王嘯宇，蔣昕彧，周勇，曾令兵，孔祥會(huì)

（1.河南師范大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，水產(chǎn)動(dòng)物疾病防控河南省工程實(shí)驗(yàn)室，河南 新鄉(xiāng) 453007；2.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所，湖北 武漢 430223）

細(xì)胞因子（Cytokine,CK）是一類(lèi)由免疫系統(tǒng)或造血系統(tǒng)中活化的細(xì)胞分泌的一類(lèi)具有廣泛生物活性的低分子質(zhì)量蛋白或多肽。細(xì)胞因子可分為白細(xì)胞介素（Interleukin,IL）、干擾素（Interferon,IFN）、腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、集落刺激因子（Colony-stimulating factor,CSF）、趨化因子（Chemokines）和生長(zhǎng)因子（Growth factor）。自1957 年IFN 被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，已陸續(xù)有200 多種細(xì)胞因子被發(fā)現(xiàn)，它們與相應(yīng)的受體結(jié)合，通過(guò)自分泌、旁分泌或內(nèi)分泌的方式，發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、促進(jìn)免疫細(xì)胞增殖分化、參與組織修復(fù)等免疫學(xué)功能。

免疫佐劑（Adjuvant）簡(jiǎn)稱(chēng)佐劑，即非特異性免疫增生劑，可以同抗原一起或預(yù)先注入機(jī)體并增強(qiáng)免疫保護(hù)效果的輔助物質(zhì)。傳統(tǒng)佐劑因?yàn)樽陨碇T多缺點(diǎn)，比如弗氏佐劑不能被魚(yú)體代謝，容易發(fā)生膿腫、潰瘍和發(fā)熱等副反應(yīng)；而鋁鹽佐劑容易引起魚(yú)體發(fā)生局部膿腫，引起過(guò)敏性反應(yīng)。對(duì)魚(yú)體的毒副作用以及佐劑效應(yīng)弱等限制了其在漁用疫苗中的廣泛應(yīng)用，所以需要研發(fā)更加安全、高效和經(jīng)濟(jì)的新型佐劑。細(xì)胞因子具有免疫調(diào)節(jié)、參與炎癥反應(yīng)、促進(jìn)造血與組織修復(fù)等多種生物學(xué)功能，使其成為目前免疫學(xué)研究中具有廣泛應(yīng)用前景的新型佐劑之一。本文對(duì)可作為疫苗佐劑的細(xì)胞因子類(lèi)型、特征及作用進(jìn)行綜述，旨在為新型免疫佐劑的研發(fā)和應(yīng)用提供依據(jù)。

1 細(xì)胞因子作為疫苗佐劑的免疫增強(qiáng)作用

細(xì)胞因子作為一類(lèi)具有廣泛生物學(xué)效應(yīng)的小分子蛋白質(zhì)，能在免疫的不同階段調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答。已發(fā)現(xiàn)，哺乳動(dòng)物的同種細(xì)胞因子行使的功能并不單一；不同細(xì)胞因子之間具有協(xié)同性、拮抗性、多效性、重疊性和級(jí)聯(lián)誘導(dǎo)的效應(yīng)[1]。

目前，漁用疫苗佐劑的研究仍然是參考人類(lèi)以及畜牧類(lèi)動(dòng)物的相關(guān)研究。Cox 等歸納了哺乳動(dòng)物佐劑的五種作用模式：（1）免疫調(diào)節(jié)作用，指佐劑調(diào)節(jié)細(xì)胞因子功能網(wǎng)絡(luò)的能力。不同的佐劑誘導(dǎo)抗原遞呈細(xì)胞分泌不同的細(xì)胞因子，促進(jìn)Th 前體細(xì)胞向Th1/Th2 亞型分化；（2）抗原遞呈作用，指佐劑保持抗原構(gòu)象完整并遞呈給適當(dāng)免疫效應(yīng)細(xì)胞的能力，佐劑可影響APC（Antigen-presenting cell,APC）遞呈抗原和分泌IL-1、誘導(dǎo)Th1/Th2 轉(zhuǎn)換、協(xié)助B細(xì)胞記憶和提高抗體親和力等；（3）誘導(dǎo)CD8+毒性T 細(xì)胞（Cytotoxic T lymphocyte,CTL）應(yīng)答，通過(guò)與細(xì)胞膜融合或保護(hù)抗原肽，佐劑可促進(jìn)抗原肽與MHCⅠ類(lèi)分子結(jié)合，同時(shí)誘導(dǎo)IFN-γ 和TNF-α 的合成分泌，進(jìn)而提高M(jìn)HC Ⅰ類(lèi)分子的表達(dá)；（4）靶向作用，指佐劑通過(guò)增強(qiáng)APC 攝取和遞呈抗原的能力，進(jìn)而獲得足量的免疫原以達(dá)到預(yù)期的免疫效果；（5）抗原貯存作用，以鋁佐劑和油包水佐劑為代表的短期貯存，可將抗原捕獲在注射部位免受肝臟清除，如合成多聚體微球可長(zhǎng)期貯存抗原的佐劑，可貯存抗原并持續(xù)提供和脈沖式將其釋放[2]。

2 魚(yú)類(lèi)Th0 型細(xì)胞因子作為疫苗佐劑

2.1 IL-1β

1984 年首次克隆IL-1β 以來(lái)，對(duì)其生物學(xué)活性的研究極大加深了對(duì)疾病機(jī)制的理解[3]。IL-1β來(lái)源廣泛，可由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生。研究表明，IL-1β 是重要的趨化因子和促炎性細(xì)胞因子，能夠在級(jí)聯(lián)反應(yīng)中發(fā)揮作用，也是一種多效應(yīng)細(xì)胞因子，能在不同免疫應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮不同功能[4,5]。哺乳動(dòng)物的IL-1β 屬于非經(jīng)典分泌蛋白（Unconventional Protein Secretion，UPS），即蛋白質(zhì)的分泌不依賴(lài)于ER-Golgi 途徑[6]。大多數(shù)UPS 蛋白不具有典型的信號(hào)肽，香魚(yú)（Plecoglossus altivelis）、虹鱒（Oncorhynchus mykiss）、斑馬魚(yú)（Danio rerio）中IL-1β 氨基酸序列均不具有信號(hào)肽，但在其單核/巨噬細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了IL-1β[7]。

1999 年在虹鱒中首次報(bào)道了魚(yú)類(lèi)IL-1β 基因，之后在其他魚(yú)類(lèi)中陸續(xù)克隆鑒定出。目前，IL-1β 是魚(yú)類(lèi)中研究最多的細(xì)胞因子之一。大量研究證明，IL-1β 在先天免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮重要作用，在病原入侵后可迅速做出反應(yīng)并引發(fā)機(jī)體炎癥反應(yīng)[8,9]。硬骨魚(yú)IL-1β 重組蛋白可以誘導(dǎo)免疫細(xì)胞的增殖和促炎細(xì)胞因子表達(dá)[10]。Wang 等[11]在斑點(diǎn)叉尾（Ictalurus punctatus）腹腔注射IL-1β蛋白后，發(fā)現(xiàn)重組IL-1β 可以提高機(jī)體抗體效價(jià)、血清殺菌活性、溶菌酶活性、以及內(nèi)源性IL-1β 和TNF-α 在頭腎和脾臟中的表達(dá)。Hong 等在虹鱒腹腔注射重組IL-1β 蛋白后，能夠上調(diào)IL-1β 和cox-2 的mRNA 表達(dá)水平，增強(qiáng)淋巴組織中溶菌酶的活性，增強(qiáng)機(jī)體抵御病原感染的能力，降低死亡率。隨著IL-1β 作為疫苗佐劑的研究逐步開(kāi)展，闡明了免疫活性。Yin 等[12]用原核表達(dá)IL-1β 重組蛋白與使用甲醛滅活的嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）共同免疫鯉。結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，IL-1β 可以提高機(jī)體血清抗體效價(jià)，且無(wú)組織損傷和潰爛等副作用，具有較好的佐劑效應(yīng)。IL-1β 重組蛋白與哈維氏弧菌（Vibrio harveyi）全菌滅活疫苗經(jīng)腹腔注射，共同免疫尖吻鱸（Lates calcarifer），結(jié)果顯示IL-1β 能夠提高哈維氏弧菌滅活疫苗的免疫效果[13]。Buonocore 等用原核表達(dá)IL-1β 成熟肽作為佐劑，與鰻弧菌（Vibro anguillarum）疫苗共同免疫歐洲舌齒鱸（Dicentrarchus labrax），結(jié)果顯示魚(yú)體內(nèi)特異性抗體效價(jià)提高。IL-1β 作為免疫佐劑與遲緩愛(ài)德華氏菌（Edwardisella tarda）亞單位疫苗rOmpv 混合注射褐牙鲆（Paralichthys olivaceus），結(jié)果褐牙鲆的特異性血清抗體效價(jià)明顯增加，頭腎、脾臟和外周血sIg+淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯增多，免疫相關(guān)因子MHCⅠα、MHCⅡα、CD4-1、CD8α、CD4-2、CD8β、IgM 和IFN-γ 表達(dá)水平升高，相對(duì)存活率（Relative percentage survival,RPS）為71%，表現(xiàn)出顯著的佐劑效應(yīng)[14]。

2.2 IL-8

IL-8 首次在人類(lèi)中發(fā)現(xiàn)，來(lái)源廣泛的細(xì)胞因子，可由上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和肝細(xì)胞分泌，屬于CXC 趨化因子亞家族。研究顯示，哺乳動(dòng)物的IL-8 在調(diào)節(jié)先天免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、機(jī)體損傷和修復(fù)中發(fā)揮重要作用[15]。IL-8 還表現(xiàn)出一系列介導(dǎo)炎癥和免疫反應(yīng)的生物效應(yīng)，如調(diào)節(jié)細(xì)胞因子分泌，促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖和遷移，抵抗細(xì)菌或病毒感染，所以IL-8 具有作為疫苗佐劑的潛在應(yīng)用價(jià)值。到目前為止，IL-8 基因已在多種硬骨魚(yú)中被克隆鑒定出來(lái)，是魚(yú)類(lèi)中研究最多的細(xì)胞因子之一[16]。

1999 年最早在七鰓鰻（Lampetra japonicum）中克隆并鑒定了IL-8 基因[17]，之后在斑馬魚(yú)[18]、紅鰭東方鲀（Takifugu rubripes）[19]、草魚(yú)（Ctenopharyngodon idella）[20]和鳙（Aristichthys nobilis）[21]等多種魚(yú)類(lèi)中被相繼克隆鑒定。但是，關(guān)于魚(yú)類(lèi)IL-8 作為免疫佐劑的研究較少，僅在虹鱒、褐牙鲆和斑點(diǎn)叉尾鮰中發(fā)現(xiàn)[22]。Jimenez 等[23]發(fā)現(xiàn)，虹鱒IL-8 能夠上調(diào)脾臟中促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，IL-8 作為免疫佐劑能夠上調(diào)CK7、CK5B 等CC 型趨化因子的表達(dá)水平。Wang 等[24]通過(guò)構(gòu)建真核質(zhì)粒pcDNA3.1-IL-8（pcIL-8）與編碼α-烯醇化酶（pcENO）的DNA 疫苗混合注射褐牙鲆，提高了褐牙鲆先天免疫能力和特異性抗體效價(jià)，并誘導(dǎo)促炎反應(yīng)、體液免疫和細(xì)胞免疫的相關(guān)基因表達(dá)。此外，pcIL-8 增強(qiáng)了pcENO 的免疫保護(hù)作用，明顯高于對(duì)照組。Guo 等[14]利用pcIL-8 真核質(zhì)粒與遲緩愛(ài)德華氏菌亞單位疫苗rOmpv 混合注射褐牙鲆，增強(qiáng)了rOmpv 誘導(dǎo)的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，有效提高褐牙鲆抗遲緩愛(ài)德華氏菌感染的能力，表明IL-8 分子可以作為遲緩愛(ài)德華氏菌亞單位疫苗的免疫佐劑。

2.3 G-CSF

G-CSF 屬于集落刺激因子（CSF）家族，主要由單核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞分泌，能夠促進(jìn)嗜中性粒細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞的增殖和分化[25]。Santos 等[26]在褐牙鲆、紅鰭東方鲀以及綠河鲀（Tetraodon nigroviridis）中克隆了G-CSF 基因。隨后，在許氏平鲉（Sebastes schlegelii）[27]、斑馬魚(yú)[28]以及條石鯛（Oplegnathus fasciatus）[29]中也發(fā)現(xiàn)了G-CSF基因。目前，在魚(yú)類(lèi)中關(guān)于G-CSF 的研究多聚焦于病原體刺激或病原感染過(guò)程中G-CSF 發(fā)揮的功能，G-CSF 基因在組織和細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄水平變化。相關(guān)研究結(jié)果顯示，G-CSF 在抵御病原微生物入侵的免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。Santos 等[26]在褐牙鲆中發(fā)現(xiàn)，G-CSF 在頭腎、鰓和脾臟等重要免疫器官中表達(dá)，暗示其參與了魚(yú)類(lèi)免疫應(yīng)答。隨后，Santos 等[26]用LPS、ConA 和PHA 分別刺激褐牙鲆頭腎和外周血白細(xì)胞，G-CSF 的mRNA 表達(dá)水平上調(diào)。關(guān)于G-CSF 作為佐劑的效應(yīng)研究已有報(bào)道。Kaur 等[30]發(fā)現(xiàn)，用G-CSF 作為人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）DNA 疫苗的佐劑，可增強(qiáng)小鼠血清IgG2a/IgG1 抗體比例。Guo 等[24]構(gòu)建重組質(zhì)粒pc-DNA-G-CSF（pcG-CSF）與遲緩愛(ài)德華氏菌亞單位疫苗rOmpv 混合注射褐牙鲆，顯著提高了血清特異性抗體效價(jià)和sIg+淋巴細(xì)胞數(shù)量，促進(jìn)細(xì)胞免疫和體液免疫相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)，pcG-CSF 組RPS 也明顯高于對(duì)照組，顯示G-CSF 作為牙鲆遲緩愛(ài)德華氏菌疫苗佐劑具有顯著效果。

2.4 TNF-α

TNF-α 是一種多效應(yīng)細(xì)胞因子，在炎癥和病原感染過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在硬骨魚(yú)類(lèi)中存在兩種類(lèi)型的TNF-α，分別為T(mén)NF-α1 和TNF-α2[31]。TNF-α 由多種細(xì)胞產(chǎn)生，通過(guò)增強(qiáng)多種細(xì)胞反應(yīng)，如細(xì)胞凋亡、吞噬作用和效應(yīng)分子（IL-1、IL-6、IL-8和其他細(xì)胞因子）的產(chǎn)生來(lái)清除細(xì)菌和病毒[32]。在哺乳動(dòng)物中，證實(shí)了TNF-α 對(duì)牛皰疹病毒（Bovine herpesvirus）、人類(lèi)免疫缺陷病毒以及口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FDMV）均能增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答，提升機(jī)體抗病毒感染能力[33]。

TNF-α 在魚(yú)類(lèi)中被相繼克隆鑒定，包括斑馬魚(yú)[34]、草魚(yú)[35]、虹鱒[36]、鯉[37]、金頭鯛（Sparus aurata）[38]、條石鯛[39]和褐牙鲆[40]。但關(guān)于TNF-α 作為漁用佐劑的研究?jī)H在褐牙鲆中報(bào)道，Guo 等[14]構(gòu)建了TNF-α 真核表達(dá)載體（pcTNF-α）與亞單位疫苗rOmpv 混合注射褐牙鲆，結(jié)果顯示免疫相關(guān)基因MHCⅠα、CD8β、CD8α 和IFNγ 表達(dá)水平上調(diào)，但是，pcTNF-α 組血清抗體效價(jià)、sIg+淋巴細(xì)胞數(shù)量和RPS 與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。表明TNF-α作為rOmpv 亞單位疫苗佐劑起到了一定的輔助作用，推測(cè)其針對(duì)病毒引發(fā)的適應(yīng)性免疫發(fā)揮重要作用，并對(duì)病毒疫苗有顯著的佐劑效應(yīng)[41]。

2.5 IL-17

哺乳動(dòng)物中IL-17 家族有六個(gè)成員（IL-17A～I(xiàn)L-17F），具有免疫調(diào)節(jié)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和促進(jìn)炎癥的作用。相關(guān)研究表明，IL-17 家族細(xì)胞因子，通過(guò)激活NF-κB 信號(hào)通路發(fā)揮抗病毒作用[42]。魚(yú)類(lèi)的IL-17 家族基因已在多種魚(yú)類(lèi)中被克隆鑒定，如斑馬魚(yú)[43]、河鲀[44]、鮭（Oncorhynchus keta）[45]、虹鱒[46]、草魚(yú)[47]、斑點(diǎn)叉尾[48]和大黃魚(yú)（Larimichthys crocea）[49]。Cao 等[50]通過(guò)混合注射pcDNA-IL-17（pcIL-17）與虹鱒IHNV（pG）DNA 疫苗來(lái)評(píng)估佐劑效果。結(jié)果顯示，pcIL-17 作為佐劑能夠提高IgM 和CD8 表達(dá)，且特異性抗體效價(jià)高于對(duì)照組。pcIL-17還提高了RPS 和sIg+淋巴細(xì)胞數(shù)量。綜上所述，IL-17 作為疫苗佐劑可以增強(qiáng)IHNV 疫苗的免疫效果。

3 魚(yú)類(lèi)Th1 型細(xì)胞因子作為疫苗佐劑

3.1 IL-2

IL-2 最初命名為T(mén) 細(xì)胞生長(zhǎng)因子（TCGF），合成和分泌主要由Th 細(xì)胞被抗原或某些有絲分裂劑如伴刀豆凝集素（ConA）、植物凝集素（PHA）或由于T 細(xì)胞受體與抗原呈遞細(xì)胞表面的MHC 復(fù)合物的相互作用而產(chǎn)生[59]。研究表明，IL-2 具有多種生物學(xué)功能：激活NK 細(xì)胞[60]；免疫球蛋白（Ig）J 鏈，以及Ig 的合成與分泌[61]；在抗原刺激后激活細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞克隆，誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生。目前，IL-2 在移植排斥、抗腫瘤、抗感染、免疫缺陷等臨床治療中發(fā)揮重要作用[62]。

在哺乳動(dòng)物中證實(shí)IL-2 作為疫苗佐劑在細(xì)菌、病毒和寄生蟲(chóng)感染中能增強(qiáng)疫苗免疫應(yīng)答的強(qiáng)度。Diaz-Rosales 等[63]發(fā)現(xiàn)，重組虹鱒IL-2 蛋白能夠促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子Blimp-1 和STAT5 表達(dá)，而這兩個(gè)轉(zhuǎn)錄因子具有誘導(dǎo)B 細(xì)胞分化為漿細(xì)胞的能力，推測(cè)IL-2 能夠增強(qiáng)機(jī)體的免疫反應(yīng)。將構(gòu)建的真核表達(dá)系統(tǒng)pcDNA-IL-2（pcIL-2）與比目魚(yú)桿狀病毒（HIRRV）混合注射褐牙鲆，與對(duì)照組相比pcIL-2組β-防御素、CD4-1、CD8α、IFN-γ 和TNF-α表達(dá)上調(diào)，RPS 升高[52]。Cao 等[58]利用虹鱒IHNV（pG）DNA 疫苗與pcIL-2 混合注射，結(jié)果表明，IL-2能夠提高IgM 和CD8 的表達(dá)水平，抗體效價(jià)顯著高于對(duì)照組。pcIL-2 還提高了RPS 和sIg+淋巴細(xì)胞數(shù)量。因此，該細(xì)胞因子具有作為疫苗佐劑的潛力。

3.2 IFN-γ

IFN 是脊椎動(dòng)物抵御病原入侵的天然防御因子，在先天免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，分為Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型[64]。IFNγ 是Ⅱ型IFN，主要由NK 細(xì)胞和T 淋巴細(xì)胞分泌，其應(yīng)答受到多種活性物質(zhì)（信號(hào)分子、炎癥介質(zhì)和轉(zhuǎn)錄活性因子）調(diào)控[65]。IFN-γ 通過(guò)調(diào)控先天性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答中的效應(yīng)細(xì)胞,進(jìn)而提高機(jī)體免疫細(xì)胞對(duì)病原體的應(yīng)答速度。IFN-γ 除了發(fā)揮抗病毒的功能以外，還能調(diào)控抗原識(shí)別和遞呈過(guò)程中MHC 分子的表達(dá)[66]。

表1 細(xì)胞因子作為魚(yú)用疫苗佐劑的研究概況[51]Tab.1 Summary of cytokines as adjuvants of fish vaccines

IFN-γ 的佐劑效應(yīng)在哺乳動(dòng)物中已得到廣泛證實(shí)，但關(guān)于魚(yú)類(lèi)IFN-γ 佐劑效應(yīng)的研究卻十分有限。Cai 等[67]將褐牙鲆IFN 調(diào)節(jié)因子作為真鯛（Pagrus major）虹彩病毒DNA 疫苗免疫佐劑，增強(qiáng)了真鯛血清特異性抗體效價(jià)，并誘導(dǎo)抗病毒相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)。

4 魚(yú)類(lèi)Th2 型細(xì)胞因子作為佐劑

IL-6 是一種多功能細(xì)胞因子，在炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、組織再生和造血中發(fā)揮重要作用，并在機(jī)體的抗感染免疫中起重要作用[68]。此外，IL-6 可調(diào)節(jié)B 細(xì)胞分化為漿細(xì)胞[69]。

IL-6 作為多功能細(xì)胞因子，在哺乳動(dòng)物中作為佐劑被廣泛應(yīng)用，但在魚(yú)類(lèi)中只在草魚(yú)、褐牙鲆和紅笛鯛（Lutjanus sanguineus）中有報(bào)道。Yan 等[70]構(gòu)建了pcDNA-IL-6-VP6（pcIL-6-VP6）融合表達(dá)載體，并用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染草魚(yú)CIK 細(xì)胞，結(jié)果顯示，pcIL-6-VP6 質(zhì)粒能在CIK 細(xì)胞中高效表達(dá)，為DNA 疫苗免疫效果的檢測(cè)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。Guo等[56]通過(guò)構(gòu)建pcDNA-IL-6（pcIL-6）和重組蛋白IL-6（rIL-6）分別與重組亞單位疫苗rOmpV 混合注射褐牙鲆。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，接種rOmpV+pcIL-6 或rIL-6 的褐牙鲆RPS 明顯升高，外周血、頭腎和脾臟中的sIg+淋巴細(xì)胞數(shù)量增加，接種pcIL-6 和rIL-6 的褐牙鲆免疫相關(guān)基因IL-1β、TNF-α、CD8α、CD4-1、MHCⅡα 和MHCⅠα 表達(dá)水平上調(diào)。rIL-6 與pcIL-6 作為佐劑，二者相比，rIL-6 組血清抗體效價(jià)、sIg+淋巴細(xì)胞數(shù)量和免疫相關(guān)基因（IL-1β、TNF-α、CD4-1 和MHCⅡα）表達(dá)量明顯增加。Huang 等[71]構(gòu)建了融合表達(dá)載體pcDNA-IL6-OmpV，注射紅笛鯛后得到與Guo等相似的結(jié)果，IL-6 作為疫苗佐劑，其血清抗體效價(jià)和RPS 均明顯高于對(duì)照組。魚(yú)類(lèi)中，目前盡管已有較多關(guān)于IL-6 功能的研究，但涉及IL-6 作為佐劑的效應(yīng)研究仍處于起步階段。

5 總結(jié)與展望

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，由病原微生物引起的魚(yú)類(lèi)疾病已成為限制水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的頸瓶。目前，魚(yú)類(lèi)疾病控制主要采用化學(xué)漁藥和注射漁用疫苗。但當(dāng)前水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用的藥物，含有大量的抗生素和重金屬成分，對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖和消費(fèi)者帶來(lái)巨大安全隱患。而漁用疫苗被認(rèn)為是預(yù)防魚(yú)病的最有效方法，且健康環(huán)保。越來(lái)越多的新型疫苗，如亞單位疫苗、核酸類(lèi)疫苗以及合成肽疫苗等已應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)，但由于基因工程疫苗免疫原性較弱，使用佐劑才能有效提高魚(yú)體的免疫保護(hù)效果。而傳統(tǒng)佐劑包括鋁鹽和弗氏佐劑是水產(chǎn)養(yǎng)殖中已知最有效的佐劑，但由于其佐劑效應(yīng)差、持續(xù)時(shí)間短和副作用多等缺點(diǎn)，所以需尋找一些高效的免疫佐劑替代，而細(xì)胞因子作為免疫佐劑則可改善上述問(wèn)題。細(xì)胞因子能夠調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、促進(jìn)血細(xì)胞生成、誘導(dǎo)細(xì)胞增殖分化以及參與組織修復(fù)等多種生物學(xué)功能，成為目前免疫學(xué)中最具前景的佐劑候選者之一。然而，細(xì)胞因子表現(xiàn)出與劑量相關(guān)的毒性，免疫原性弱而不能有效刺激機(jī)體免疫應(yīng)答以及穩(wěn)定性差、半衰期短且經(jīng)濟(jì)成本較高等問(wèn)題，阻礙了其在生產(chǎn)中的應(yīng)用。目前，這些問(wèn)題正在得到逐步解決，例如，將細(xì)胞因子基因連接到免疫原蛋白基因上，DNA 分子融合表達(dá)成融合蛋白，或聯(lián)合多種細(xì)胞因子和趨化因子混合使用，提高單一佐劑的免疫效果。從長(zhǎng)遠(yuǎn)來(lái)看，需要在佐劑的基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究方面加大投入，以促進(jìn)我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展。