程路玲，汪邦山

新生兒溶血病（haemolytic disease of newborn，HDN）是母嬰血型不合引起的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病，以Rh 和ABO 血型不合引起的HDN（Rh?HDN 和ABO?HDN）最為常見［1-2］。HDN 主要通過血型鑒定和溶血三項(xiàng)試驗(yàn)（抗人球蛋白試驗(yàn)、血清游離抗體試驗(yàn)和紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)）進(jìn)行確診［3］。微柱凝膠卡式法是一種新型免疫檢測方法，能夠同時(shí)檢測出IgM 和IgG 抗體，靈敏度較高，近年來在HDN 血清學(xué)檢測中的應(yīng)用也逐漸增多［4-5］。本研究選取合肥市第一人民醫(yī)院收治的有疑似溶血癥狀的患兒92 例，采用微柱凝膠卡進(jìn)行檢測，分析檢測結(jié)果及其相關(guān)影響因素。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2020 年1?12 月安徽省合肥市第一人民醫(yī)院收治的92 例疑似HDN 的新生兒，存在高膽紅素血癥，主要癥狀為黃疸、貧血，其中男45 例，女47 例，出生時(shí)間0～15 d，中位出生時(shí)間為4.5 d。本研究通過安徽省合肥市第一人民醫(yī)院倫理委員會審批。

1.2 檢測方法

采集患兒及其母親抗凝全血，3 000 r/min 離心10 min，分離紅細(xì)胞與血清。使用微柱凝膠檢測卡（ABO?Rh 血型檢測卡及抗人球蛋白卡）、配套專用設(shè)備及相關(guān)試劑（強(qiáng)生公司）進(jìn)行檢測。（1）血型檢測：新生兒母親ABO 及Rh 血型應(yīng)用成人ABO?Rh 血型檢測卡進(jìn)行檢測，新生兒ABO 及Rh 血型應(yīng)用新生兒ABO?Rh 血型檢測卡進(jìn)行檢測。（2）抗人球蛋白試驗(yàn)（直接法）：將新生兒的適量紅細(xì)胞應(yīng)用生理鹽水進(jìn)行洗滌，共進(jìn)行3 次，完畢后將上清液去除，加入生理鹽水制備成1% 紅細(xì)胞懸浮液。在檢測卡的小孔內(nèi)加入50 μl 的1%紅細(xì)胞懸浮液，離心5 min，完畢后觀察結(jié)果。（3）血清游離抗體試驗(yàn)：在抗人球蛋白卡兌入50 μl 的0.8%標(biāo)準(zhǔn)ABO紅細(xì)胞，再加入患兒50 μl 血漿，在孵育箱孵育15 min，離心后觀察。（4）紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)：取壓積紅細(xì)胞，用生理鹽水洗滌3 次，再加入相當(dāng)于1/2 壓積紅細(xì)胞的生理鹽水與之混合，制備成紅細(xì)胞懸液，放在56 ℃水浴箱孵育10 min。完畢后取出離心，留下上層的放散液，在抗人球蛋白卡中加入50 μL 的0.8% 標(biāo)準(zhǔn)ABO 紅細(xì)胞，再加入50 μL 放散液，孵育15 min，離心后觀察結(jié)果。（5）對于存在ABO?HDN 的患兒或血清游離抗體試驗(yàn)結(jié)果“++”以上的患兒進(jìn)行抗體的特異性鑒定，同時(shí)對紅細(xì)胞表面是否有與之相對應(yīng)的抗原進(jìn)行鑒定。

1.3 結(jié)果判讀

血型鑒定和抗人球蛋白試驗(yàn)（直接法）結(jié)果出現(xiàn)凝集即為陽性，血清游離抗體試驗(yàn)和紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)檢出可以與新生兒紅細(xì)胞出現(xiàn)反應(yīng)的抗體即為陽性。以抗體釋放試驗(yàn)陽性為金標(biāo)準(zhǔn)診斷［6-7］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0.2 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。出生時(shí)間為計(jì)量資料，經(jīng)Shapiro?Wilk 檢驗(yàn)顯示不服從正態(tài)分布，以范圍和中位數(shù)表示；計(jì)數(shù)資料以百分比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患兒性別與HDN 檢出率的關(guān)系

92 例疑似HDN 患兒中，共檢出HDN 45 例，檢出率為48.91%。其中男性患兒HDN 檢出率為33.33%（15/45），女性患兒HDN 檢出率為63.83%（30/47），女性患兒HDN 檢出率高于男性患兒（χ2=8.556，P=0.003）。

2.2 患兒日齡與HDN 檢出率的關(guān)系

根據(jù)出生日齡，將疑似HDN 患兒分為≤1 d 組、2 d 組、3 d 組、4 d 組、5 d 組、≥6 d 組，6 組患兒的HDN 檢出率分別為71.43%（5/7）、76.92%（10/13）、69.23%（9/13）、53.85%（7/13）、41.67%（5/12）、26.47%（9/34），可見日齡對新生兒HDN的檢出率具有影響，隨著患兒的日齡增加，HDN 的檢出率逐步降低（χ2=15.471，P<0.05）。

2.3 HDN 患兒日齡與溶血三項(xiàng)試驗(yàn)靈敏度的關(guān)系

以紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)為金標(biāo)準(zhǔn)，血清游離抗體試驗(yàn)檢測HDN 的靈敏度為80.00%（36/45），抗人球蛋白試驗(yàn)（直接法）檢測HDN 的靈敏度為48.89%（22/45）。按日齡進(jìn)行分組后，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表明，日齡對抗人球蛋白試驗(yàn)（直接法）檢測靈敏度有影響（χ2=11.556，P<0.05）。見表1。

表1 不同日齡HDN 患兒與溶血三項(xiàng)試驗(yàn)靈敏度的關(guān)系［例（%）］

2.4 ABO 血型抗體檢出情況

共檢出ABO?HDN 患兒43 例，其中IgG 抗A 抗體引起HDN 有20 例（46.51%），IgG 抗B 抗體引起HDN 有23 例（53.49%）。

3 討論

母嬰血型不合為HDN 的主要原因［8］。HDN 溶血三項(xiàng)試驗(yàn)中，抗人球蛋白試驗(yàn)（直接法）和紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)?zāi)軐純杭t細(xì)胞結(jié)合血型抗體進(jìn)行檢測，血清游離抗體試驗(yàn)主要對患兒血清中的母體血型抗體進(jìn)行檢測，通過溶血三項(xiàng)試驗(yàn)與血型鑒定可以準(zhǔn)確診斷HDN［9］。本研究結(jié)果顯示疑似HDN 的92 例新生兒中，HDN 檢出率為48.91%（45/92），并且女性患兒HDN 檢出率比男性患兒高（63.83%vs33.33%，P=0.003），與部分文獻(xiàn)結(jié)果［10-11］一致。日齡≤1 d組、2 d 組、3 d 組、4 d 組、5 d 組、≥6 d 組患兒的HDN 檢出率分 別 為 71.43%、76.92%、69.23%、53.85%、41.67%、26.47%，HDN 的檢出率隨著患兒的日齡增加逐步降低（P<0.05），表明患兒的日齡越小HDN 的檢出率越高。患兒出生24 h 之內(nèi)，體內(nèi)會存在一定數(shù)量的致敏紅細(xì)胞、游離抗體，隨著時(shí)間增加，致敏紅細(xì)胞逐漸被破壞，游離抗體消失［12］。因此，為確保檢測所得結(jié)果準(zhǔn)確性，需要在新生兒發(fā)現(xiàn)存在高膽紅素血癥的同時(shí)，盡早進(jìn)行血型鑒定和溶血三項(xiàng)試驗(yàn)檢測。

本研究以紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)為金標(biāo)準(zhǔn)，血清游離抗體試驗(yàn)和抗人球蛋白試驗(yàn)（直接法）檢測HDN 的靈敏度分別為80.00% 和48.89%，抗人球蛋白試驗(yàn)（直接法）的靈敏度較低，并且患兒日齡對抗人球蛋白試驗(yàn)（直接法）的檢出率有影響（P<0.05）?？谷饲虻鞍自囼?yàn)（直接法）在臨床診斷HDN中價(jià)值顯著，借助該方法可以區(qū)分ABO?HDN 與其他類型HDN［13］。對于ABO 血型不合所致的HDN，抗人球蛋白試驗(yàn)（直接法）一般呈陰性或弱陽性，因此檢測靈敏度較低，且隨著日齡的增加、抗體逐漸被中和，其靈敏度進(jìn)一步降低；而其他血型尤其是Rh 血型不合所致的HDN，抗人球蛋白試驗(yàn)（直接法）結(jié)果的陽性強(qiáng)度多數(shù)在“+”以上，并且強(qiáng)度越高代表HDN 病情程度越重［14］。

ABO?HDN 是最常見的HDN 類型［12］。本研究中ABO溶血患兒共有43 例，其中由IgG 抗A 抗體引起的有20 例，IgG 抗B 抗體引起的有23 例。本研究病例數(shù)較少，未對Rh分型HDN 進(jìn)行分析。Rh 血型系統(tǒng)的抗原免疫原性按照強(qiáng)弱順序應(yīng)為D>E>c>C>e，對D 抗原進(jìn)行檢測為臨床常規(guī)項(xiàng)，臨床相關(guān)實(shí)踐之中多考慮RhD?HDN，而容易忽略Rh 其他分型的HDN［15］。在二孩、三孩政策的推動(dòng)下，Rh 其他分型HDN 出現(xiàn)的可能性逐漸增加［16］。結(jié)合相關(guān)研究結(jié)果，針對存在流產(chǎn)、輸血史以及死胎的產(chǎn)婦，或是存在HDN 病史者，均需要接受不規(guī)則抗體、Rh 血型分型檢測，避免出現(xiàn)HDN的漏檢［17-18］。

綜上所述，母嬰血型不合是HDN 的主要病因，患兒性別和日齡會對HDN 檢出率造成影響。為避免出現(xiàn)抗體漏檢，導(dǎo)致HDN 診斷出現(xiàn)臨床錯(cuò)誤，應(yīng)盡早對疑似HDN 患兒進(jìn)行血型鑒定及抗體篩查。