陳仕高 張?zhí)K杭 楊美森 李紅梅

（1重慶市秀山縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會(huì)，重慶秀山 409900；2云南楚雄醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，云南楚雄 675000；3重慶市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站，重慶 401121）

山銀花為忍冬科植物灰氈毛忍冬（Lonicera ma?cranthoidesHand.-Mazz.）、紅腺忍冬（Lonicera hypo?glaucaMiq.）、華南忍冬［Lonicera confusa（Sweet）DC.］或黃褐毛忍冬(Lonicera fulvotomentosaHsu et S.C. Cheng）的干燥花蕾或帶初開(kāi)的花，具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱等功效，用于治療癰腫疔瘡，喉痹，丹毒，熱毒血痢，風(fēng)熱感冒，溫病發(fā)熱，是一種藥用價(jià)值很高的中藥材。山銀花常以綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙藥效物質(zhì)指標(biāo)，作為其質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)[1]。我國(guó)土壤質(zhì)地分為黏土、壤土和砂土3 類[2]，山銀花主要種植在旱地土壤和荒地山坡上，土壤質(zhì)地以黏土和砂土類型為主。土壤對(duì)中藥材的質(zhì)量影響較大[3]，有研究者從土壤機(jī)械組成的黏砂粒含量上對(duì)山銀花質(zhì)量的影響進(jìn)行了一些研究[4-5]，而從黏土和砂土土質(zhì)上對(duì)山銀花藥效物質(zhì)影響的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。為更全面地了解黏土和砂土對(duì)山銀花質(zhì)量的影響，筆者開(kāi)展了黏土和砂土對(duì)山銀花灰氈毛忍冬的綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙、川續(xù)斷皂苷乙和木犀草苷4 個(gè)藥效物質(zhì)指標(biāo)的影響研究，以期為山銀花產(chǎn)業(yè)發(fā)展規(guī)劃布局和中藥材高質(zhì)量發(fā)展提供理論依據(jù)。

1 研究區(qū)概況

秀山縣地處重慶市東南、渝黔湘鄂接合部、武陵山區(qū)腹部地區(qū)（108°43′~109°18′E，28°09′~28°53′N），為中亞熱帶濕潤(rùn)季風(fēng)氣候區(qū)，四季分明，降水充沛，日照偏少，年均氣溫16 ℃，年均降水量1 341.1 mm，年日照時(shí)數(shù)1 213.7 h，海拔245.7～1 631.4 m，平壩、丘陵和低中山區(qū)各占1/3。全縣面積246 000 hm2，耕地面積57 333 hm2，土壤類型主要有黃壤、紅壤、紫色土、石灰?guī)r土、潮土和水稻土。

秀山縣山銀花現(xiàn)有種植面積15 067 hm2，是全國(guó)山銀花主產(chǎn)區(qū)之一[6-7]，以灰氈毛忍冬和“渝蕾1 號(hào)”為主[8]。作為重慶市中藥材“渝十味”品種之一，秀山縣鄉(xiāng)村振興產(chǎn)業(yè)中藥材“秀五味”品種之一，山銀花為秀山縣農(nóng)民脫貧增收作出了重要貢獻(xiàn)，也必將為秀山縣鄉(xiāng)村振興發(fā)揮積極作用。山銀花在秀山全境均有分布，主要種植在400～1 100 m丘陵和山區(qū)，即“一山兩蓋”示范帶的太陽(yáng)山示范帶、平陽(yáng)蓋示范帶和川河蓋示范帶，土壤主要由砂頁(yè)巖和石灰?guī)r母質(zhì)發(fā)育而來(lái)，砂頁(yè)巖母質(zhì)發(fā)育的土壤主要為砂性土壤，石灰?guī)r母質(zhì)發(fā)育的土壤主要為黏性土壤。

2 材料與方法

2.1 樣品材料

以灰氈毛忍冬為親本選育的“渝蕾1 號(hào)”（Lonicera macranthoidesHand. -Mazz.“Yulei1”）（渝S-SV-LM-005-2008）山銀花花蕾作為樣本材料。

2.2 樣品采集

2022 年6 月下旬至7 月上旬，于山銀花花蕾青白期，選擇秀山縣山銀花主要種植區(qū)有代表性的山銀花種植基地，采集10 個(gè)山銀花樣品，其中黏土土質(zhì)5 個(gè)，砂土土質(zhì)5 個(gè)；每塊地采用梅花型5 個(gè)點(diǎn)位取樣，每個(gè)點(diǎn)位采1 蔸，每蔸選3 枝（上、中、下各1 枝），共采摘15 枝的花蕾為1 個(gè)樣品；樣品采集后置于干燥箱內(nèi)，恒溫60 ℃烘烤至干燥待檢測(cè)。

2.3 樣品檢測(cè)

本研究山銀花樣品檢測(cè)項(xiàng)目為綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙、川續(xù)斷皂苷乙和木犀草苷4 個(gè)藥效指標(biāo)。藥效指標(biāo)檢測(cè)方法參照《中華人民共和國(guó)藥典》（2020 年版一部）山銀花和金銀花[1]。檢測(cè)單位是西安國(guó)聯(lián)質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)股份有限公司，檢測(cè)時(shí)間為2022 年8 月。

2.3.1 綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙測(cè)定參照高效液相色譜法（通則0512）測(cè)定。

（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)相A，以0.4%醋酸溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫（0～10 min、11.5%～15%A、88.5%～85%B；10～12 min、15%～29%A、85%～71%B；12～18 min、29%～33%A、71%～67%B；18～30 min、33%～45%A、67%～55%B）；綠原酸檢測(cè)波長(zhǎng)為330 nm；皂苷用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算不低于1 000。

（2）對(duì)照樣品溶液的制備。分別取綠原酸對(duì)照品、灰氈毛忍冬皂苷乙對(duì)照品、川續(xù)斷皂苷乙對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL 含綠原酸0.5 mg、灰氈毛忍冬皂苷乙0.6 mg、川續(xù)斷皂苷乙0.2 mg的混合溶液，即得。

（3）供試樣品溶液的制備。取供試樣品粉末（過(guò)四號(hào)篩）0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率300 W，頻率40 kHz）40 min，放冷后再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻、濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

（4）測(cè)定法。分別精密吸取對(duì)照品溶液2、10 μL，供試品溶液5～10 μL，注入液相色譜儀測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算綠原酸的含量，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算灰氈毛忍冬皂苷乙、川續(xù)斷皂苷乙的含量。

2.3.2 木犀草苷測(cè)定參照高效液相色譜法（通則0512）測(cè)定。

（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent ZORBAX SB-phenyl 4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈為流動(dòng)相A，以0.5%冰醋酸溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫（0～15 min，10%～20%A、90%～80%B；15～30 min，20%A、80%B；30～40 min，20%～30%A、80%～70%B）；檢測(cè)波長(zhǎng)為350 nm。理論板數(shù)按木犀草苷峰計(jì)算不低于20 000。

（2）對(duì)照樣品溶液的制備。取木犀草苷對(duì)照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1 mL 含40 μg的溶液。

（3）供試樣品溶液的制備。取供試樣品粉末（過(guò)四號(hào)篩）2.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率35 kHz）1 h，放冷后再稱定質(zhì)量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻、濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10 mL，回收溶劑至干，殘?jiān)?0%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL 容量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。

（4）測(cè)定法。分別精密吸取對(duì)照樣品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.4 數(shù)據(jù)處理

采用WPS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 黏土和砂土對(duì)山銀花綠原酸的影響

由表1 可以看出，黏土和砂土中山銀花灰氈毛忍冬的綠原酸平均含量分別為3.414%、2.967%，黏土中山銀花的綠原酸含量比砂土中高，差異達(dá)顯著水平；黏土和砂土中山銀花綠原酸的變異系數(shù)分別為16.3%、18.6%，變異系數(shù)均較小。說(shuō)明黏土中山銀花灰氈毛忍冬的綠原酸含量更高，黏土與砂土差異明顯。

表1 土壤質(zhì)地對(duì)山銀花綠原酸和灰氈毛忍冬皂苷乙的影響 單位：%

3.2 黏土和砂土對(duì)山銀花灰氈毛忍冬皂苷乙的影響

由表1 可看出，黏土和砂土中山銀花的灰氈毛忍冬皂苷乙平均含量分別為5.843%、5.300%，黏土中山銀花的灰氈毛忍冬皂苷乙含量比砂土中高，差異達(dá)極顯著水平；黏土和砂土中山銀花灰氈毛忍冬皂苷乙的變異系數(shù)分別為7.8%、16.1%，變異系數(shù)均較小。說(shuō)明黏土中山銀花灰氈毛忍冬的灰氈毛忍冬皂苷乙含量更高，黏土與砂土差異非常明顯。

3.3 黏土和砂土對(duì)山銀花川續(xù)斷皂苷乙的影響

由表2 可知，黏土和砂土中山銀花灰氈毛忍冬川續(xù)斷皂苷乙平均含量分別為0.471%、0.400%，黏土中山銀花的川續(xù)斷皂苷乙含量比砂土中高，差異達(dá)極顯著水平；黏土和砂土中山銀花川續(xù)斷皂苷乙的變異系數(shù)分別為16.0%、25.0%，變異系數(shù)均較小。說(shuō)明黏土中山銀花灰氈毛忍冬的川續(xù)斷皂苷乙含量更高，黏土與砂土差異非常明顯。

表2 土壤質(zhì)地對(duì)山銀花川續(xù)斷皂苷乙和木犀草苷的影響 單位：%

3.4 黏土和砂土對(duì)山銀花木犀草苷的影響

由表2 可知，黏土和砂土中山銀花灰氈毛忍冬的木犀草苷平均含量分別為0.073%、0.093%，砂土中山銀花的木犀草苷含量比黏土中高，差異達(dá)顯著水平；黏土和砂土中山銀花木犀草苷的變異系數(shù)分別為35.7%、34.9%，變異系數(shù)均較小。說(shuō)明砂土中山銀花灰氈毛忍冬的木犀草苷的含量更高，砂土和黏土差異明顯。

4 討論與結(jié)論

根據(jù)《中國(guó)藥典》2020年版藥物質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，山銀花，綠原酸≥2.0%，灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙總量≥5.0%；金銀花，綠原酸≥1.5%，木犀草苷≥0.050%。本研究表明，重慶市秀山地區(qū)山銀花灰氈毛忍冬的綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙、川續(xù)斷皂苷乙和木犀草苷各藥效物質(zhì)含量，均比《中國(guó)藥典》2020年版山銀花和金銀花的標(biāo)準(zhǔn)高10%以上，特別是綠原酸和木犀草苷高45%以上，說(shuō)明該地區(qū)山銀花灰氈毛忍冬品質(zhì)較好，這也說(shuō)明該地為道地中藥材山銀花的優(yōu)勢(shì)產(chǎn)區(qū)之一。

土壤質(zhì)地簡(jiǎn)單來(lái)講就是土壤的黏砂程度，是土壤的重要自然屬性之一，其土壤顆粒組成特征能夠反映成土母質(zhì)的來(lái)源和狀況，影響土壤的保水保肥能力、土壤透氣性、土壤養(yǎng)分和土壤耕作性等。土壤質(zhì)地分為黏土、壤土和砂土3 類，山銀花主要種植在旱地土壤和荒地山坡上，土壤質(zhì)地以黏土和砂土類型為主。砂土顆粒粗糙、滲水速度快、通氣性能好、保水保肥性能略差，而黏土顆粒細(xì)膩、保水保肥性能好、滲水速度慢、通氣性能略差。土壤質(zhì)地不同則肥料轉(zhuǎn)化供應(yīng)和根系活力就不同，影響山銀花生長(zhǎng)和養(yǎng)分吸收，最終影響山銀花品質(zhì)。本研究結(jié)果表明，黏土利于山銀花灰氈毛忍冬的綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙的合成，其山銀花的綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙含量更高，與砂土比較，差異顯著或極顯著；而砂土利于山銀花灰氈毛忍冬的木犀草苷的合成，其山銀花的木犀草苷含量更高，與黏土比較，差異顯著。本研究結(jié)果表明土壤質(zhì)地對(duì)山銀花品質(zhì)影響很大，這與柳小蘭等[4]研究發(fā)現(xiàn)土粒細(xì)利于灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙合成，陳喬喬等[5]研究得出土壤粉粒與綠原酸呈顯著正相關(guān)的結(jié)果相似；與北方砂土道地產(chǎn)區(qū)金銀花的木犀草苷含量相對(duì)較高[9]結(jié)果相似。山銀花產(chǎn)區(qū)主要分布在重慶、湖南、貴州等南方地區(qū)[6～7]，種植區(qū)域以山地為主，種植區(qū)黏土和砂土同時(shí)存在，實(shí)際生產(chǎn)中黏土和砂土分類種植更方便，可參照本研究結(jié)果，即黏土山銀花的綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙含量更高，砂土山銀花的木犀草苷含量更高來(lái)進(jìn)行規(guī)劃種植山銀花。以綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙的含量或提取物為主要目標(biāo)時(shí)，選擇黏土種植最好，以木犀草苷的含量或提取物為主要目標(biāo)時(shí)，選擇砂土種植最好。根據(jù)山銀花種植規(guī)劃選用黏土或砂土土質(zhì)，對(duì)山銀花產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展意義重大。也有研究認(rèn)為，金銀花比山銀花的木犀草苷含量高[10]，但其所選用比較的山銀花可能是黏土上種植的，而南方砂土種植的山銀花灰氈毛忍冬與北方砂土道地金銀花的木犀草苷含量是否真正存在明顯差異，有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，土壤質(zhì)地對(duì)山銀花質(zhì)量的影響較大，黏土利于山銀花的綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙合成，含量更高，砂土利于山銀花的木犀草苷合成，含量更高。本研究結(jié)果對(duì)于砂土和黏土并存地區(qū)的山銀花規(guī)劃種植及提升品質(zhì)具有一定的參考意義。