吳梅青?陳英華?劉燕曄?李智?劉練金?施玲玲?章忠明

【摘要】目的 分析健康兒童供者的造血干細(xì)胞動(dòng)員和采集效果。方法 67名健康兒童供者納入研究，根據(jù)供/受者體重比值（供/受BWR）分為供/受BWR<1組（24例）、供/受BWR1～2組（29例）和供/受BWR>2組（14例），在各組間比較骨髓和外周血干細(xì)胞動(dòng)員、采集效果、不良反應(yīng)等情況。結(jié)果 供/受BWR<1的供者采集的骨髓干細(xì)胞單個(gè)核細(xì)胞數(shù)（MNC）明顯低于供/受BWR1～2組和供/受BWR>2組（P均<0.001），而3組間骨髓CD34+細(xì)胞數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。供/受BWR>2組的外周血干細(xì)胞MNC明顯高于供/受BWR<1組和供/受BWR1～2組（P < 0.05），且供/受BWR>2組的外周血干細(xì)胞CD34+細(xì)胞數(shù)明顯高于供/受BWR<1組（P = 0.032）。健康兒童供者動(dòng)員和采集干細(xì)胞過程中不良反應(yīng)可耐受，所采集的骨髓和外周血干細(xì)胞均能滿足移植需求，隨訪其相應(yīng)受者無植入不良發(fā)生。結(jié)論 健康兒童作為供者進(jìn)行造血干細(xì)胞采集效果良好，采集過程安全可行。盡管低供/受BWR供者采集的干細(xì)胞比高供/受BWR供者低，但所采集的干細(xì)胞均能滿足移植需求。

【關(guān)鍵詞】?jī)和┱?；造血干?xì)胞動(dòng)員；造血干細(xì)胞采集；安全性

Analysis of effect of hematopoietic stem cell mobilization and collection in 67 healthy pediatric donors Wu Meiqing， Chen Yinghua， Liu Yanye， Li Zhi， Liu Lianjin， Shi Lingling， Zhang Zhongming. Department of Hematology， the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University， Nanning 530021， China

Corresponding author， Zhang Zhongming， E-mail： zzmmissyou@126.com

【Abstract】Objective To evaluate the effect of hematopoietic stem cell mobilization and collection in healthy pediatric donors. Methods 67 healthy pediatric donors were included in this study.According to the donor/recipient （D/R） body weight ratio （BWR）， they were divided into three groups： D/R BWR<1 group（n = 24）， D/R BWR 1-2 group（n = 29）， and D/R BWR>2 group

（n = 14）. The mobilization， collection effect and adverse reactions of bone marrow and peripheral blood stem cells were compared among all groups. Results The quantity of mononuclear cells （MNCs） of bone marrow stem cells collected in the D/R BWR<1 group was significantly lower than those in the D/R BWR 1-2 and D/R BWR>2 group （both P < 0.001）. There was no significant difference in the quantity of bone marrow CD34+ cells among three groups （all P > 0.05）. The quantity of MNCs of peripheral blood stem cells in the D/R BWR>2 group was significantly higher than those in the D/R BWR<1 and D/R BWR 1-2 group （both P < 0.05）， and the quantity of CD34+ cells of peripheral blood stem cells in the D/R BWR>2 group was significantly higher than that in the D/R BWR<1 group （P = 0.032）. Adverse reactions were tolerated in all donors during stem cell mobilization and collection. The bone marrow and peripheral blood stem cells collected from pediatric donors could meet the transplantation needs. No poor implantation or implantation failure occurred in the related recipients during follow-up. Conclusions Hematopoietic stem cell collection from healthy pediatric donors is effective and safe. Although the quantity of stem cells collected in low D/R BWR is less compared to that in the high D/R BWR， the collected stem cells can meet the transplantation needs.

【Key words】Pediatric donor； Hematopoietic stem cell mobilization； Hematopoietic stem cell collection； Safety

異基因造血干細(xì)胞移植是目前治療血液系統(tǒng)疾病和遺傳性疾病的有效手段之一［1-3］。在重型地中海貧血（地貧）患者移植中，親緣健康同胞通常是作為首選的供者［4］。近年來，隨著單倍體移植技術(shù)的不斷提高，在惡性血液病移植中，子女作為供者選擇也日益增加［5］。采集足夠的供者干細(xì)胞是保障造血干細(xì)胞移植成功的基本條件［6］。臨床實(shí)踐表明大體重兒童供者采集的干細(xì)胞通常能滿足低體重受者的移植需求，而低體重供者采集的干細(xì)胞是否能滿足大體重兒童或成人受者的移植需求則備受關(guān)注［7］。為評(píng)估健康兒童干細(xì)胞動(dòng)員及采集效果，現(xiàn)將廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院67例兒童供者的資料總結(jié)分析如下。

資料與方法

一、研究對(duì)象

2021年1月至2022年8月在本院提供造血干細(xì)胞且年齡≤14歲的健康兒童供者納入研究。根據(jù)供/受者體重比值（供/受BWR）分為3組：供/

受BWR<1組、供/受BWR1～2組、供/受BWR > 2組。所有兒童供者的父母或監(jiān)護(hù)人均簽署知情同意書。本研究及流程已通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批號(hào)：2023-E069-01） 。

二、方 法

比較各組間骨髓和外周血干細(xì)胞動(dòng)員、采集效果、不良反應(yīng)發(fā)生情況。

1.供者采集前準(zhǔn)備

供者在干細(xì)胞動(dòng)員和采集前完善各種相關(guān)檢查：包括血常規(guī)、尿常規(guī)、糞便常規(guī)、血液生化（肝功能、腎功能、電解質(zhì)、心肌酶譜等）、輸血前相關(guān)檢查（乙型肝炎兩對(duì)半、丙型肝炎抗體、梅毒螺旋體特異性抗體、HIV抗體）、血型鑒定（ABO血型+RhD血型）、病毒相關(guān)檢測(cè)（EB病毒核酸、巨細(xì)胞病毒核酸）、心電圖、胸部影像學(xué)等相關(guān)檢測(cè)。受者為重型地貧時(shí)，供者行地貧基因檢測(cè)。

2.造血干細(xì)胞動(dòng)員

采用重組人粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）5～10 μg/（kg·d）皮下注射，監(jiān)測(cè)外周血細(xì)胞變化，動(dòng)員第4日檢測(cè)外周血CD34+細(xì)胞比例。

3.骨髓干細(xì)胞采集

體重≥30 kg的供者于動(dòng)員前分次采集保存自體血，體重< 30 kg的供者根據(jù)采骨髓量（10～

20 mL/kg）于采集前配同型紅細(xì)胞2～4 U備用。G-CSF動(dòng)員第4日供者行骨髓干細(xì)胞采集術(shù)，手術(shù)過程嚴(yán)格無菌操作，術(shù)中回輸預(yù)存的自體血或異體血、監(jiān)測(cè)生命征，術(shù)后復(fù)查血常規(guī)、凝血功能、電解質(zhì)等。

4.外周血造血干細(xì)胞采集

于動(dòng)員第5日行外周血干細(xì)胞采集，外周血干細(xì)胞采集前評(píng)估供者血管情況，血管條件不佳者行股靜脈置管。體重≤20 kg的供者，使用同型紅細(xì)胞1 U預(yù)充管路后再行外周血干細(xì)胞分離。在采集前口服鈣劑，采集過程中給予靜滴葡萄糖酸鈣預(yù)防低鈣血癥。干細(xì)胞產(chǎn)品經(jīng)手工計(jì)數(shù)獲取單個(gè)核細(xì)胞數(shù)（MNC），經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD34+細(xì)胞數(shù)。當(dāng)采集MNC或CD34+細(xì)胞數(shù)量不足時(shí)，且供者身體條件耐受情況下于動(dòng)員第6日行第2次外周血干細(xì)胞采集。

5.記錄干細(xì)胞動(dòng)員及采集不良反應(yīng)

在G-CSF動(dòng)員期間、干細(xì)胞采集過程中分別記錄供者出現(xiàn)的不良反應(yīng)、持續(xù)時(shí)間、緩解方式等。干細(xì)胞采集1周后復(fù)查血常規(guī)，術(shù)后對(duì)供者的生長(zhǎng)發(fā)育、身體健康狀況、生活質(zhì)量等進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以描述，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、一般人口學(xué)特征

67名兒童供者納入本研究，其中男30名、女37名，年齡（8.87±3.94）名，體重（31.33±14.26）kg。

供受者間均為親緣關(guān)系，同胞之間59名、子女供父母8名，采集成功率為100%。供受者一般人口學(xué)特征見表1。

二、干細(xì)胞采集日供者外周血細(xì)胞檢測(cè)

供者在干細(xì)胞采集當(dāng)日的外周血白細(xì)胞、血紅蛋白、血小板在3組不同供/受BWR組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均 > 0.05）。供/受BWR 1～2組外周血CD34+細(xì)胞絕對(duì)值明顯高于供/受BWR>2組（95%CI 18.961～83.798，P = 0.003）。見表2。

三、不同供/受BWR骨髓和外周血干細(xì)胞采集情況比較

67例供者中53例在動(dòng)員第4日采集骨髓，所有供者均在動(dòng)員第5日采集外周血干細(xì)胞，9名供者因采集MNC總數(shù)或CD34+細(xì)胞數(shù)量不足在動(dòng)員第6日繼續(xù)采集外周血干細(xì)胞。采集的干細(xì)胞產(chǎn)品MNC為（12.97±4.71）×108/ kg，CD34+細(xì)胞為

（11.51±5.05）×106/ kg。供/受BWR<1組行2次外周血干細(xì)胞采集的比例（29.2%，7/24）明顯高于供/受BWR > 2組（0%，0/14），P = 0.033。供/

受BWR<1組的骨髓干細(xì)胞MNC明顯低于供/受BWR1～2組（95%CI -4.373～-1.661，P < 0.001）和供/受BWR > 2組（95%CI -4.970～-1.609，P < 0.001）；供/受BWR>2組的外周血干細(xì)胞MNC明顯高于供/受BWR<1組（95%CI 0.999～5.676，P < 0.001）和供/受BWR1～2組（95%CI 1.439～6.049，P < 0.001），且供/受BWR>2組的外周血干細(xì)胞CD34+細(xì)胞數(shù)明顯高于供/受BWR<1組（95%CI 0.225～4.798，P = 0.032）。見表3。所有供者采集的骨髓和外周血干細(xì)胞均能滿足移植需求，隨訪其相關(guān)受者無植入不良或失敗發(fā)生。

四、干細(xì)胞動(dòng)員和采集過程中的不良反應(yīng)

67名供者中有6名行深靜脈置管，其中3名出現(xiàn)穿刺處疼痛，1名出現(xiàn)拔管后穿刺處血腫。在G-CSF動(dòng)員過程中，最常見的不良反應(yīng)為骨痛［25.4%（17/67）］，其次為疲乏［17.9%（12/67）］、頭痛［11.9%（8/67）］、惡心［9.0%（6/67）］。3組不同供/受BWR供者在動(dòng)員過程中的不良反應(yīng)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均 > 0.05）。見表4。11.3%（6/53）供者骨髓采集后出現(xiàn)術(shù)口疼痛，經(jīng)對(duì)癥治療后好轉(zhuǎn)。在外周血干細(xì)胞采集過程中，11.9%（8/67）供者出現(xiàn)口周、四肢肢端感覺異常，經(jīng)靜脈補(bǔ)鈣等積極對(duì)癥治療后好轉(zhuǎn)，無供者因低鈣血癥發(fā)生抽搐。供者采集骨髓和外周血干細(xì)胞過程中不良反應(yīng)耐受可，無供者因不良反應(yīng)中斷采集。

討論

異基因造血干細(xì)胞移植是目前臨床上治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤和非惡性疾病如血紅蛋白病、骨髓衰竭綜合征、免疫缺陷和先天代謝性疾病等的有效方法之一［1］。造血干細(xì)胞是通過骨髓或外周血干細(xì)胞采集從供體獲得的，供者的安全性是保證干細(xì)胞移植順利完成的前提條件。近年來，隨著生育政策的調(diào)整和單倍體移植技術(shù)的不斷提高，兒童親緣同胞和未成年子女作為干細(xì)胞供者日益增多［8-9］。由于年齡小、體重輕及獨(dú)特的生理機(jī)能，與成人相比，兒童在干細(xì)胞采集過程中可能會(huì)面臨各種困難，如血管通路、體外循環(huán)容積和血流速度等問題［10-11］。大齡大體重的兒童供者采集的干細(xì)胞通常能滿足低齡低體重受者的移植需求，然而，在臨床實(shí)踐中通常需要面臨低齡低體重供者干細(xì)胞的采集，這部分供者的干細(xì)胞能否滿足大齡大體重同胞或成人父母受者的移植需求則備受關(guān)注。

Truong等［6］學(xué)者曾報(bào)道在199名兒童中，35名健康同胞供者外周干細(xì)胞采集成功率為100%，在164名兒童患者自體外周血干細(xì)胞采集成功率為93%。Díaz等［12］和Suzuya等［13］學(xué)者曾分別報(bào)道供者年齡是影響外周血干細(xì)胞產(chǎn)品采集的重要因素。一項(xiàng)納入201例兒童供者的多中心回顧性研究也顯示相比于大齡的兒童供者，年齡小于6歲的供者可以采集到更高的CD34+細(xì)胞產(chǎn)品［14］。在臨床實(shí)踐中，低齡低體重兒童作為供者采集的干細(xì)胞能否滿足大體重受者的移植需求尚未明確。本研究中，67名健康親緣兒童供者納入分析，同胞之間59名、子女供父母8名。采集的干細(xì)胞產(chǎn)品MNC為（12.97±4.71）×108/ kg，CD34+細(xì)胞為（11.51±

5.05）×106/ kg，采集成功率為100%。本研究以供/

受BWR對(duì)兒童供者進(jìn)行分組分析，結(jié)果顯示與供/

受BWR>2組相比較，供/受BWR<1組供者的干細(xì)胞產(chǎn)品總MNC和CD34+細(xì)胞數(shù)均明顯降低，因此，供/受BWR<1組供者行2次外周血干細(xì)胞采集的比例明顯升高。然而，供/受BWR<1組供者骨髓聯(lián)合外周血干細(xì)胞產(chǎn)品MNC和CD34+細(xì)胞數(shù)

分別為（10.57±3.23）×108/kg和（9.30±4.08）×

106/kg，亦能滿足受者移植需求。所有供者采集的造血干細(xì)胞均能滿足移植需求，隨訪其相關(guān)受者無植入延遲等不良情況發(fā)生。

G-CSF是目前臨床上常用的造血干細(xì)胞動(dòng)員劑，既往文獻(xiàn)報(bào)道健康供者使用G-CSF動(dòng)員最常見的不良反應(yīng)為骨痛［15-17］。本研究中，兒童供者使用G-CSF動(dòng)員過程中最常見的不良反應(yīng)也為骨痛，發(fā)生率為25.4%，與既往文獻(xiàn)報(bào)道相一致。在干細(xì)胞采集過程中，由于使用枸櫞酸抗凝劑，供者通常因體內(nèi)鈣離子被螯合后出現(xiàn)低鈣血癥，最常見為口唇及四肢麻木，惡心、嘔吐，心悸、手足抽搐，嚴(yán)重者可發(fā)生心律失常等［18］。本中心在采集前常規(guī)給予供者口服補(bǔ)鈣，采集過程中動(dòng)態(tài)給予靜脈滴注葡萄糖酸鈣，本組健康兒童供者采集過程中口周及四肢感覺異常的總體發(fā)生率為11.9%，經(jīng)靜脈補(bǔ)鈣等積極治療后好轉(zhuǎn)，無供者因低鈣血癥發(fā)生抽搐。此外，我們還觀察到年齡越小的供者越容易出現(xiàn)低鈣表現(xiàn)，需提前補(bǔ)充鈣劑預(yù)防，并在采集過程中密切關(guān)注供者情況。本研究中的供者均能良好耐受干細(xì)胞動(dòng)員和采集，無供者因不良反應(yīng)而中斷采集。

綜上所述，兒童健康供者進(jìn)行骨髓和外周血干細(xì)胞采集效果良好，采集過程安全可行。盡管低供/受BWR兒童供者采集的干細(xì)胞比高供/受BWR供者低，但所采集的干細(xì)胞均能滿足移植需求，無受者發(fā)生植入不良。干細(xì)胞動(dòng)員前進(jìn)行全面的評(píng)估，采集過程仔細(xì)觀察，采集后定期隨訪對(duì)保證兒童供者安全有重要意義。

參 考 文 獻(xiàn)

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（收稿日期：2023-03-25）

（本文編輯：楊江瑜）