劉首宏，張永全，王俏

冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┰缙谂R床癥狀不明顯，嚴重時可致患者休克甚至死亡［1］。及時診斷冠心病并評估冠狀動脈狹窄程度，預測主要不良心臟事件（major adverse cardiac events，MACEs）發(fā)生風險有助于精準治療方案的制定和預后干預。冠狀動脈造影（coronary angiography，CAG）檢查是評估冠狀動脈狹窄的“金標準”，但該檢查屬有創(chuàng)性且費用高。血液標志物的獲取具有簡便、快捷、無創(chuàng)等優(yōu)點，故尋找敏感度高、特異度好的指標以輔助判斷冠心病患者冠狀動脈狹窄程度及預后預測具有潛在價值。炎癥反應貫穿冠心病始終，長期炎癥浸潤血管壁可導致血管內皮損傷，進而引發(fā)動脈粥樣硬化［2-3］。研究顯示，補體系統(tǒng)中的C4a、C5a為中性粒細胞和單核-巨噬細胞的趨化因子，可趨化和激活這些吞噬細胞聚集到炎癥部位，誘發(fā)炎癥反應并促進動脈粥樣硬化形成［4］。纖維凝膠蛋白（Ficolin）是人血清補體凝集素，可識別并結合病原微生物表面的病原相關模式分子（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs），通過激活補體系統(tǒng)的凝集素途徑吞噬和溶解病原體，進而介導天然免疫應答過程［5-6］。Ficolin-2、Ficolin-3 是Ficolin 家族關鍵因子，與PAMPs特異性結合后通過凝集素途徑激活并活化補體，啟動免疫學效應而參與肺結核［7］、非酒精性脂肪肝［8］等疾病的發(fā)生、發(fā)展過程。本研究旨在探討Ficolin-2、Ficolin-3 與冠心病冠狀動脈狹窄程度的關系及對MACEs的預測價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月—2021年12月大連大學附屬新華醫(yī)院收治的137例穩(wěn)定期冠心病患者（冠心病組）137例，男75例，女62 例，年齡57～73 歲，平均（63.52±8.19）歲，體質量指數（BMI）21～26 kg/m2，平均（22.38±1.56）kg/m2；符合穩(wěn)定型冠心病的診斷標準［9］。納入標準：年齡≥18 歲；能完成血清Ficolin-2、Ficolin-3 檢測；隨訪配合度較好且重要臨床病歷資料完整。排除標準：妊娠期及哺乳期；伴肝、腎功能嚴重損傷；合并甲狀腺疾病或者結締組織病變者；伴急、慢性炎癥反應性疾??；伴自身免疫性疾病；合并其他心臟疾病患者；需要行急診冠狀動脈支架植入術者；凝血功能障礙者；對對比劑或碘過敏者；惡性腫瘤及精神疾病者。

選取同期性別、年齡與冠心病患者相近的健康體檢者60例為對照組，男33 例，女27 例，年齡53～76 歲，平均（61.30±8.75）歲，BMI 22～26 kg/m2，平均（22.13±2.02）kg/m2。對照組經冠狀動脈造影檢查證實無心臟疾病，近期內也無其他急慢性疾病史和外傷史，未服用任何藥物。2組性別（χ2=0.001）、年齡（t=1.172）及BMI（t=0.945）比較差異無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05），具有可比性。患者及家屬均在知情同意書上簽字，本研究得到醫(yī)院倫理委員會的批準（201811004）。

1.2 冠脈狹窄程度積分法（Gensini）評估冠狀動脈狹窄程度

參照文獻［10］，Gensini評分總分165分，評分越高，冠狀動脈狹窄程度越嚴重。根據Gensini 評分，將冠心病患者分為輕度組（0～20分）56例、中度組（21～60分）49例和重度組（≥61分）32例。

1.3 臨床資料收集

收集患者冠心病病程、吸煙史（吸煙＞1 支/d，且超過1年）、飲酒史（＞1次/周，且連續(xù)或累積時間＞6個月）、心血管病家族史、糖尿病史，冠狀動脈病變支數。入院時的實驗室生化指標水平包括空腹血糖（FBG）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。FBG采用葡萄糖氧化酶法檢測，TG、TC、HDL-C、LDL-C 采用AU5800 全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司）檢測。

1.4 血清Ficolin-2、Ficolin-3檢測

收集各組入院次日清晨空腹肘正中靜脈血4 mL，室溫下于含EDTA抗凝試管中靜置1 h，3 000 r/min離心10 min，離心半徑12 cm，留取血清置于-70 ℃冰箱中保存，留待檢測。采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清Ficolin-2、Ficolin-3 水平，試劑盒購自于武漢菲恩生物科技有限公司，檢測儀器為Bio-Rad 680酶標儀。操作過程嚴格按照試劑盒上說明進行。

1.5 隨訪

冠心病患者出院后均隨訪3個月，隨訪方式為門診隨訪，隨訪終點為MACEs，包括靶血管再次血運重建、非致死性心肌梗死、心源性死亡。未發(fā)生MACEs 者為預后良好組（108例），反之為預后不良組（29例）。

1.6 統(tǒng)計學方法

采用SAS 9.4軟件進行數據分析。符合正態(tài)分布的計量資料以±s表示，多組比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用Dunnett-t檢驗，2組比較采用2獨立樣本t檢驗。計數資料以例（%）表示，比較采用χ2檢驗。相關性分析采用Pearson相關，影響因素分析采用Logistic回歸，繪制受試者工作特征（ROC）曲線，并計算曲線下面積（AUC）評估血清Ficolin-2、Ficolin-3對預后不良的預測價值，采用Z檢驗對各指標間的效能進行比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 冠心病組與對照組血清Ficolin-2、Ficolin-3 水平比較

冠心病組血清Ficolin-2、Ficolin-3 水平低于對照組（P＜0.01），見表1。

Tab.1 Comparison of serum Ficolin-2 and Ficolin-3 levels between the coronary heart disease group and the control group表1 冠心病組與對照組血清Ficolin-2、Ficolin-3水平比較（mg/L，±s）

Tab.1 Comparison of serum Ficolin-2 and Ficolin-3 levels between the coronary heart disease group and the control group表1 冠心病組與對照組血清Ficolin-2、Ficolin-3水平比較（mg/L，±s）

＊＊P＜0.01。

組別對照組冠心病組t n 60 137 Ficolin-2 15.39±3.17 8.76±2.52 9.062＊＊Ficolin-3 22.64±4.83 13.09±4.11 14.219＊＊

2.2 不同冠脈狹窄嚴重程度冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3水平比較

輕、中、重度組血清Ficolin-2、Ficolin-3 水平依次降低（P＜0.05），見表2。

Tab.2 Comparison of serum Ficolin-2 and Ficolin-3 levels between coronary artery disease patients with different severity of coronary artery stenosis表2 不同冠脈狹窄嚴重程度冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3水平比較（mg/L，±s）

Tab.2 Comparison of serum Ficolin-2 and Ficolin-3 levels between coronary artery disease patients with different severity of coronary artery stenosis表2 不同冠脈狹窄嚴重程度冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3水平比較（mg/L，±s）

＊＊P＜0.01；a與輕度組比較，b與中度組比較，均P＜0.05。

組別輕度組中度組重度組F n 56 49 32 Ficolin-2 10.25±1.98 8.37±2.05a 6.80±1.53ab 34.832＊＊Ficolin-3 15.61±2.78 12.59±2.34a 10.46±2.80ab 41.853＊＊

2.3 冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3與Gensini評分的關系

冠心病組Gensini 評分為（42.70±8.41）分，冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3 與Gensini 評分呈負相關（r分別為-0.708和-0.722，P＜0.05）。

2.4 預后良好組和預后不良組一般資料比較

出院后3 個月內9 例患者需要靶血管再次血運重建，19 例出現非致死性心肌梗死，1 例心源性死亡。與預后不良組比較，預后良好組冠狀動脈單支病變構成比，血清Ficolin-2、Ficolin-3水平較高（P＜0.05），其他指標差異均無統(tǒng)計學意義。見表3。

Tab.3 Comparison of clinical data of patients with coronary heart disease between the good prognosis group and the poor prognosis group表3 預后良好組和預后不良組冠心病患者臨床資料比較

2.5 冠心病患者預后不良影響因素分析

以冠心病患者是否發(fā)生預后不良為因變量（是=1，否=0），冠狀動脈病變支數（單支＝0，多支＝1）、Ficolin-2、Ficolin-3 為自變量，多因素Logistic 回歸結果顯示，冠狀動脈多支病變是冠心病患者預后不良的危險因素，較高水平Ficolin-2、Ficolin-3是其保護因素，見表4。

Tab.4 Multivariate Logistic regression analysis of poor prognosis in patients with coronary heart disease表4 冠心病患者預后不良的多因素Logistic回歸分析

2.6 血清Ficolin-2、Ficolin-3 對冠心病患者預后不良的預測價值

Ficolin-2、Ficolin-3 對冠心病患者預后聯合檢測方程為logit（Y）=-8.759+0.372×（冠狀動脈病變支數）-0.205×（Ficolin-2）-1.759×（Ficolin-3），指標聯合的AUC 高于單一指標（Z分別為3.186 和2.953，P＜0.05），見圖1、表5。

Fig.1 ROC curves of serum Ficolin-2 and Ficolin-3 in predicting poor prognosis in patients with coronary heart disease圖1 血清Ficolin-2、Ficolin-3預測冠心病患者預后不良的ROC曲線

Tab.5 The predictive value of serum Ficolin-2 and Ficolin-3 on poor prognosis of patients with coronary heart disease表5 血清Ficolin-2、Ficolin-3對冠心病患者預后不良的預測價值

3 討論

冠狀動脈粥樣硬化是冠心病發(fā)病的基礎，動脈粥樣硬化引起血管狹窄甚至堵塞導致血供不足，使心臟功能下降而出現各種臨床癥狀［11-13］。補體是人體固有的免疫組成部分，生理狀態(tài)下以無活性的酶前體形式存在，炎癥反應可以誘發(fā)補體生成，而補體系統(tǒng)激活產生的C3a 和C5a 等具有活性的片段可以趨化平滑肌收縮，引起并加重炎癥反應，損傷組織而誘導動脈粥樣硬化［14］。因此，補體系統(tǒng)激活介導的炎癥反應對動脈粥樣硬化具有促進作用［15］。Ficolin編碼基因在人第9 號染色體上，含8 個外顯子，Ficolin主要在肝臟內合成，并在人體內廣泛分布，其結構與甘露聚糖結合凝集素類似。Ficolin與乙酰葡萄糖以及細菌、病毒等病原體結合后，通過激活補體的凝聚素途徑介導人體感染早期的免疫過程，同時，Ficolin 與病原體表面PAMPs 特異性結合后可激活甘露糖結合凝集素相關的絲氨酸蛋白酶，使其裂解為補體而參與吞噬和清除病原體［16-17］。目前發(fā)現的3 類Ficolin 包括Ficolin-1、Ficolin-2 和Ficolin-3，其中Ficolin-2 在3 種亞型中最先最被克隆，是由三鏈亞單位組成的寡聚體，每一條肽鏈的相對分子量為35 000，結構與甘露糖結合凝集素相似。在感染早期，炎癥反應促進炎性細胞因子釋放，刺激肝細胞大量合成和分泌Ficolin-2，并與其配體PAMPs 特異性結合后激活甘露糖結合凝集素相關絲氨酸蛋白酶，使之活化為具有水解補體活性的酶，進而裂解C4和C2 形成C3 轉化酶（C4b2b）并啟動抗感染機制［18］。然而，補體系統(tǒng)過度激活會抑制Ficolin-2的表達，進而導致炎癥反應。研究顯示，Ficolin-2 表達降低通過下調機體細胞免疫功能，從而加速結核分枝桿菌的致病進程［7］。Ficolin-3 是由FCN3 基因編碼的寡聚糖，在識別糖類以及調理吞噬等過程中發(fā)揮重要功能，并通過介導補體系統(tǒng)的凝集素途徑啟動并增強炎癥反應［19］。賈耀輝等［20］研究表明，Ficolin-3 表達下調加快了腦損傷患者的炎癥過程，其表達水平與病情嚴重程度及預后關系密切。Troldborg等［21］發(fā)現，Ficolin-3 低水平表達可以激活補體系統(tǒng)并使其異?；钴S，進而增加2 型糖尿病患者頸動脈粥樣硬化發(fā)生風險。本研究發(fā)現，冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3 水平較健康體檢者明顯降低，提示該指標參與了冠心病的發(fā)病過程。炎癥反應初期，肝臟合成并釋放Ficolin-2、Ficolin-3 激活補體凝集素途徑發(fā)揮天然免疫功能，但是隨著炎癥的不斷增強，Ficolin-2、Ficolin-3過度消耗，同時炎癥過度激活補體系統(tǒng)會加速動脈粥樣硬化形成［19，22］。本研究進一步分析顯示，冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3水平與Gensini評分呈負相關，表明該指標可以評估冠心病患者冠狀動脈狹窄程度，從而為臨床制定針對性治療方案提供參考。

冠心病患者出院后易出現MACEs，嚴重影響患者預后，如能早期預測患者預后不良，對臨床實施干預措施具有重要價值。本研究發(fā)現，預后不良患者血清Ficolin-2、Ficolin-3水平低于預后良好組，多因素Logistic 回歸結果發(fā)現Ficolin-2、Ficolin-3 升高是冠心病患者預后不良的保護因素。ROC曲線結果顯示，血清Ficolin-2、Ficolin-3可預測冠心病患者預后不良發(fā)生風險，而聯合檢測對預后不良的預測價值尤其是敏感度明顯提高。

綜上所述，冠心病患者血清Ficolin-2、Ficolin-3水平降低，并與冠狀動脈狹窄程度密切相關，聯合檢測兩指標對冠心病患者預后不良具有較好的預測價值。本研究為單中心的小樣本研究，所得結果有待通過多中心、前瞻性隊列研究進一步證實。