶劑量的增加而增加，而在液料比為40∶1～50∶1（mL/g）時(shí)，結(jié)合酚含量隨著溶劑量的增加而減少?？赡苁怯捎谌芙舛鹊南拗?，提取液對(duì)結(jié)合酚的溶解能力有限，當(dāng)達(dá)到飽和狀態(tài)時(shí)，溶液中無(wú)法再溶解更多的結(jié)合酚，導(dǎo)致提取量降低。因此，選取30∶1、40∶1、50∶1（mL/g）3 個(gè)水平進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)。圖1C中，提取時(shí)間在1～4 h 時(shí)，結(jié)合酚含量隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，而在4～5 h 時(shí)，結(jié)合酚含量隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而減少?？赡苁怯捎诮Y(jié)合酚的降解，在提取過(guò)程中，隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，結(jié)合酚可能發(fā)生降解或轉(zhuǎn)化，生成其他化合物，從而導(dǎo)致提取量降低。因此，選取3、4、5 h 3 個(gè)水平進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)。

2.2 苦丁茶結(jié)合酚提取工藝的響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)

2.2.1 試驗(yàn)結(jié)果及方差分析

響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Results of response surface tests

由表3 可知，苦丁茶結(jié)合酚含量二次多項(xiàng)回歸方程為Y=32.06-0.21A+0.85B+0.63C+0.64AB+0.86AC-0.24BC-4.61A2-2.25B2-2.78C2。

對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 回歸方程各項(xiàng)方差分析Table 4 Variance analysis of regression equations

由表4 可知，該模型P<0.000 1，屬于極顯著差異，失擬差為0.568 3，P>0.05，即失擬差不顯著，且R2=0.989 1，能夠證明模型的可靠性和準(zhǔn)確性。一次項(xiàng)A影響不顯著，B 影響極顯著，C 影響顯著；交互項(xiàng)AB、AC 對(duì)響應(yīng)值影響顯著，BC 不顯著；二次項(xiàng)A2、B2、C2均對(duì)響應(yīng)值影響極顯著。由此得知響應(yīng)值會(huì)受到多個(gè)因素的相互影響。根據(jù)F 值，各因素對(duì)苦丁茶結(jié)合酚含量的影響順序?yàn)橐毫媳龋咎崛r(shí)間＞氫氧化鈉濃度。

2.2.2 苦丁茶結(jié)合酚提取工藝的響應(yīng)面圖分析

變量的等高線(xiàn)圖和三維圖及其交互作用見(jiàn)圖2。

圖2 變量的等高線(xiàn)圖和三維圖及其交互作用Fig.2 Contour and 3D plots of variables and their interactions

由圖2 可知，氫氧化鈉濃度與液料比之間立體圖陡峭，交互作用顯著；氫氧化鈉濃度與提取時(shí)間之間立體圖陡峭，交互作用顯著；液料比與提取時(shí)間之間立體圖較平緩，與統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)一致，交互作用不顯著。

根據(jù)響應(yīng)面回歸方程，預(yù)測(cè)出苦丁茶結(jié)合酚的最佳提取工藝條件為氫氧化鈉濃度8.54 mol/L、液料比42.56∶1（mL/g）、提取時(shí)間4.19 h。在此條件下，苦丁茶結(jié)合酚的含量為30.84 mg/g。結(jié)合實(shí)際優(yōu)化提取工藝條件為氫氧化鈉濃度8.5 mol/L、液料比43∶1（mL/g）、提取時(shí)間4.2 h。重復(fù)3 次試驗(yàn)，最終得到苦丁茶結(jié)合酚的含量為（29.8±2.0）mg/g。實(shí)際測(cè)得的結(jié)合酚含量與預(yù)測(cè)值極為接近，進(jìn)一步驗(yàn)證了模型的準(zhǔn)確性。

2.3 大孔樹(shù)脂篩選結(jié)果

不同類(lèi)型大孔樹(shù)脂的吸附率和解吸率見(jiàn)圖3。

圖3 不同類(lèi)型大孔樹(shù)脂的吸附率和解吸率Fig.3 Adsorption and resolution rates of different types ofmacroporous resins

由圖3 可知，不同類(lèi)型的大孔樹(shù)脂對(duì)苦丁茶渣結(jié)合酚吸附率及解吸率的影響均不同。從吸附率來(lái)看，AB-8 大孔樹(shù)脂的吸附率最高，NKA-9、HPD-100、D101、X-5 大孔樹(shù)脂吸附相近，而ADS-7 大孔樹(shù)脂吸附率最低。從解吸率來(lái)看，AB-8 大孔樹(shù)脂的解吸率最高，NKA-9、D101 大孔樹(shù)脂解吸率次之，其他大孔樹(shù)脂的解吸率較低。綜上，選擇AB-8 大孔樹(shù)脂純化苦丁茶結(jié)合酚。

2.4 α-葡萄糖苷酶最適酶濃度的測(cè)定

酶濃度過(guò)高或者過(guò)低都不利于建立科學(xué)的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)方程，因此要使測(cè)定的反應(yīng)速率（以△A/min 表示）在0.03～0.25[25，28]。測(cè)定α-葡萄糖苷酶在7 min 內(nèi)的反應(yīng)動(dòng)力進(jìn)程曲線(xiàn)，結(jié)果如圖4 所示。

圖4 α-葡萄糖苷酶不同濃度下的反應(yīng)進(jìn)程曲線(xiàn)Fig.4 Reaction progression curves of α-glucosidase at different concentrations

由圖4 看出，酶濃度增大時(shí)，酶反應(yīng)的初始速率隨之升高，計(jì)算3 min 內(nèi)的酶反應(yīng)速率，即用縱坐標(biāo)值/時(shí)間，當(dāng)酶濃度在0.6 U/mL 及其以上時(shí)，反應(yīng)的初始速率為0.03～0.25，選取酶濃度0.6 U/mL 進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.5 結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的半抑制濃度

不同濃度的結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率見(jiàn)圖5。

圖5 不同濃度的結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率Fig.5 Inhibition rates of α-glucosidase by different concentrations of binding polyphenols

由圖5 可以看出，隨著苦丁茶結(jié)合酚的濃度增大，其抑制率也增大，這表明結(jié)合酚活性成分含量會(huì)影響α-葡萄糖苷酶抑制效果。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果可以計(jì)算出苦丁茶結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的半抑制濃度IC50為1.90 mg/mL。

2.6 結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制類(lèi)型

抑制劑對(duì)酶的抑制類(lèi)型分為可逆抑制和不可逆抑制，當(dāng)在測(cè)定酶活力時(shí)，所加入的體系中不存在抑制劑，其速率直線(xiàn)通過(guò)原點(diǎn)；當(dāng)存在可逆抑制劑時(shí)，其速率直線(xiàn)通過(guò)原點(diǎn)且斜率略低；當(dāng)存在不可逆抑制劑時(shí)，其速率直線(xiàn)不通過(guò)原點(diǎn)。結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)如圖6 所示。

圖6 結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)Fig.6 Inhibition kinetics of α-glucosidase by binding polyphenols

2.7 可逆性抑制類(lèi)型的研究

可逆性抑制類(lèi)型有3 種，分為競(jìng)爭(zhēng)性、非競(jìng)爭(zhēng)性、混合性抑制類(lèi)型。已經(jīng)確定抑制機(jī)理時(shí)，選取兩個(gè)底物濃度，采用Dixon 作圖法作圖，探究苦丁茶結(jié)合酚濃度、底物濃度與酶解速率之間的關(guān)系，確定抑制類(lèi)型和抑制常數(shù)。以結(jié)合酚濃度為橫坐標(biāo)軸，以1/V（V 為酶解速率）為縱坐標(biāo)軸，兩底物濃度得到的兩條直線(xiàn)相交于橫坐標(biāo)軸則為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制，相交但不交于橫坐標(biāo)屬于競(jìng)爭(zhēng)性抑制，平行則為反競(jìng)爭(zhēng)性抑制。交點(diǎn)對(duì)應(yīng)的橫坐標(biāo)絕對(duì)值為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制常數(shù)Ki。結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的可逆性抑制雙倒數(shù)圖見(jiàn)圖7。

圖7 結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的可逆性抑制雙倒數(shù)圖Fig.7 Reversible inhibition of α-glucosidase by binding polyphenols

由圖7 可知，抑制類(lèi)型為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制，通過(guò)計(jì)算得出Ki為0.60 mg/mL。

3 結(jié)論

本文分析了氫氧化鈉濃度、液料比和提取時(shí)間3個(gè)因素對(duì)苦丁茶結(jié)合酚含量的影響，并且探究了不同類(lèi)型的大孔樹(shù)脂對(duì)苦丁茶結(jié)合酚的吸附效果，此外，研究了苦丁茶結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用。結(jié)果表明，苦丁茶結(jié)合酚最佳工藝參數(shù)為氫氧化鈉濃度8.5 mol/L、液料比43∶1（mL/g）、提取時(shí)間4.2 h，此工藝條件下，測(cè)得結(jié)合酚含量為（29.8±2.0）mg/g；7 種不同類(lèi)型的大孔樹(shù)脂中，AB-8 大孔樹(shù)脂對(duì)苦丁茶結(jié)合酚的吸附率和解吸率最高；苦丁茶結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用明顯，其半抑制濃度為1.90 mg/mL。分析苦丁茶結(jié)合酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的反應(yīng)動(dòng)力曲線(xiàn)圖，得知其抑制類(lèi)型為可逆性非競(jìng)爭(zhēng)性抑制，抑制常數(shù)Ki 為0.60 mg/mL?？喽〔杞Y(jié)合酚易于提取且成本較低，可作為天然α-葡萄糖苷酶抑制劑，具有應(yīng)用前景。本研究對(duì)苦丁茶結(jié)合酚進(jìn)行研究，優(yōu)化了苦丁茶結(jié)合酚的提取條件，揭示了其對(duì)α-葡萄糖苷酶的明顯抑制作用，證明苦丁茶中不可萃取結(jié)合酚的可利用價(jià)值。