宋 娟,李 春,張 麗,馬海霞

1.寧夏回族自治區(qū)銀川市婦幼保健院檢驗(yàn)科,寧夏銀川 750000;2.上海市長(zhǎng)寧區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科,上海 200051

染色體疾病是由染色體數(shù)目或者結(jié)構(gòu)異常引起各種表型的疾病,臨床多表現(xiàn)為智力低下、發(fā)育遲緩、性發(fā)育異常、成年后生育障礙等。胎兒出生缺陷多與染色體異常有關(guān),染色體疾病是嚴(yán)重的遺傳疾病,對(duì)患兒及其家庭造成沉重負(fù)擔(dān),且目前尚無良好的治療辦法[1-2]。我國(guó)每年大約有100萬新生兒患有出生缺陷,占新生兒的5%,其中染色體異常的總患病率為1.8‰,占所有出生缺陷的3.6%。由于大多數(shù)染色體疾病無有效的治療手段,產(chǎn)前篩查及產(chǎn)前診斷在控制出生缺陷中發(fā)揮著極為重要的作用[3]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,產(chǎn)前篩查及產(chǎn)前診斷的方法逐漸多樣化,包括傳統(tǒng)的血清學(xué)篩查、超聲篩查,以及無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)(NIPT)等。但羊水穿刺等檢測(cè)手段獲取標(biāo)本的方式有創(chuàng),可能引起胎兒畸形或流產(chǎn)等風(fēng)險(xiǎn)[4]。本研究對(duì)在銀川市婦幼保健院(以下簡(jiǎn)稱本院)產(chǎn)前診斷中心就診的2 032例羊水穿刺孕婦進(jìn)行羊水染色體核型分析,探討了羊水染色體異常核型與不同的產(chǎn)前診斷指征之間的關(guān)系,以評(píng)估不同產(chǎn)前檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用價(jià)值,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2021年12月于本院產(chǎn)前診斷中心就診的孕婦2 032例,年齡17～45歲、平均(31.59±4.81)歲,孕周16～26周。孕婦及家屬簽署知情同意書后,經(jīng)羊膜腔穿刺抽取羊水進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、染色體核型分析。產(chǎn)前診斷指征:(1)NIPT高風(fēng)險(xiǎn)。NIPT提示13、18、21-三體高風(fēng)險(xiǎn)及其他染色體異常。(2)血清學(xué)唐氏篩查高風(fēng)險(xiǎn)。血清學(xué)篩查提示18、21-三體高風(fēng)險(xiǎn)或神經(jīng)管畸形高風(fēng)險(xiǎn)。(3)高齡。孕婦年齡≥35歲。(4)超聲檢查異常。超聲檢查提示心臟畸形(房間隔缺損、室間隔缺損、單心室等)、神經(jīng)系統(tǒng)畸形(無腦畸形、腦積水、脊柱裂等)、胎兒顏面部畸形(唇腭裂、小下頜畸形等)、頸部透明層(NT)增厚、脈絡(luò)叢囊腫、鼻骨發(fā)育不良或缺失、心室強(qiáng)回聲斑、側(cè)腦室增寬、單臍動(dòng)脈、胎兒手足姿勢(shì)異常等,具有2項(xiàng)及以上指標(biāo)者。(5)夫婦染色體異常。夫婦一方有染色體異常。(6)不良孕產(chǎn)史。曾有反復(fù)流產(chǎn)、胎停、死胎、染色體異常、患兒生育史等。納入標(biāo)準(zhǔn):單胎自然受孕,孕周16～26周;符合以上任意一種產(chǎn)前診斷指征(符合1項(xiàng)即可)。排除標(biāo)準(zhǔn):1年內(nèi)接受過異體輸血等。

1.2方法 在超聲引導(dǎo)下進(jìn)行羊膜腔穿刺術(shù),抽取羊水30 mL,分裝于2支15 mL無菌離心管,1 200 r/min,離心8 min后棄上清液,留取約0.5 mL制成細(xì)胞懸液,各加入4 mL羊水培養(yǎng)基,接種于25 cm3無菌培養(yǎng)瓶中,平鋪混勻。按照兩線培養(yǎng)原則,置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7～10 d,觀察后按照實(shí)驗(yàn)室制訂的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程,經(jīng)收獲、制片、染色體G顯帶后,使用全自動(dòng)染色體掃描儀LAICA GSL-10掃描。對(duì)羊水細(xì)胞進(jìn)行染色體分析,兩線各計(jì)數(shù)10個(gè)核型,每線分析2～3個(gè)核型(本研究共計(jì)數(shù)20個(gè)核型,分析5個(gè)核型)。如遇性染色體數(shù)目嵌合,加大計(jì)數(shù)至100個(gè)細(xì)胞。核型診斷標(biāo)準(zhǔn)按照人類遺傳學(xué)國(guó)際命名體系(ISCN2016)執(zhí)行[5]。

2 結(jié) 果

2.1不同產(chǎn)前診斷指征孕婦羊水染色體異常核型檢出情況 2 032例羊水標(biāo)本中檢出染色體異常核型153例,檢出率為7.53%。不同的產(chǎn)前診斷指征孕婦染色體異常核型檢出率不同,其中具有NIPT高風(fēng)險(xiǎn)指征者檢出率最高,為46.49%;具有唐氏篩查高風(fēng)險(xiǎn)指征者檢出率為2.86%;具有高齡指征者檢出率為6.93%;具有超聲檢查異常指征者檢出率為4.69%;具有夫婦染色體異常指征者檢出率為30.30%;具有不良孕產(chǎn)史指征者檢出率為3.10%。見表1。

表1 不同羊膜腔穿刺指征異常核型種類及其檢出率比較

2.2異常核型種類及例數(shù) 2 032例孕婦中羊水培養(yǎng)成功2 032例,成功率為100%。羊水染色體異常核型中數(shù)目異常占67.32%(103/153),其中21-三體最多(75例),其次為性染色體數(shù)目異常(19例);結(jié)構(gòu)異常占18.30%(28/153),嵌合體占14.38%(22/153)。見表2。

表2 羊水染色體異常核型檢出情況

3 討 論

染色體異常是導(dǎo)致出生缺陷的重要因素之一。我國(guó)出生人口較多,隨著社會(huì)發(fā)展和國(guó)家二孩、三孩政策的實(shí)行,女性生育年齡普遍延遲,高齡孕婦逐漸增多,妊娠合并癥的發(fā)病率也明顯升高[6]。染色體疾病目前仍無有效的治療方法,只能聯(lián)合應(yīng)用多種產(chǎn)前檢測(cè)手段,從而減少該類疾病患兒的出生。本研究針對(duì)6種不同的產(chǎn)前診斷指征,研究寧夏地區(qū)2019年1月至2021年12月2 032例孕婦羊水標(biāo)本發(fā)現(xiàn),染色體異常核型153例,檢出率為7.53%(153/2 032),與近幾年國(guó)內(nèi)其他地區(qū)報(bào)道的檢出率相似(5.93%～8.10%)[7-8]。本研究收集的羊水標(biāo)本數(shù)量有限,由于各地區(qū)人群染色體異常發(fā)生率不同,納入分析的孕婦中,其產(chǎn)前診斷各指征的比例也有所不同,故各地報(bào)道染色體異常的檢出率有差異。

NIPT對(duì)胎兒非整倍體染色體的篩查具有較高的準(zhǔn)確率、檢出率以及較低的假陰性率和假陽性率[9-10]。本研究2 032例羊水標(biāo)本中NIPT高風(fēng)險(xiǎn)114例,異常核型53例,檢出率為46.49%,以21-三體、性染色體異常及嵌合體多見。NIPT憑借無創(chuàng)安全、可早期檢測(cè)、準(zhǔn)確率高等優(yōu)點(diǎn)在產(chǎn)前篩查中的應(yīng)用越來越廣泛,但仍有一定的局限性,對(duì)平衡易位、倒位等染色體結(jié)構(gòu)異常仍無法檢出,也慎用于年齡≥35歲及多胎妊娠的孕婦等,不適用于夫婦一方有明確染色體異常、胎兒超聲檢查提示有結(jié)構(gòu)異常等情況。

本研究中因唐氏篩查高風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行產(chǎn)前診斷的孕婦665例,異常核型19例,檢出率為2.86%。唐氏篩查是一種通過檢測(cè)孕婦血清中甲胎蛋白、絨毛膜促性腺激素和游離雌三醇的水平,并結(jié)合預(yù)產(chǎn)期、體質(zhì)量、年齡和采血時(shí)的孕周等,計(jì)算生出先天性缺陷胎兒危險(xiǎn)系數(shù)的檢測(cè)方法。由于技術(shù)原理限制,此方法存在一定的漏診率及誤診率。

自2016年以來,隨著我國(guó)生育政策的放開,高齡(≥35歲)孕婦不斷增加。本研究中高齡孕婦707例,異常核型49例,其中21-三體27例。多項(xiàng)研究認(rèn)為,胎兒染色體異常發(fā)生率與孕婦年齡呈正相關(guān),并且孕婦年齡>38歲,胎兒染色體總體異常率顯著上升[11-12]。因此,對(duì)于高齡孕婦,建議直接行羊膜腔穿刺術(shù)進(jìn)行產(chǎn)前診斷。

隨著超聲技術(shù)的不斷發(fā)展,產(chǎn)前超聲在產(chǎn)前診斷中發(fā)揮了越來越重要的作用。B超可檢測(cè)出的異常包括羊水過多或過少,以及腎積水、NT增厚、雙側(cè)(單側(cè))脈絡(luò)叢囊腫、側(cè)腦室囊性水腫、胎兒水腫、胎兒心室內(nèi)強(qiáng)回聲點(diǎn)等各種胎兒畸形,均可能與染色體異常有關(guān)[13-14]。本研究中由于超聲檢查異常進(jìn)行產(chǎn)前診斷的患者384例,異常核型18例,檢出率為4.69%。

本研究中夫婦染色體異常核型檢出率較高(30.30%)。33例夫婦一方染色體異?；颊咧挟惓：诵?0例,均為遺傳自雙親一方的染色體發(fā)生平衡易位或者倒位,雖然該異常情況對(duì)胎兒無臨床效應(yīng),但其成年后會(huì)出現(xiàn)生育問題。有少數(shù)病例會(huì)出現(xiàn)遺傳過程中染色體部分丟失或者重復(fù)的情況,胎兒會(huì)出現(xiàn)各種臨床表型。故夫婦染色體異常時(shí)進(jìn)行產(chǎn)前診斷很有必要。

不良孕產(chǎn)史發(fā)生的原因較多,常見的是自然流產(chǎn)和胚胎停育,有不良孕產(chǎn)史尤其是伴染色體異?；颊咴俅稳焉飼r(shí),羊水染色體異常的風(fēng)險(xiǎn)顯著升高。本研究中129例具有不良孕產(chǎn)史指征的孕婦中異常核型4例,檢出率為3.10%。

綜上所述,有NIPT高風(fēng)險(xiǎn)、唐氏篩查高風(fēng)險(xiǎn)、高齡、超聲檢查異常、夫婦染色體異常、不良孕產(chǎn)史指征的孕婦進(jìn)行羊水染色體的檢查,其異常檢出率明顯升高。但是染色體檢查仍有一定的局限性,對(duì)于染色體微缺失、微重復(fù)以及單基因病、多基因病無法檢出。因此,在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)根據(jù)臨床實(shí)際情況將多種檢測(cè)技術(shù)聯(lián)合使用,以減少染色體異常患兒的出生率,提高我國(guó)出生人口質(zhì)量。