扶 蝶，楊 剛，黨 娟

（六盤(pán)水市水城區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 六盤(pán)水 553699）

0 引言

魚(yú)腥草（Houttuynia cordata Thumb），又名側(cè)耳根、豬鼻孔、折耳根，是三白草科蕺菜屬草本植物[1]，因其氣味類(lèi)似魚(yú)腥味，故而得名魚(yú)腥草[2]，因其獨(dú)特的魚(yú)腥味味道，也使得魚(yú)腥草成為人們餐桌上的一道野菜佳肴，也是貴州的一種特色菜品[3-4]。魚(yú)腥草富含豐富的蛋白質(zhì)、維C、可溶性糖等營(yíng)養(yǎng)成分[5-6]。此外，魚(yú)腥草還具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗菌、抗病毒、利尿、防輻射、降血糖、消腫排膿、清熱解寒、利尿同淋等功效[7-8]。同時(shí)，魚(yú)腥草也具有很高的食用價(jià)值，是衛(wèi)生部確定的藥食兩用的重要植物資源之一[9]。

酚類(lèi)化合物是植物生長(zhǎng)自然選擇過(guò)程中產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，并且廣泛存在于植物中[10-11]。天然來(lái)源的酚類(lèi)化合物分子量小，具有抗氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器、擴(kuò)張毛細(xì)血管、防動(dòng)脈硬化、保護(hù)心血管及疏通微循環(huán)的功能[7，12-13]。魚(yú)腥草中次生代謝產(chǎn)物主要有酚類(lèi)化合物、揮發(fā)油、生物堿、木質(zhì)素和有機(jī)酸等物質(zhì)[14]，其中，酚類(lèi)類(lèi)化合物含量較高，主要包括綠原酸[15-16]、阿福豆苷、蘆丁[17]、槲皮苷[18]、槲皮素[19-20]、異槲皮苷等六類(lèi)化合物。魚(yú)腥草中酚類(lèi)物質(zhì)的提取方法有水提法、有機(jī)溶劑提取法、水與有機(jī)溶劑混合提取法、超聲波輔助提取法[21]等；魚(yú)腥草中酚類(lèi)物質(zhì)的測(cè)定方法主要有分光光度法、高效液相色譜法（HPLC）、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法及毛細(xì)管電泳-電化學(xué)檢測(cè)（CE-ED）[22]等方法。主要闡述以超聲提取法從魚(yú)腥草中提取酚類(lèi)物質(zhì)，再以高效液相色譜法測(cè)定其中此6 種主要酚類(lèi)化合物含量的方法，其優(yōu)點(diǎn)在于精密度高、重現(xiàn)性好等。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 試驗(yàn)儀器

LC-20AT 型高效液相色譜儀及LC Solution2.50工作站，25 μL 手動(dòng)進(jìn)樣器；AL104 型電子分析天平，Mettler 儀器公司產(chǎn)品；KQ-500DE 型醫(yī)用超聲波清洗機(jī)（功率360 W，頻率35 kHz），北京醫(yī)療設(shè)備二廠產(chǎn)品；M305880 型全玻璃微孔濾膜過(guò)濾器，恒溫干燥烘箱，天津市斯特儀器有限公司產(chǎn)品；80-2 型離心機(jī)，江蘇金達(dá)產(chǎn)品；1.5 mL 玻璃樣品瓶，安捷倫科技有限公司產(chǎn)品。

1.1.2 試驗(yàn)藥品與試劑

甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），甲酸（分析純），購(gòu)自當(dāng)?shù)鼗瘜W(xué)試劑銷(xiāo)售公司；綠原酸、蘆丁、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品，北京百靈威科技有限公司提供；純凈水，娃哈哈集團(tuán)有限公司提供。

1.1.3 分析材料

試驗(yàn)采集的魚(yú)腥草樣品來(lái)源于貴陽(yáng)市花溪區(qū)、云巖區(qū)、觀山湖區(qū)、南明區(qū)和烏當(dāng)區(qū)。

魚(yú)腥草樣品的來(lái)源信息見(jiàn)表1。

表1 魚(yú)腥草樣品的來(lái)源信息

1.2 分析方法

測(cè)定魚(yú)腥草中綠原酸、蘆丁、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷和槲皮素含量的分析方法主要參照已報(bào)道的文獻(xiàn)[3]進(jìn)行分析。

1.2.1 對(duì)照品溶液的配制

分別稱(chēng)量綠原酸、蘆丁、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素對(duì)照品用甲醇配置成1 mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，根據(jù)試驗(yàn)需要配置成各組分濃度分別為24.93，25.16，24.80，25.24，24.89，24.68 μmol/L，保存于冰箱中，待用。

1.2.2 HPLC 條件

高效液相色譜儀HPLC20-AT，配有二極管陣列檢測(cè)器DAD 及Lc-solution 2.50 色譜工作站，色譜柱：Him-packCLC-ODS（150 mm×6.0 mm，5 μm，SN：61526630）。柱溫：35 ℃，流動(dòng)相：A 相（有機(jī)相）：甲醇∶乙腈= 5∶11（V/V），B 相（水相）：甲酸水溶液（0.1%，V/V），梯度洗脫程序?yàn)楸? 所示，檢測(cè)波長(zhǎng)為345 nm。

表2 梯度洗脫程序

梯度洗脫程序見(jiàn)表2。

1.2.3 魚(yú)腥草樣品處理

將采集的魚(yú)腥草葉片，洗凈表面泥垢，選取長(zhǎng)勢(shì)相當(dāng)?shù)聂~(yú)腥草葉子，放在通風(fēng)處自然陰干，將魚(yú)腥草葉子用剪刀剪碎，先在電子分析天平上稱(chēng)取空瓶子質(zhì)量，去皮，再精確稱(chēng)取剪碎后的魚(yú)腥草顆粒0.300 0 g，每一份貼上標(biāo)簽，之后加入3.0 mL 甲醇，密封、靜置浸泡15 min，將魚(yú)腥草甲醇混合液容器放在KQ-500DE 型醫(yī)用超聲波清洗機(jī)上，超聲提取30 min，提取結(jié)束后取出，靜置冷卻5 min，采用0.45 μm 有機(jī)濾膜對(duì)提取液進(jìn)行過(guò)濾，濾液保存于4 ℃冰箱中，等待下一步用于高效液相色譜分析。

1.2.4 魚(yú)腥草葉片6 種酚類(lèi)物質(zhì)含量的測(cè)定

將綠原酸、蘆丁、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素混合標(biāo)樣溶液與魚(yú)腥草葉片待測(cè)樣品溶液分別進(jìn)樣，進(jìn)行HPLC 分析，依據(jù)外標(biāo)法，根據(jù)峰面積及濃度關(guān)系計(jì)算出樣品中各物質(zhì)含量。

對(duì)照品（a） 和典型魚(yú)腥草樣品（b，c） 的高效液相色譜圖見(jiàn)圖1，魚(yú)腥草樣品中6 種酚類(lèi)物質(zhì)的含量見(jiàn)表3。

圖1 對(duì)照品（a） 和典型魚(yú)腥草樣品（b，c） 的高效液相色譜圖

表3 魚(yú)腥草樣品中6 種酚類(lèi)物質(zhì)的含量

2 結(jié)果與分析

魚(yú)腥草樣品中綠原酸、蘆丁、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素的含量圖見(jiàn)圖2。

圖2 魚(yú)腥草樣品中綠原酸、蘆丁、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素的含量圖

表3 和圖2 顯示了來(lái)源貴陽(yáng)市花溪區(qū)、云巖區(qū)、觀山湖區(qū)、南明區(qū)和烏當(dāng)區(qū)29 個(gè)魚(yú)腥草樣品中綠原酸、蘆丁、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素含量的分析結(jié)果。結(jié)果顯示在不同地點(diǎn)，魚(yú)腥草綠原酸、蘆丁、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素含量差異存在差異，有些差異顯著。

由圖2 可知，在南明區(qū)魚(yú)腥草綠原酸含量最高，而其他含量較低；蘆丁含量在花溪區(qū)和南明區(qū)的樣品中均較高，但南明區(qū)也出現(xiàn)了含量最低的樣品；阿福豆苷含量的最高值出現(xiàn)在觀山湖區(qū)，最低值出現(xiàn)在花溪區(qū)的樣品中；異槲皮苷含量以花溪區(qū)的樣品為最高，烏當(dāng)區(qū)的含量較低；槲皮苷的含量在觀山湖區(qū)的樣品中有最大值，在幾個(gè)區(qū)中的含量分布顯著差異，槲皮素含量在花溪區(qū)有2 個(gè)樣點(diǎn)比較高，烏當(dāng)區(qū)也存在槲皮素含量較高的樣品，其他的含量都較低。

由表3 及圖2 可知，綠原酸、蘆丁、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素含量在貴陽(yáng)各個(gè)區(qū)的含量差異顯著?？傮w上看來(lái)，貴陽(yáng)各個(gè)區(qū)蘆丁、槲皮素含量總體較高，如在花溪區(qū)，編號(hào)HX-5，含量為1 179.63 mg/kg 和1 301.1 mg/kg，含量區(qū)間在未檢出至1 357.04 mg/kg，但各個(gè)地方的含量差異很大。除此之外，總體含量較高的是異槲皮苷，各個(gè)地區(qū)的異槲皮苷含量為26.45~554.97 mg/kg，各個(gè)地區(qū)的含量差異顯著。在有些樣品中，綠原酸與槲皮苷的總體含量相當(dāng)，但各個(gè)地方含量也存在差異，綠原酸含量最高為南明區(qū)（編號(hào)：NM-4），含量為637.54 mg/kg，槲皮苷含量總體看來(lái)差異不顯著，含量區(qū)間為6.68~356.52 mg/kg，槲皮苷的含量在此次的5 個(gè)區(qū)29 個(gè)樣品中出于較低的含量水平。整體含量最低的為阿福豆苷，含量最高僅為160.98 mg/kg，最低達(dá)到了5.80 mg/kg。

由以上試驗(yàn)中所測(cè)的貴陽(yáng)市花溪區(qū)、云巖區(qū)、觀山湖區(qū)、南明區(qū)、烏當(dāng)區(qū)等5 個(gè)區(qū)29 個(gè)樣品中綠原酸、蘆丁、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素的含量分布來(lái)看，雖然所選樣品都同屬貴州省貴陽(yáng)市，但是貴陽(yáng)市各個(gè)具體地方不同環(huán)境下生長(zhǎng)的魚(yú)腥草，其酚類(lèi)物質(zhì)的含量存在較長(zhǎng)差異。試驗(yàn)所選取的魚(yú)腥草葉子均為長(zhǎng)勢(shì)相當(dāng)?shù)娜~子，因此，試驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)具有一定的可信度，根據(jù)結(jié)果可知，即使是在貴陽(yáng)市的同一個(gè)區(qū)內(nèi)，魚(yú)腥草葉子中綠原酸、蘆丁、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素的含量也存在差異顯著，而且，試驗(yàn)所用的樣品并非是在同一時(shí)間采集的，由此也可以猜測(cè)，不同時(shí)間采集的魚(yú)腥草，其酚類(lèi)物質(zhì)的含量也會(huì)存在差異。

魚(yú)腥草樣品綠原酸、蘆丁、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素的含量不僅存在著地區(qū)上的差異，在同株植物中，蘆丁，綠原酸、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮素、槲皮苷的含量也存在著差異，這可能與魚(yú)腥草的生長(zhǎng)階段、生長(zhǎng)環(huán)境、采集時(shí)間與采集方式有關(guān)，在采集與清洗的過(guò)程中，魚(yú)腥草中酚類(lèi)物質(zhì)的含量可能會(huì)受到不同程度的影響，因而對(duì)魚(yú)腥草進(jìn)行前期處理時(shí)要盡量保持一致，才能不至于使得結(jié)果出現(xiàn)比較大的偏差。根據(jù)所查閱的文獻(xiàn)，魚(yú)腥草植株在不同生長(zhǎng)時(shí)期，不同生長(zhǎng)環(huán)境下的各類(lèi)物質(zhì)含量是不一樣的，而且還存在著較大的差異，但是每種物質(zhì)含量的變化之間所呈現(xiàn)的規(guī)律與聯(lián)系還需進(jìn)一步研究。

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)貴陽(yáng)市不同來(lái)源的29 個(gè)魚(yú)腥草葉片樣品中蘆丁、綠原酸、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素含量測(cè)定，初步明確了不同來(lái)源魚(yú)腥草蘆丁、綠原酸、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素含量存在差異，有些差異顯著；并且來(lái)源魚(yú)腥草樣品蘆丁、綠原酸、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素含量未表現(xiàn)出規(guī)律性變化。這可能暗示了魚(yú)腥草葉片中的蘆丁、綠原酸、阿福豆苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素受多種因素（如氣候、生境、土壤等） 影響，為魚(yú)腥草的栽培技術(shù)以及提高其魚(yú)腥草的質(zhì)量提供技術(shù)支持。