邢家溧，李 楊，鄭睿行，徐曉蓉，毛玲燕，胡 陵，沈 堅，張書芬，承 海*

（1 寧波市產(chǎn)品食品質(zhì)量檢驗研究院（寧波市纖維檢驗所） 浙江寧波 315048 2 浙江萬里學(xué)院生物與環(huán)境學(xué)院 浙江寧波 315100 3 寧波工程學(xué)院理學(xué)院 浙江寧波 315211 4 浙江方圓檢測集團(tuán)股份有限公司 杭州 310013）

隨著人們生活水平的提高，在物質(zhì)生活基本滿足的當(dāng)下，人們對營養(yǎng)健康的關(guān)注度日益上升，開始追求更高品質(zhì)的生活。水產(chǎn)品因較高的蛋白質(zhì)含量，較低的脂肪比例以及含有較多的人體必需氨基酸等特點(diǎn)[1]，而深受廣大消費(fèi)者的喜愛。當(dāng)前國內(nèi)外對水產(chǎn)品的需求量逐年提升[2]。其中牡蠣、扇貝、魷魚和貽貝等軟體類水產(chǎn)品是營養(yǎng)價值非常高的優(yōu)質(zhì)食品，作為高生物價的蛋白、脂肪和脂溶性維生素來源，在人類的營養(yǎng)供給方面具有重要作用。它們生活于水底泥沙中或附著在水中外物上，亦或用足絲附著在淺海巖生活，為濾食性生物，以硅藻、細(xì)小的浮游動物和有機(jī)碎屑等為主要食料，因特殊的生活環(huán)境及生活習(xí)性，故軟體類水產(chǎn)品相比于魚類和甲殼類被污染的風(fēng)險更高。張明月等[3]對市場上常見水產(chǎn)品進(jìn)行食用安全風(fēng)險分析，其中軟體類水產(chǎn)品的污染情況較嚴(yán)重。對軟體類水產(chǎn)品中酚類化合物檢測方法的研究與開發(fā)具有重要的意義。

酚類化合物以毒性大、用途廣、污染程度深，且可長期殘留于水和土壤環(huán)境中等特點(diǎn)而備受研究者的關(guān)注。環(huán)境中的酚類化合物主要來自煤焦油、塑料、染料、藥品、殺菌劑和防腐劑等產(chǎn)品，在生產(chǎn)過程中通過直接排放或以工業(yè)廢水的形式排放到環(huán)境中。土壤及水環(huán)境被酚類化合物污染后，一些酚類可以吸附在土壤中或變成溶解物殘留在水環(huán)境和土壤中。酚類化合物不僅會直接危害人體健康，還會通過食物鏈進(jìn)入人體內(nèi)并產(chǎn)生富集現(xiàn)象，進(jìn)而對人體的健康產(chǎn)生巨大的威脅。

然而，目前，對酚類化合物的研究主要集中在環(huán)境或水。例如，Kamal 等[4]使用固相萃取液相色譜法對木屑滲濾液中的酚類化合物進(jìn)行定量。趙開勇[5]利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對環(huán)境中的酚類化合物進(jìn)行定量分析。Sghaier 等[6]開發(fā)了一種通過固相萃取、衍生化和氣相色譜-質(zhì)譜法測定水中酚類化合物的方法。Padilla 等[7]開發(fā)了一種從廢水中同時提取13 種酚類化合物的方法。王斌[8]使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測烘焙食品和原材料中的雙酚污染物。雖然軟體類水產(chǎn)品中酚類化合物的檢測方法也有一些報道，但是其檢測的酚類化合物種類單一、數(shù)量較少，且大多需要衍生化等繁瑣的前處理，耗時較長，不能滿足水產(chǎn)品中酚類物質(zhì)日常檢測的要求。如黃會等[9]使用凝膠色譜結(jié)合氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測烏賊中3 種酚類化合物，該檢測方法雖涉及雙酚A、烷基酚等酚類化合物，但可同時檢測的酚類物數(shù)量較少，且在前處理過程中需要衍生，這極大地降低了檢測效率。徐英江等[10]同樣使用凝膠色譜結(jié)合氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水產(chǎn)品中溴酚類物質(zhì)，雖然酚類物質(zhì)種類有所提高，但是此處檢測均為同一種類溴酚，不能滿足日常水產(chǎn)品酚類化合物多樣化檢測。鐘惠英等[11]開發(fā)了一種同時檢測水產(chǎn)品中19 種酚類物質(zhì)的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，可同時檢測的酚類物質(zhì)數(shù)量得到顯著提高，然而，該方法使用液液萃取，不僅耗時費(fèi)力，而且會消耗大量的有機(jī)試劑，不能滿足日常水產(chǎn)品的快速檢測。

針對我國當(dāng)前軟體類水產(chǎn)品中18 種酚類化合物同時檢測的方法缺失，本研究擬開發(fā)一種方便、快速、靈敏度高且具有良好穩(wěn)定性的，能同時檢測軟體類水產(chǎn)品中18 種酚類化合物的方法，該方法的建立對于保障水產(chǎn)品的消費(fèi)安全等均具有重要的意義。

1 試驗方法

1.1 儀器、試劑與材料

TSQ 8000 Evo 氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀、TG-5MS 毛細(xì)管色譜柱（30m 色譜柱）、ST8高速離心機(jī)，美國Thermo Fisher Scientific 公司；Vortex 3 自動漩渦混合器，德國IKA 公司；Milli-Q Academic 超純水儀，美國Millipore 公司；KQ-500E 超聲波清洗儀，中國寧波海曙科盛超聲設(shè)備有限公司；VORTEX 1 多功能渦旋混合器，德國IKA 公司；TURBOVAP 96 多功能全自動氮吹濃縮儀，瑞典Biotage 公司。

試驗用的軟體類（魷魚、扇貝、牡蠣、貽貝、縊蟶、海參），購于寧波市江北區(qū)路林市場。乙腈、丙酮，色譜純，購自德國Merck 公司；正己烷，分析純，購自中國天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；二氯甲烷，色譜純，購自中國江蘇永華化學(xué)科技有限公司；無水硫酸鎂、氯化鈉，分析純，購自中國國藥化學(xué)試劑有限公司；十八烷基甲硅烷基（C18）、中性氧化鋁（AL-N）、Z-Sep+，購自中國上海安譜實驗科技股份有限公司。

辛基酚（OP），購自北京百靈威科技有限公司；雙酚A（BPA），購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；2-溴苯酚（2-BP）、4-溴苯酚（4-BP）、2，4-二溴苯酚（2，4-DBP）、2，6-二溴苯酚（2，4-DBP）、2，4，6-三溴苯酚（2，4，6-TBP）、2-硝基酚（2-Nitrophenol）、4-甲基-2-硝基酚（4-Methyl-2-nitrophenol）、3-甲基-4-硝基酚（3-Methyl-4-nitrophenol）、2-硝基-3-甲基苯酚（3-Methyl-2-nitrophenol）、2，6-二甲基-4-硝基酚（2，6-Dimethyl-4-nitrophenol）、4-硝基酚（4-Nitrophenol）、3-硝基酚（3-Nitrophenol），購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；6-硝基間甲酚（5-Methyl-2-nitrophenol），購自上海麥克林生化科技有限公司；2，4-二硝基苯酚（DNP）、4，6-二硝基鄰甲苯酚（2-Methyl-4，6-dinitrophenol）、壬基酚（NP），購自上海安譜實驗科技股份有限公司。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取18 種酚類標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg（精確至0.01 mg），分別用甲醇定容至10 mL，搖勻，配制成1 mg/mL 的儲備液，于4 ℃冰箱中保存、備用。

分別準(zhǔn)確吸取10 mL 2，4-二硝基苯酚、4-硝基酚、4，6-二硝基鄰甲苯酚、3-甲基-4-硝基酚4種酚類儲備液和1 mL 其余14 種酚類儲備液于10 mL 容量瓶中，混合均勻后用甲醇稀釋且定容至刻度，搖勻，配制成10/100 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，并置于4 ℃冰箱中密封保存，備用。（其中2，4-二硝基苯酚、4-硝基酚、4，6-二硝基鄰甲苯酚、3-甲基-4-硝基酚4 種酚類為100 μg/mL，其余酚類為10 μg/mL）。

1.3 樣品的制備及其前處理

提取：稱取粉碎后的軟體類樣品10 g，置于50 mL 塑料離心管中，添加2 mL 超純水和10 mL乙腈，渦旋分散40 s，隨后，向管中添加2 g NaCl和3 g MgSO4，渦旋振蕩5 min，然后超聲10 min，高速離心5 min。

凈化：收集上清液至裝有305 mg C18、230 mg Z-Sep+、200 mg A-N 的15 mL 離心管中。渦旋振蕩約10 min 后，取5 mL 上清液，氮吹濃縮至約0.8 mL，乙腈定容至1 mL。最后，經(jīng)有機(jī)濾膜過濾，用GC-MS/MS 進(jìn)行測定。

1.4 儀器分析條件

GC 條件：進(jìn)樣口溫度為260 ℃；載氣為高純氦（純度≥99%），流速1.2 mL/min。程序升溫條件：初始柱溫70 ℃，維持1 min，然后以8 ℃/min 升至160 ℃，再以3 ℃/min 升至200 ℃，最后以40 ℃/min 升至300 ℃，保持3 min；進(jìn)樣模式為不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為1 μL。

MS 條件：電子轟擊（EI）離子源；離子源溫度為240 ℃；傳輸線溫度為250 ℃；電子能量：70 eV；溶劑延遲：10 min；選擇離子監(jiān)測（SIM）方式。監(jiān)測特征離子見表1。

表1 18 種酚類化合物的保留時間、定量離子和定性離子Table 1 Retention time，quantitative ion and qualifier ion of 18 phenolic pollutants

1.5 統(tǒng)計方法及數(shù)據(jù)處理

使用儀器自帶的軟件Trace Finder SP1GQ計算各目標(biāo)物的方法檢出限，利用該軟件得到各酚類化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)系數(shù)。處理后的數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，作圖采用Origin 8.6 軟件，響應(yīng)面分析使用Design-Expert.11.1 軟件。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

試驗初期，為了節(jié)省初期調(diào)試每一種目標(biāo)化合物的最佳質(zhì)譜參數(shù)時間，在調(diào)試的過程中，氣相條件設(shè)置比較簡單，進(jìn)樣口溫度260 ℃，迅速升溫，方便快速將酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)品吹出從而進(jìn)入質(zhì)譜分析。分別取18 種酚類單標(biāo)，采用全掃描模式進(jìn)樣，質(zhì)荷比掃描范圍為50～350，通過各個目標(biāo)物的峰質(zhì)譜譜圖與儀器自帶譜庫進(jìn)行比對，初步確定18 種酚類化合物對應(yīng)的特征性定量離子及其保留時間，找出一到兩個豐度最高的離子碎片，以待后續(xù)優(yōu)化，如圖1 所示。

圖1 18 種酚類化合物的總離子流色譜圖Fig.1 Total ion chromatograms of 18 phenolic pollutants

在此基礎(chǔ)上，本試驗采用SIM 模式掃描分析樣品中的目標(biāo)酚類化合物，該模式只對待測組分物質(zhì)離子信號進(jìn)行定量定性采集，很大程度上提高了對目標(biāo)化合物的檢測靈敏度，減少了雜質(zhì)的干擾，從而使試驗結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。如圖1 所示，18 種酚類目標(biāo)物出峰良好，且都能較好地分離，響應(yīng)值也較高。

2.2 樣品前處理的優(yōu)化

2.2.1 提取劑種類及其體積的選擇 不同的提取溶劑對目標(biāo)物的提取效果不同，此外，使用不同的提取溶劑產(chǎn)生的雜質(zhì)也會不同，而這些雜質(zhì)會干擾后續(xù)的GC-MS/MS 檢測[12]，因此，選擇合適的提取溶劑是提取復(fù)雜基質(zhì)體系中酚類化合物的關(guān)鍵。本試驗考察了4 種常作為提取劑的有機(jī)溶劑（二氯甲烷、乙腈、丙酮、正己烷）對酚類化合物回收率的影響，結(jié)果如圖2 所示。

圖2 不同提取溶劑對18 種酚類化合物回收率的影響Fig.2 Effects of different extraction solvents on the recoveries of 18 phenolic pollutants

通過試驗結(jié)果可以看出，丙酮和正己烷作提取劑時，酚類化合物回收率分別為61.3%～83.9%和63.0%～91.5%，均低于乙腈和二氯甲烷。二氯甲烷和乙腈提取效果相當(dāng)，同時經(jīng)顯著性分析后發(fā)現(xiàn)18 種酚類化合物回收率無顯著性差異（P＞0.05）。但與乙腈相比，二氯甲烷沸點(diǎn)較低，在試驗操作過程中易揮發(fā)，且平行性差，不利于大批量實際樣本的檢出，此外揮發(fā)的二氯甲烷不僅會損害實驗者的健康，同時還易污染檢測器和色譜柱，從而降低了柱效和檢測靈敏度[13]。乙腈作為提取溶劑時，更易通過鹽析與水相分層[14]，從而最大限度地提取酚類化合物，而且乙腈沉淀蛋白效果好，提取的色素、脂肪等非極性雜質(zhì)含量較少，基質(zhì)干擾影響小[15]，綜上所述，本試驗最終選擇乙腈作為提取溶劑。

同時，本試驗還考察了提取劑用量（7～10 mL）對試驗結(jié)果的影響，結(jié)果顯示，10 mL 乙腈足以完全提取基質(zhì)中的目標(biāo)物（各酚類化合物平均加標(biāo)回收率達(dá)到最優(yōu)，在90.6%～108.6%之間），如果提取溶劑用量過多，基質(zhì)中共萃取干擾物往往也會不斷增多，從而導(dǎo)致基質(zhì)效應(yīng)也不斷增強(qiáng)[16]，因此，本試驗最終選擇提取劑的用量為10 mL。

2.2.2 鹽析劑的選擇 使用氯化鈉作為鹽析劑時，各待測物提取回收率見表2，整體酚類化合物的回收率隨著氯化鈉添加量的增加而增加，當(dāng)氯化鈉添加量達(dá)到2 g 時，回收率基本保持不變。部分酚類化合物如4-硝基酚、2，4-二硝基苯酚和4，6-二硝基鄰甲苯酚，在NaCl 為3 g 時有下降的趨勢，并隨著氯化鈉添加量的增加，回收率不斷降低，這說明過量的氯化鈉會使部分酚類化合物回收率降低。其中當(dāng)氯化鈉添加量為2 g 時，回收率最高的酚類化合物種類相對最多，其回收率為80.8%～100.4%，因此，本試驗選擇2 g 氯化鈉作為鹽析劑。

表2 不同量鹽析劑對18 種酚類化合物回收率的影響Table 2 Effect of different amount of salting out agent on the recovery of 18 phenolic pollutants

在選擇2 g 氯化鈉為鹽析劑的基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步考察加入除水劑無水MgSO4對沉淀蛋白的效果。試驗結(jié)果見表3，從試驗結(jié)果中可以看出，在添加一定的吸水劑無水MgSO4后，除6-硝基間甲酚、2，6-二甲基-4-硝基酚之外的個別硝基酚的回收率變化不明顯外，酚類化合物總體回收率均有所提高，由此可以得出，單獨(dú)使用鹽析劑效果不如混合搭配使用除水劑效果好。但隨著無水MgSO4用量的增加，酚類化合物回收率在逐漸下降，這可能是因為隨著無水MgSO4量的增多，在除水的過程中放出大量的熱，導(dǎo)致提取劑揮發(fā)，從而降低了酚類化合物的提取效果，進(jìn)而影響了測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，這與劉勇濤等[17]得出的結(jié)果一致。當(dāng)無水硫酸鎂添加量為3 g 時，酚類化合物達(dá)到峰值的種類相對最多，因此，最終選擇3 g 無水硫酸鎂作為除水劑。

表3 添加無水硫酸鎂對18 種酚類化合物回收率的影響Table 3 Effect of adding anhydrous magnesium sulfate on the recovery of 18 phenolic pollutants

2.2.3 凈化劑的選擇 本試驗采用響應(yīng)面法研究分析不同凈化劑用量及其不同組合對蝦肉的凈化效果，根據(jù)響應(yīng)曲面法（RSM）原理，使用Design-Expert 軟件中心復(fù)合設(shè)計（CCD）進(jìn)行了三因素和三水平試驗，以對比3 種凈化劑對酚類化合物回收率的影響，除去極端值（＜70%和＞110%）的各酚類化合物的均值為響應(yīng)值。以酚類化合物回收率為指標(biāo)，分別考察單獨(dú)使用C18、A-N、GCB 所對應(yīng)的凈化效果，分別考察C18 用量（100，200，300，400，500，600 mg），A-N 用量（100，200，300，400，500，600 mg），GCB 用量（20，40，60，80，100，120 mg）對回收率的影響，試驗設(shè)置3 組平行，結(jié)果取平均值。

通過以上單因素實驗確定單一凈化劑C18、Z-Sep+、A-N 的最佳用量分別為300，200，200 mg，然后采用Design-Expert 軟件建立相應(yīng)回歸模型，最后根據(jù)響應(yīng)曲面法確定各凈化劑之間交互作用以及整體對酚類化合物的影響作用。試驗結(jié)果顯示，單一凈化劑最終確定了3 個不同的水平，如表4 所示。

表4 Box-Benhnken 響應(yīng)面試驗設(shè)計因素水平表Table 4 Box-Benhnken experimental factor level table

兩因素交互作用的響應(yīng)面結(jié)果如圖3～圖5所示。從圖中可以看出，A、B 兩因素的等高線趨于橢圓且最密集，曲面較陡峭，表明C18 添加量和Z-Sep+添加量交互作用最強(qiáng)，對酚類化合物回收率響應(yīng)影響較大；A、C 兩因素的等高線趨于圓，曲面最陡峭，表明C18 添加量和A-N 添加量交互作用最弱，對酚類化合物回收率響應(yīng)影響最大；B、C兩因素的等高線趨于橢圓，曲面較平緩，表明ZSep+添加量和A-N 添加量交互作用較強(qiáng)，對酚類化合物回收率響應(yīng)影響相對最小。

圖3 Z-Sep+和C18 交互作用的響應(yīng)面圖及等高線圖Fig.3 A-response surface and contour plot of interaction between Z-Sep+ and C18

圖4 A-N 和C18 交互作用的響應(yīng)面圖及等高線圖Fig.4 A-response surface and contour plot of interaction between A-N and C18

圖5 Z-Sep+和A-N 交互作用的響應(yīng)面圖及等高線圖Fig.5 A-response surface and contour plot of interaction between Z-Sep+ and A-N

利用模型對凈化劑種類及用量進(jìn)行優(yōu)化，得到酚類化合物凈化劑最佳搭配為C18 用量為305.31 mg，Z-Sep+用量為232.60 mg，A-N 用量為196.69 mg，為方便操作，將凈化劑搭配優(yōu)化為：C18 用量為305 mg，Z-Sep+用量為230 mg，A-N 用量為200 mg。按照此凈化條件，進(jìn)行3 次驗證，酚類化合物實際平均回收率為107.38%，與預(yù)測值誤差僅為1.1%，表明模型有效可靠。

2.3 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)（Matrix Effect，ME）是由目標(biāo)化合物與基質(zhì)中的共提干擾物競爭電離所致。非目標(biāo)化合物會在色譜分離過程中抑制信號或提高待測組分的電離效率[18]。對于肉制品這種高脂肪、高蛋白等復(fù)雜基質(zhì)的樣品，其基質(zhì)效應(yīng)會影響酚類化合物的電離，引起信號增強(qiáng)或抑制，從而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性[19]。因此在方法建立時均需要考察基質(zhì)效應(yīng)對檢測結(jié)果的影響，并且采取有效的措施減弱或消除它的影響是非常有必要的?；|(zhì)效應(yīng)與很多因素有關(guān)，例如儀器種類、試驗環(huán)境差異、樣品濃度等都會產(chǎn)生不同的基質(zhì)效應(yīng)。一般來說，ME＜0.8 表示基質(zhì)抑制，而ME＞1.2 表示基質(zhì)增強(qiáng)，當(dāng)基質(zhì)效應(yīng)在0.8～1.2 之間時，基質(zhì)所帶來的基質(zhì)效應(yīng)可忽略[20-21]。使用陰性樣品基質(zhì)提取液和純?nèi)軇┡渲葡嗤瑵舛鹊幕|(zhì)匹配校準(zhǔn)液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，用陰性樣品（B）平均峰面積的響應(yīng)值與純?nèi)軇ˋ）平均峰面積的響應(yīng)值之比來體現(xiàn)其基質(zhì)效應(yīng)，通過以下公式計算：

本試驗分別選取6 種軟體類水產(chǎn)品（魷魚、扇貝、牡蠣、貽貝、縊蟶、海參），按照1.3 節(jié)方法進(jìn)行樣品前處理，配制成0.4/4 μg/mL 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，具體結(jié)果詳見圖6。18 種酚類化合物在軟體類水產(chǎn)品中基質(zhì)效應(yīng)因其種類的不同而存在較大差異，在魷魚和海參基質(zhì)中，18 種酚類化合物基質(zhì)效應(yīng)分別為1.53～2.62 和1.33～2.42，均呈現(xiàn)出基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；牡蠣中溴酚類化合物和雙酚A基質(zhì)效應(yīng)為0.44～0.73，呈現(xiàn)出弱基質(zhì)效應(yīng)，其余種類的酚類化合物均呈現(xiàn)基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；縊蟶中，辛基酚、雙酚A、2，4，6-三溴苯酚基質(zhì)效應(yīng)為0.8～1.2，基質(zhì)效應(yīng)作用較弱，可忽略；其次，對于扇貝和貽貝而言，除2，4-二硝基苯酚、4-硝基酚、3-甲基-4-硝基酚、4，6-二硝基鄰甲苯酚外，均呈現(xiàn)基質(zhì)抑制作用。

圖6 不同種類軟體類水產(chǎn)品所對應(yīng)的基質(zhì)效應(yīng)Fig.6 Matrix effects of different kinds of soft aquatic products

2.4 方法學(xué)評價

2.4.1 線性范圍與方法檢出限 以空白魷魚基質(zhì)溶液作溶劑，配制18 種酚類化合物系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，直接進(jìn)樣分析。以酚類化合物的濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線，計算回歸方程，經(jīng)計算得到2，4-二硝基苯酚、4-硝基酚、4，6-二硝基鄰甲苯酚、3-甲基-4-硝基酚4 種酚類線性范圍為1～20 mg/L；其余14 種酚類物質(zhì)線性范圍為0.1～2 mg/L。其中前4 種酚類物質(zhì)加標(biāo)濃度為0.2，0.8，4 mg/kg，其余14 種酚類物質(zhì)加標(biāo)濃度為0.02，0.08，0.4 mg/kg，以3 倍信噪比結(jié)合濃度外推法確定方法檢出限（LOD），具體結(jié)果見表5。

表5 酚類化合物的校準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)Table 5 Calibration curve and correlation coefficient of phenolic pollutants

2.4.2 加標(biāo)回收率與方法精密度 通過回收率試驗，即在空白樣品中添加3 個加標(biāo)濃度（0.02/0.2，0.08/0.8，0.4/4 mg/kg）下評估了該方法的準(zhǔn)確性和精密度。對每個加標(biāo)水平進(jìn)行了6 次重復(fù)測試以檢查其重復(fù)性（RSD），結(jié)果如表6 所示，18 種酚類化合物的回收率在83.1%～107.7%之間，RSD 在1.9%～9.5%之間，這表明該方法具有較好的準(zhǔn)確度與精密度。

表6 酚類化合物的平均加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（%）Table 6 Standard addition recovery and relative standard deviation of phenolic pollutants（%）

2.4.3 酚類化合物檢測在軟體類中的應(yīng)用 采用本方法對購買的6 類48 份軟體類水產(chǎn)品進(jìn)行分析，以驗證該方法的可行性。檢測結(jié)果顯示，扇貝和縊蟶酚類化合物檢出情況最嚴(yán)重，共檢出2-溴苯酚、2-硝基-3-甲基苯酚、6-硝基間甲酚、2，4-二溴苯酚、壬基酚等11 種酚類化合物，其中硝基酚類化合物檢出量最多，檢出率高達(dá)63.3%，壬基酚檢出量最大，達(dá)0.062 mg/kg；牡蠣、貽貝和海參次之，共檢出12 種酚類化合物，檢出質(zhì)量濃度在0.004～0.043 mg/kg 之間。魷魚中酚類化合物的含量相對較少，酚類化合物檢出率僅為21.6%，除2，6-二溴苯酚、2，4，6-三溴苯酚、雙酚A 外，未檢出其它酚類化合物。

3 結(jié)論

本研究采用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，建立了軟體類水產(chǎn)品中18 種酚類化合物的檢驗方法及確證技術(shù)，同時將建立的檢測方法應(yīng)用于實際水產(chǎn)品酚類化合物的檢測，所建立的檢測方法可同時完成多種類酚類化合物的定性定量分析。本方法優(yōu)化了前處理，省去了耗時費(fèi)力的衍生步驟，可以有效去除基質(zhì)中雜質(zhì)的干擾，具有靈敏度高、檢測效率高、簡便快捷等特點(diǎn)，適用于大批量樣本檢測。