周建峰，葉大洲，杜蓓蓓

（1.溫州市質(zhì)量技術(shù)檢測科學(xué)研究院，浙江 溫州 325000；2.浙江一鳴食品股份有限公司，浙江 溫州 325000）

為了提高豆芽菜產(chǎn)量，有不法商販在種植生產(chǎn)過程中違規(guī)使用植物生長調(diào)節(jié)劑，導(dǎo)致相關(guān)“毒豆芽”的安全事件頻發(fā)，使得消費(fèi)者對(duì)購買食用豆芽菜存在安全憂慮[1]。植物生長調(diào)節(jié)劑，俗稱生長素，是從生物中提取的天然植物激素或者是人工合成的對(duì)植物生長發(fā)育有調(diào)節(jié)作用的化學(xué)物質(zhì)，它的生理作用與相關(guān)內(nèi)源激素相似，能夠加快植物根的形成、維管束的分化、葉片的擴(kuò)大生長。它在人體內(nèi)能夠通過新陳代謝排出體外，正確使用植物生長調(diào)節(jié)劑，使得其在豆芽菜中的殘留量控制在適量范圍內(nèi)，不會(huì)對(duì)人體造成影響。但長時(shí)間食用含過量植物生長調(diào)節(jié)劑的豆芽菜等食品會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生蓄積影響[2]。國家食品藥品監(jiān)督管理總局、計(jì)劃生育委員會(huì)和農(nóng)業(yè)部聯(lián)合發(fā)布了關(guān)于豆芽生產(chǎn)過程中禁止使用6 -芐基腺嘌呤等物質(zhì)的公告（2015 年第11 號(hào)），明確表示4 -氯苯氧乙酸(4-CPA)、6-芐基腺嘌呤（6-BAP）等作為低毒農(nóng)藥登記管理并做了使用范圍的限定，豆芽生產(chǎn)不在可使用范圍內(nèi)[3]。

國內(nèi)外關(guān)于豆芽菜中植物生長調(diào)節(jié)非法添加的方法開發(fā)樣品檢測文獻(xiàn)很多，在針對(duì)各種實(shí)際豆芽菜樣品中的測定中，4-氯苯氧乙酸(4-CPA)、6- 芐基腺嘌呤（6-BA） 和吲哚乙酸(IAA)的檢出率比較高。劉印平等人[4]對(duì)河北省近10 個(gè)區(qū)市31 份綠豆芽和21 份黃豆芽中豆芽菜進(jìn)行了食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，吲哚乙酸（IAA） 檢出率為66.67%，含量為24~140 μg/kg。杜興蘭等人[5]對(duì)聊城市10 批市售豆芽菜進(jìn)行檢測，吲哚乙酸（IAA） 檢出率為66.67%，含量在7.2~498 μg/kg。其他關(guān)于豆芽菜的植物生長調(diào)節(jié)測定的文獻(xiàn)中，也發(fā)現(xiàn)存在各個(gè)不同水平的吲哚乙酸（IAA）。我國僅僅發(fā)布了關(guān)于禁止4-CPA、6-BAP在豆芽中使用的公告，GB 2763—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中?農(nóng)藥最大殘留限量》中對(duì)2,4-D 在豆芽中的殘留限量沒有做具體的規(guī)定，吲哚乙酸（IAA） 也同樣沒有被列出[6]。

吲哚乙酸（Indole-3-acetic acid，indol-yl-3-acetic acid） 是植物中普遍存在的內(nèi)源生長素，又名生長素、茁長素或異生長素，屬于吲哚類化合物?，F(xiàn)行的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)豆芽中植物生長調(diào)節(jié)劑的測定（BJS 201703）[7]確定了吲哚乙酸（IAA） 的測定方法，但鑒于現(xiàn)已有的文獻(xiàn)資料，吲哚乙酸（IAA） 檢出含量范圍跨度較大，很難判定是否屬于商家企業(yè)違法添加。擬開展一項(xiàng)豆芽菜的吲哚乙酸（IAA） 含量調(diào)查，對(duì)其含量進(jìn)行總結(jié)分析，為后續(xù)的豆芽菜生長激素的非法添加等食品安全檢驗(yàn)檢測工作和風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)督工作提供一定的相關(guān)參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

吲哚乙酸標(biāo)純品，純度98.5%，上海安譜公司提供；甲醇、乙腈、甲酸、乙酸銨，均為色譜純，上海安譜公司提供；鹽包：4 g 無水硫酸鎂和1 g 無水乙酸鈉，北京艾德森公司提供；QuEChERS 離心管（內(nèi)含300 mg 無水硫酸鎂和100 mg C18），北京艾德森公司提供。

1.2 儀器和設(shè)備

Agilent1290/6470 型三重四極桿液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜，配ESI 源，美國安捷倫產(chǎn)品；SIGMA 3K15 型冷凍離心機(jī)（轉(zhuǎn)速≥5 000 r/min），美國Sigma 公司產(chǎn)品；IKA MS3 型渦旋振蕩器，德國IKA 公司產(chǎn)品；氮吹儀，上海安譜公司產(chǎn)品；針式濾器，0.22 μm 有機(jī)相微孔濾膜，上海安譜公司產(chǎn)品。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

（1） 精密稱取吲哚乙酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10 mg，轉(zhuǎn)移到10 mL 容量瓶中，用甲醇試劑溶解并定容至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度各為1 mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)貯備液，-20 ℃下保存。

（2） 中間工作液（10 μg/mL）：精密量取吲哚乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1 mg/mL） 1 mL，置于100 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度均為10 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液A。

（3） 空白基質(zhì)提取液：稱取空白試樣各10.0 g（精確至0.01 g），分別置于50 mL 具塞離心管中，與樣品同法處理，獲得空白基質(zhì)提取液。

臨用時(shí)，用空白基質(zhì)提取液配制成質(zhì)量濃度為10，20，40，100，200 ng/mL 的工作液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（最高質(zhì)量濃度點(diǎn)可依據(jù)待測樣品濃度增加）。

吲哚乙酸系列曲線MRM 掃描圖見圖1，對(duì)照品、陽性樣品和空白樣品MRM 掃描圖見圖2。

圖1 吲哚乙酸系列曲線MRM 掃描圖

圖2 對(duì)照品、陽性樣品和空白樣品MRM 掃描圖

1.3.2 試驗(yàn)檢測過程

（1） 提取方式。用天平準(zhǔn)確稱取10.0 g 待測樣品，置于50 mL 塑料密封離心管中，準(zhǔn)確倒入20 mL的乙腈溶液（含1%甲酸），均質(zhì)2 min，加入鹽包（4 g 無水硫酸鎂和1 g 無水乙酸鈉），旋渦混合1 min，以轉(zhuǎn)速8 000 r/min 離心5 min 使兩相分層。

（2） 凈化方式。準(zhǔn)確移取乙腈層溶液4 mL，轉(zhuǎn)移到凈化離心管（含300 mg 無水硫酸鎂和100 mg C18） 中，旋渦混合1 min，以轉(zhuǎn)速10 000 r/min 離心5 min，移取全部上清液于10 mL 離心管中，于40 ℃水浴中氮吹近干，用甲醇試劑定容至1 mL，旋渦混合1 min，以轉(zhuǎn)速10 000 r/min 離心5 min，上清液經(jīng)0.22 μm 有機(jī)相濾膜過濾后，取待測液，上機(jī)測定。

1.3.3 色譜和質(zhì)譜條件

（1） 超高效液相色譜柱。Zorbax Eclipse Plus C18（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）；液相流速0.3 mL/min，進(jìn)樣體積1 μL，柱溫箱溫度30 ℃，流動(dòng)相A：甲醇（含0.1%甲酸和5 mmoL/L 乙酸銨）；流動(dòng)相B：水（含0.1%甲酸和5 mmoL/L 乙酸銨）；洗脫比例為0~2.0 min，30%A~70%A；2.0~6.0 min，70%A~70%A。

（2） 離子源參數(shù)。電噴霧離子源（ESI 源），正離子模式掃描，多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），霧化器（GS1） 45 L/min，輔助氣壓力（GS2） 35 L/min，離子源溫度（TEM）：500 ℃。

吲哚乙酸質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 吲哚乙酸質(zhì)譜參數(shù)

2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分析

2.1 分組試驗(yàn)

以未發(fā)芽的黃豆和綠豆作為研究對(duì)象，分別獲取5 批次，共10 批次樣品，依據(jù)1.3.2 步驟進(jìn)行檢測。

以上述其中未發(fā)芽的黃豆和綠豆進(jìn)行水培發(fā)芽，分別定期摘取10 批次黃豆芽和綠豆芽，共20 批次作為研究對(duì)象，依據(jù)1.3.2 步驟進(jìn)行檢測。

以市場購自的黃豆芽和綠豆芽為研究對(duì)象，分別獲取5 批次，共10 批次樣品，依據(jù)1.3.2 步驟進(jìn)行檢測。

2.2 數(shù)據(jù)分析

通過Masshunter 工作站及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)采集分析質(zhì)譜圖，空白樣品配標(biāo)外標(biāo)法定量，采用Excel 2007 進(jìn)行數(shù)據(jù)表格和圖表處理。

吲哚乙酸實(shí)際樣品檢測數(shù)據(jù)見圖3。

圖3 吲哚乙酸實(shí)際樣品檢測數(shù)據(jù)

由圖3 可知，吲哚乙酸在樣品中的狀態(tài)分2 種情況，在豆芽未發(fā)芽，呈種子階段時(shí)的黃豆和綠豆中，吲哚乙酸均為未檢出。利用購買的黃豆和綠豆進(jìn)行水培自發(fā)形成豆芽后，經(jīng)過定期采摘并進(jìn)行制樣檢測，發(fā)現(xiàn)在成長階段中的豆芽，自身開始產(chǎn)生吲哚乙酸，依據(jù)試驗(yàn)分析，含量為0.007~0.064 mg/kg（僅限于本試驗(yàn)研究中），超過方法定量限水平的有17 批次，未超過方法定量限水平的有3 批次，相當(dāng)于檢出率為85.0%（方法定量限為0.010 mg/kg）。從市場購買的黃豆芽和綠豆芽共計(jì)10 批次，均有吲哚乙酸檢出，其中有8 批次含量在0.010~0.188 mg/kg，而另外2 批次含量水平尤其較高，分別為綠豆芽1.597 mg/kg 和黃豆芽4.979 mg/kg，檢出率為100.0%。

3 結(jié)論

通過試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析和研究發(fā)現(xiàn)，在豆芽成長代謝過程中，自然產(chǎn)生部分內(nèi)源性生長調(diào)節(jié)劑吲哚乙酸，但是其含量會(huì)保持在穩(wěn)定的低含量水平（依據(jù)試驗(yàn)研究顯示為0.100 mg/kg 含量水平以下），保證其自身正常生長，若超過該水平，則可能有一定性的外部添加可能。目前，食品安全抽檢細(xì)則和食品添加標(biāo)準(zhǔn)并無針對(duì)豆芽產(chǎn)品中吲哚乙酸的限量強(qiáng)制要求，試驗(yàn)的數(shù)據(jù)可為檢測機(jī)構(gòu)的后續(xù)實(shí)際檢測作為參考分析。