耿曉桐，劉琦，花嬌嬌，赫丁軒，喬新榮

（信陽農(nóng)林學(xué)院，河南信陽 464000）

地黃，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，“四大懷藥”之一，為玄參科地黃屬地黃（Rehmannia glutinosa）的新鮮或干燥塊根[1]，種植區(qū)域廣泛，對(duì)免疫、造血、心血管、神經(jīng)系統(tǒng)有顯著療效，廣泛用于臨床疾病的輔助治療[2-5]?！侗静菰肌酚涊d，“入藥惟懷慶熟地黃最優(yōu)”[6]；《本草綱目》記載，“江浙壤地黃者，受南方陽氣，質(zhì)雖光潤機(jī)時(shí)力微；懷慶府產(chǎn)者，稟北方純陰，皮有疙瘩而力大”及“今人惟以懷慶地黃為上”[7]。以上典籍記錄，充分說明了懷地黃的道地性。

歷代文獻(xiàn)記載中均以地黃橫切面是否有菊花心作為評(píng)判其道地性的標(biāo)準(zhǔn)[8]。菊花心為地黃塊根木質(zhì)部，剩余的皮部與次生韌皮部則為非菊花心部位，道地產(chǎn)區(qū)的地黃塊根中普遍具有菊花心[9]。總苯乙醇苷是地黃中主要活性成分，但有關(guān)地黃菊花心、非菊花心部位中總苯乙醇苷類成分含量是否有顯著差異并無相關(guān)研究，基于此，本試驗(yàn)對(duì)不同生育時(shí)期的兩個(gè)種質(zhì)懷地黃（沁懷、1706）的菊花心、非菊花心部位中總苯乙醇苷類成分含量進(jìn)行分析，為懷地黃種質(zhì)資源優(yōu)選、質(zhì)量評(píng)價(jià)及地黃道地性的判斷提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器

KQ-500DE 型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；TU-1810 紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.2 試劑

甲醇，分析純，天津奧普升化工有限公司；毛蕊花糖苷對(duì)照品，≥99%，批號(hào)E2007133，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

1.3 藥材

本試驗(yàn)所用藥材來自河南省焦作市溫縣懷地黃種植基地，于2022 年6—11 月（7 月10 日、8 月2 日、8 月21 日、9 月10 日、9 月30 日、10 月10 日、10月21 日、10 月31 日、11 月11 日）采收整體塊根樣品，其中9—11 月采收的2 個(gè)種質(zhì)的部分新鮮地黃塊根切分為菊花心與非菊花心兩部分。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 總苯乙醇苷類成分含量測(cè)定

（1）供試品溶液。取地黃藥材樣品約1.0 g，加60%甲醇溶液50 mL，超聲（220 W）處理30 min后，用60%甲醇補(bǔ)足缺失的質(zhì)量，濾過；取續(xù)濾液1.0 mL，置10 mL 容量瓶，60%甲醇定容至刻度，得供試品溶液。取供試品溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中，60%甲醇定容至刻度，并以60%甲醇溶液作為空白對(duì)照，于332 nm 處測(cè)定吸光度。

（2）對(duì)照品溶液。取毛蕊花糖苷對(duì)照品3.72 mg于10 mL 容量瓶，60%甲醇定容至刻度，60%甲醇分別稀釋配制成0.037 2 mg/mL、0.029 8 mg/mL、0.023 8 mg/mL、0.019 0 mg/mL、0.012 2 mg/mL、0.006 2 mg/mL 的對(duì)照品溶液。以60%甲醇溶液作為空白對(duì)照，于332 nm 處測(cè)定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合?；貧w方程為Y=23.149 8X+0.009 9（R2=0.999 9），在試驗(yàn)濃度內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

1.4.2 方法驗(yàn)證

（1）精密量取同一供試品溶液連續(xù)測(cè)定6 次，記錄吸光度，計(jì)算精密度試驗(yàn)RSD 值。

（2）精密稱定同一樣品6 份，制備供試品溶液，進(jìn)行含量測(cè)定，記錄吸光度，計(jì)算重復(fù)性試驗(yàn)RSD 值。

（3）取同一供試品溶液，分別在制備后0.0 h、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h、4.0 h 連續(xù)測(cè)定6 次，記錄吸光度，計(jì)算穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD 值。

（4）精密稱取已知含量樣品，平行稱定6 份，每份0.500 0 g，加入同等質(zhì)量的對(duì)照品后按照1.4.1 項(xiàng)下（1）供試品溶液方法進(jìn)行制備，測(cè)其吸光度，記錄加樣回收率試驗(yàn)RSD 值。

1.4.3 兩個(gè)種質(zhì)地黃生育期內(nèi)菊花心表型性狀測(cè)定及相關(guān)性分析

用陶瓷刀橫切去掉地黃兩頭的塊根，保留中間部位，分別用直尺測(cè)量菊花心部位的直徑大小，并利用Ecxcl 2019 對(duì)兩個(gè)種質(zhì)地黃生育期內(nèi)菊花心部位的直徑大小與其總苯乙醇苷類成分含量之間的相關(guān)性進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法驗(yàn)證結(jié)果

精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD 值分別為0.10%、0.72%、3.26%，說明儀器精密度良好、方法重復(fù)性良好、供試品溶液在制備4 h 之內(nèi)穩(wěn)定。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表明，平均加樣回收率為98.22%，RSD 為1.72%。本測(cè)定方法各指標(biāo)良好，可用于地黃總苯乙醇苷類成分含量的測(cè)定。

2.2 總苯乙醇苷類含量分析

由圖1 可知，兩個(gè)種質(zhì)地黃菊花心部位總苯乙醇苷類成分含量明顯高于非菊花心部位。兩個(gè)種質(zhì)地黃菊花心、非菊花心及整體塊根中總苯乙醇苷類成分含量變化趨勢(shì)基本相同，其中沁懷地黃總苯乙醇苷類成分含量在測(cè)定時(shí)期內(nèi)緩慢上升，至10 月31 日出現(xiàn)高峰，后顯著降低；1706 地黃總苯乙醇苷類成分含量在測(cè)定時(shí)期內(nèi)緩慢上升，至10 月10 日出現(xiàn)高峰，后顯著降低。

圖1 兩個(gè)種質(zhì)地黃總苯乙醇苷含量趨勢(shì)圖

2.4 菊花心表型性狀與總苯乙醇苷含量相關(guān)性分析

分析表1 可知，隨著地黃塊根的膨大，兩個(gè)種質(zhì)地黃菊花心直徑大小表現(xiàn)相對(duì)一致，即9 月10 日至10 月31 日逐漸增大，10 月31 日后有減小趨勢(shì)；1706 地黃菊花心部位直徑大于沁懷地黃，說明在一定環(huán)境中地黃種質(zhì)的內(nèi)在基因決定了菊花心的特征，這與朱建光等[10]研究結(jié)果一致；兩個(gè)種質(zhì)地黃菊花心總苯乙醇苷含量與其直徑存在顯著正相關(guān)，說明菊花心作為藥商鑒定地黃道地性的標(biāo)準(zhǔn)具有可行性[9]。

表1 兩個(gè)種質(zhì)地黃菊花心直徑及其與總苯乙醇苷含量相關(guān)性

3 結(jié)論

為了闡明地黃菊花心的特征與其質(zhì)量的相關(guān)性，本研究選取了河南道地產(chǎn)區(qū)溫縣外觀性狀不同的兩個(gè)種質(zhì)主栽地黃為對(duì)象。結(jié)果表明，兩個(gè)種質(zhì)地黃菊花心直徑存在明顯的差異，說明在一定環(huán)境中地黃種質(zhì)內(nèi)在基因決定了菊花心特征。其次，在地黃生育期內(nèi)，菊花心直徑大小與總苯乙醇苷含量呈正相關(guān)，地黃菊花心的大小可用于初步衡量其總苯乙醇苷含量的高低。未來，本研究組將對(duì)多種質(zhì)地黃菊花心部位總苯乙醇苷含量和其直徑之間的關(guān)系進(jìn)行深入研究，進(jìn)一步探討菊花心形成的內(nèi)在及外在原因，為地黃的品種鑒別及道地性揭示提供依據(jù)。