李景峰 吳淑君 李繼德

肺癌主要包括非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、小細(xì)胞肺癌,其中NSCLC患者約占80%[1]。早期NSCLC患者采用手術(shù)治療術(shù)后5年生存率可達(dá)86%,但NSCLC早期確診難度大,多數(shù)患者確診時(shí)已處于晚期,發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移,5年生存率較低,預(yù)后較差[2]。臨床應(yīng)探索新的NSCLC標(biāo)志物,以便早期發(fā)現(xiàn)NSCLC,并對患者預(yù)后進(jìn)行判斷。長鏈非編碼RNA(lncRNA)屬于一類長度超過200個(gè)核苷酸的轉(zhuǎn)錄本,lncRNA在腫瘤組織中差異表達(dá),在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起到了重要作用[3]。AGAP2-AS1為一種反義lncRNA,有研究證實(shí),AGAP2-AS1可促進(jìn)乳腺癌生長,并可激活NF-κB、上調(diào)MyD88,誘發(fā)曲妥珠單抗耐藥,且AGAP2-AS1為評估膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者預(yù)后的重要指標(biāo)[4-5]。但目前關(guān)于AGAP2-AS1在NSCLC組織中的表達(dá)及與預(yù)后間的關(guān)系的研究報(bào)道較少,鑒于此,本研究將探討AGAP2-AS1在NSCLC組織中的表達(dá)及臨床意義?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年1月至2019年12月于我院治療的95例NSCLC患者臨床資料,收集患者NSCLC組織及癌旁正常組織。本研究獲醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)?；颊咧心行?6例,女性39例;年齡35～78歲,平均年齡(59.86±4.79)歲;腫瘤直徑1.5～4.3 cm,平均腫瘤直徑(2.98±0.35)cm;TNM分期:Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期各有19例、33例、25例、18例。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn):①患者臨床資料較為完善;②NSCLC均經(jīng)病理檢查確診;③患者均未接受相關(guān)抗腫瘤治療;④年齡≥18歲。排除標(biāo)準(zhǔn):①精神行為異常,依從性較低;②合并其他惡性腫瘤;③合并嚴(yán)重感染。

1.3 方法

1.3.1 儀器及試劑 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(7500 Real-Time PCR型,美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司提供),上海生工生物工程有限公司提供AGAP2-AS1和內(nèi)參GAPDH引物,美國Invitrogen公司提供TRIzol,大連寶生物有限公司提供實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)試劑盒SYBR Premix Ex Taq、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScriptTM1st Strand cDNA Synthesis Kit。

1.3.2 總RNA提取和qPCR 將1 ml TRIzol加入100 mg組織中,離心后,提取RNA,并采用DEPC水重懸后萃取、純化,取1 μg總RNA,采用PrimeScriptTM1st Strand cDNA Synthesis Kit合成cDNA,混勻擴(kuò)增產(chǎn)物與SYBR Premix Ex Taq試劑盒內(nèi)試劑,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行qPCR,反應(yīng)條件:95 ℃ 30 s,40個(gè)循環(huán)95 ℃ 5 s、60 ℃ 10 s。內(nèi)參選取GAPDH,采用2-ΔΔCt法對AGAP2-AS1相對表達(dá)量進(jìn)行計(jì)算。GAPDH上游引物:5'-TGTAG-GCTCATTTGCAGGGG-3',下游引物:5'-ATGGCAT-GGACTGTGGTCTG-3';AGAP2-AS1上游引物:5'-CACTACACTC-CCTAGCCCCT-3',下游引物:5'-GAGGACGGTCTT-GGGAAAGG-3'。

1.4 評價(jià)指標(biāo)

(1)NSCLC組織及癌旁正常組織中的AGAP2-AS1表達(dá)水平。(2)AGAP2-AS1與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系。(3)AGAP2-AS1表達(dá)水平與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 NSCLC組織及癌旁正常組織中的AGAP2-AS1表達(dá)水平比較

NSCLC組織中AGAP2-AS1表達(dá)水平為(3.21±1.18),高于癌旁正常組織的(1.67±0.64),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=11.182,P=0.000)。

2.2 AGAP2-AS1與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系

腫瘤直徑≥3 cm、TNM分期Ⅲ期+Ⅳ期、 分化程度低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的AGAP2-AS1表達(dá)水平高于腫瘤直徑<3 cm、Ⅰ期+Ⅱ期、中分化+高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);不同年齡及性別患者的AGAP2-AS1表達(dá)水平比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 AGAP2-AS1與NSCLC臨床病理特征關(guān)系分析

2.3 AGAP2-AS1表達(dá)水平與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系

隨訪2年,95例患者死亡40例,生存55例。死亡組患者的AGAP2-AS1表達(dá)水平為(4.22±1.64),高于生存組的(2.37±0.75),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.382,P=0.000)。

3 討論

lncRNAs表達(dá)改變?yōu)槟[瘤發(fā)生的驅(qū)動因素,lncRNA可作為引導(dǎo)員,指引蛋白靶向運(yùn)動至相應(yīng)啟動子位點(diǎn),同時(shí)可作為信號分子,結(jié)合蛋白質(zhì)形成復(fù)合物,結(jié)合啟動子對下游基因轉(zhuǎn)錄過程進(jìn)行調(diào)節(jié),并可作為誘餌對調(diào)控蛋白與啟動子位點(diǎn)結(jié)合進(jìn)行抑制[6-7]。Jia等[8]研究指出,腫瘤在發(fā)生、發(fā)展過程中,會引起lncRNA異常表達(dá),LncRNA MAFG-AS1過表達(dá)參與NSCLC細(xì)胞侵襲及遷移的過程,王凱等[9]指出,LncRNA AGAP2-AS1可促進(jìn)腎細(xì)胞癌的侵襲與轉(zhuǎn)移。

本次研究分析AGAP2-AS1在NSCLC組織中的表達(dá)及臨床意義,研究結(jié)果顯示,NSCLC組織中AGAP2-AS1表達(dá)水平高于癌旁正常組織,腫瘤直徑≥3 cm、TNM分期Ⅲ期+Ⅳ期、 分化程度低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的AGAP2-AS1表達(dá)水平高于腫瘤直徑<3 cm、Ⅰ期+Ⅱ期、中分化+高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。提示出在NSCLC組織中AGAP2-AS1表達(dá)水平上調(diào),且與臨床病理參數(shù)間關(guān)系密切,AGAP2-AS1在腫瘤體積較大、TNM分期較晚、分化程度較低與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中表達(dá)水平較高,AGAP2-AS1可起到促癌作用,參與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展。同時(shí)研究結(jié)果顯示,死亡組患者的AGAP2-AS1表達(dá)水平高于生存組,表明AGAP2-AS1表達(dá)量與患者預(yù)后有關(guān),AGAP2-AS1表達(dá)水平越高患者預(yù)后越差。馬星等[10]在研究中指出,NSCLC組織AGAP2-AS1表達(dá)水平高于癌旁正常組織,TNM分期Ⅱ期、低分化的NSCLC患者AGAP2-AS1低表達(dá)人數(shù)占比低于TNM分期Ⅰ期、中高分化的NSCLC患者,且AGAP2-AS1高表達(dá)為影響患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素,與本次研究結(jié)果較為相似。AGAP2-AS1屬于lncRNA家族成員,轉(zhuǎn)錄位點(diǎn)12q14.1,1567個(gè)核苷酸長度,可通過影響miRNAs調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為,在腫瘤生長、繁殖及侵襲中發(fā)揮重要的調(diào)控作用[11-12]。但本次研究中僅納入95例NSCLC患者,且為回顧性分析研究,還有待臨床開展前瞻性、大樣本量研究,以進(jìn)一步證實(shí)AGAP2-AS1在NSCLC患者中的表達(dá)及臨床意義,旨在為NSCLC患者的早期診斷、治療及預(yù)后評估提供參考。

綜上所述,AGAP2-AS1在NSCLC組織中表達(dá)水平較高,且AGAP2-AS1表達(dá)水平與患者臨床病理特征及預(yù)后密切相關(guān),可用于NSCLC患者的診治及預(yù)后評估。