◎ 潘小恒

（椰樹集團(tuán)，海南 ?？?570102）

近年，菊花作為天然保健品越來越受到人們的關(guān)注[1]。其具有廣泛的藥理作用，包括抗菌、消炎、降壓、降糖和抗氧化等。同時(shí)，菊花提取物可以作為天然的食品添加劑，如抗氧化劑和保鮮劑等。同時(shí)，菊花還可以用于制作茶和酒等健康飲品，具有多種保健功效[2]。

雖然菊花對(duì)人體的益處得到了廣泛認(rèn)可，但對(duì)于其食用安全性仍然需要進(jìn)行科學(xué)評(píng)估。大多數(shù)菊花制品在加工過程中，都會(huì)使用二氧化硫進(jìn)行熏蒸處理，以殺菌防腐、保證菊花產(chǎn)品的色澤鮮艷[3]。二氧化硫是一種化學(xué)物質(zhì)，是一種強(qiáng)烈的刺激性氣體，會(huì)對(duì)人體的呼吸系統(tǒng)、皮膚、眼睛等器官產(chǎn)生刺激和傷害。如果人們過量攝入二氧化硫，可能會(huì)出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹瀉等胃腸道反應(yīng)，還可能對(duì)人體的肝腎等器官造成損害[4]。因此，開發(fā)一種快速測(cè)定菊花中二氧化硫含量的測(cè)定方法，意義重大。二氧化硫在水中通常以亞硫酸鹽的形式存在，因此，本文在已有研究的基礎(chǔ)上，提出了一種快速測(cè)定菊花中二氧化硫的液相色譜方法[5]，可用于菊花中二氧化硫的測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：Waters Alliance E2695高效液相色譜儀（Waters）；紫外-可見分光光度計(jì)（ZX11-UV-1000）；PWN225DZH型電子天平（奧豪斯）亞硫酸鈉對(duì)照品來源Sigma Aldrich。試劑：四丁基硫酸氫銨、磷酸氫二鈉、甲醇購自天津賽孚瑞科技有限公司。

1.2 樣品選擇

選擇不同來源的6個(gè)批次的菊花樣品。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品中二氧化硫的萃取

取干菊花樣品適量，粉碎后精密稱取20 g，加水98 mL和1 mol/L的鹽酸溶液2 mL，超聲120 w萃取60 min后，取萃取液，過0.22 μm水系濾膜，對(duì)樣品進(jìn)行HPLC。

1.3.2 對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備

取亞硫酸鈉對(duì)照品適量，加水溶解并稀釋制成100 μg/mL的溶液。

1.3.3 最大吸收波長的確定

取亞硫酸鈉對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，加水稀釋制成10 μg/mL的溶液。并在190~400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果顯示最大吸收波長為214 nm。

1.3.4 主要儀器參數(shù)

色譜條件：選擇島津WondaCract ODS-2色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）。柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20 μL；流速：1 mL/min。流動(dòng)相：四丁基硫酸氫銨-磷酸氫二鈉溶液（四丁基硫酸氫銨2.5 mmol/L，磷酸氫二鈉5.0 mmol/L，用1 mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8.5）-甲醇（80:20），結(jié)果如表1所示。

表1 洗脫程序表

1.3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液的配置

精密量取亞硫酸鈉對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.1 mL、0.5 mL、0.75 mL、1.0 mL、1.25 mL、1.5 mL，分別至100 mL容量瓶中，用水分別定容至刻度線，即得濃度分別為0.1 μg/mL、0.5 μg/mL、0.75 μg/mL、1.0 μg/mL、1.25 μg/mL、1.5 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液。接著，對(duì)上述溶液進(jìn)樣分析，并進(jìn)行線性回歸分析。

1.3.6 二氧化硫的檢測(cè)限與定量限

取亞硫酸鈉對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 μg/mL）在擬定的色譜條件下進(jìn)行分析，根據(jù)分析結(jié)果逐級(jí)稀釋樣品濃度，并計(jì)算二氧化硫的檢測(cè)限（S/N=3）和定量限（S/N=10）。

1.3.7 二氧化硫的重復(fù)性

取干菊花樣品適量，粉碎后精密稱取20 g，加水97 mL和1 mol/L的鹽酸溶液2 mL，加入亞硫酸鈉對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)貯備液1 mL，總萃取體積為100 mL。為保證檢測(cè)濃度的一致性。超聲120 w萃取60 min后，取萃取液，過0.22 μm水系濾膜。同法，制備樣品6份，并對(duì)樣品進(jìn)行HPLC。

1.3.8 樣品中二氧化硫的加標(biāo)回收率測(cè)定

取干菊花樣品適量，粉碎后精密稱取20 g，加水適量，讓三個(gè)濃度加標(biāo)樣品加水量分別為98.2 mL、98 mL、97.8 mL。（保證總萃取體積為100 mL）和1 mol/L的鹽酸溶液2 mL，分別加入亞硫酸鈉對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL，超聲120 w萃取60 min后，取萃取液，過0.22 μm水系濾膜，并對(duì)樣品進(jìn)行HPLC。

1.3.9 樣品中二氧化硫的測(cè)定

參照“1.3.1”項(xiàng)下操作方法配置樣品，并計(jì)算菊花中的二氧化硫的量。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定結(jié)果

在擬定的色譜條件下，二氧化硫在0.1 μg/mL~15 μg/mL范圍內(nèi)，線性方程為y= 273.72x+ 2.431 1，R2=0.999 5，如表2所示。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)表

2.2 檢測(cè)限和定量限結(jié)果

二氧化硫的檢測(cè)限（S/N=3）為0.002 3 μg/mL，定量限（S/N=10）為0.007 0 μg/mL。

2.3 二氧化硫的重復(fù)性測(cè)定結(jié)果

二氧化硫的重復(fù)性結(jié)果見表3，結(jié)果顯示，6份樣品測(cè)定結(jié)果的RSD值為2.51%，證明本方法測(cè)定樣品中二氧化硫重復(fù)性良好。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表

2.4 樣品中二氧化硫的加標(biāo)回收率測(cè)定結(jié)果

菊花樣品中，二氧化硫的加標(biāo)回收率結(jié)果見表4。其中，二氧化硫的加標(biāo)回收率為95.29%~99.06%，RSD值為1.40%。

表4 菊花樣品中二氧化硫的加標(biāo)回收率測(cè)定結(jié)果表

2.5 樣品中二氧化硫的測(cè)定結(jié)果

本研究采用“1.3.1”處理方法制備樣品，對(duì)市面上銷售的6個(gè)不同廠家的菊花樣品進(jìn)行二氧化硫含量測(cè)定，結(jié)果見表5。

表5 6種不同廠家的菊花樣品的二氧化硫測(cè)定結(jié)果表（n=3）

參考GB 5009.34—2022“食品中二氧化硫的測(cè)定”中第一法酸堿滴定法，本文對(duì)上述6種不同廠家的菊花樣品的二氧化硫進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表6。

表6 酸堿滴定法6種不同廠家的菊花樣品的二氧化硫測(cè)定結(jié)果表（n=3）

從表5和表6的測(cè)定結(jié)果對(duì)比可以看出，采用GB 5009.34—2022方法測(cè)定的菊花中的二氧化硫含量結(jié)果，與本研究開發(fā)的液相色譜法相比，二氧化硫的含量結(jié)果接近，且均小于液相色譜法測(cè)定結(jié)果。其中，酸堿滴定法測(cè)得結(jié)果中RSD最大為4.3%，小于液相色譜法測(cè)定結(jié)果的2.6%，說明液相色譜法測(cè)定結(jié)果的離散度更小，結(jié)果更為準(zhǔn)確。

3 結(jié)論

二氧化硫在水中通常以亞硫酸鹽的形式存在，因此，本文在已有研究的基礎(chǔ)上，提出了一種快速測(cè)定菊花中二氧化硫的液相色譜方法。以214 nm為檢測(cè)波長；以四丁基硫酸氫銨-磷酸氫二鈉溶液（四丁基硫酸氫銨2.5 mmol/L，磷酸氫二鈉5.0 mmol/L，用1 mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8.5）:甲醇（80:20）為流動(dòng)相，二氧化硫在0.1 μg/mL~1.5 μg/mL范圍內(nèi)，線性方程為y= 273.72x+ 2.431 1，R2=0.999 5；檢測(cè)限為0.002 3 μg/mL；定量限為0.007 0 μg/mL；重復(fù)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.15%；回收率為95.29%~99.06%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.40%。對(duì)擬定的分析方法驗(yàn)證結(jié)果表明，與酸堿滴定法相比，使用本方法測(cè)定菊花中的二氧化硫具有較高的準(zhǔn)確度。