王瑞芬，康鵬偉

（1. 濮陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河南 濮陽(yáng) 457000；2. 濮陽(yáng)市食品監(jiān)督所，河南 濮陽(yáng) 457000）

鹽酸馬普替林（maprotiline hydrochloride）, 化學(xué)名N-甲基-9,10-橋亞乙基蒽-9（10H）-丙胺鹽酸鹽，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1，為白色或類白色的結(jié)晶性粉末，無(wú)臭，味苦，微溶于水，易溶于甲醇或三氯甲烷，不溶于正庚烷，熔點(diǎn)230～232 ℃，屬四環(huán)類抗抑郁新藥，該藥首先由Ciba-Geigy公司開(kāi)發(fā)上市，適用于內(nèi)因性、反應(yīng)性、更年期等各種類型的抑郁性神經(jīng)癥，同時(shí)兼有抗焦慮、鎮(zhèn)靜、抗膽堿作用。由于其作用快，副作用小，療效顯著而作為廣譜抗抑郁藥。

圖1 鹽酸馬普替林化學(xué)結(jié)構(gòu)式

鹽酸馬普替林傳統(tǒng)合成工藝[1-2]主要以蒽酮為起始原料，通過(guò)氰乙基化、水解、選擇性還原、加成環(huán)合、酰胺化、還原等反應(yīng)得到。董俊峰等[3]對(duì)傳統(tǒng)合成工藝進(jìn)行改良，直接以蒽為原料，經(jīng)甲酰化反應(yīng)、與乙烯基乙醚和甲酸三甲酯加成重排反應(yīng)、“一鍋煮”工藝（先與乙烯加成環(huán)合，然后與甲胺溶液生產(chǎn)亞胺，再經(jīng)過(guò)氫化還原得到馬普替林游離堿）、鹽酸酸化最終得到鹽酸馬普替林產(chǎn)品。在上述生產(chǎn)合成過(guò)程中，可能會(huì)用到甲醇、乙醇、乙醚、異丙醇、叔丁醇和四氫呋喃等有機(jī)溶劑。根據(jù)人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)理事會(huì)（ICH）指導(dǎo)原則和《中國(guó)藥典》2020年版四部通則0861“殘留溶劑測(cè)定法”中的有關(guān)規(guī)定，甲醇、四氫呋喃屬于第二類應(yīng)該限制使用的溶劑；乙醇、乙醚、異丙醇、叔丁醇是第三類藥品GMP或其他質(zhì)量要求限制使用的溶劑，所以在原料藥的生產(chǎn)合成過(guò)程中需要嚴(yán)格控制原料藥中這些有機(jī)溶劑的殘留量在安全范圍內(nèi)，以確保藥品的用藥安全。目前，國(guó)內(nèi)有關(guān)鹽酸馬普替林原料藥中殘留有機(jī)溶劑的研究文獻(xiàn)有報(bào)道。本文參考相關(guān)文獻(xiàn)[4-10]，采用頂空氣相色譜法同時(shí)測(cè)定鹽酸馬普替林原料藥中6種有機(jī)溶劑的殘留量，以期為該原料藥的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 7890B 型氣相色譜儀，7697A頂空進(jìn)樣器、氫火焰離子化檢測(cè)器（美國(guó) Agilent 公司），METTLER TOLEDO XS205DU 電子分析天平（梅特勒-托利多）。

甲醇、乙醇、乙醚、叔丁醇和四氫呋喃（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司，均為分析純，含量≥99.5 %），異丙醇（上海麥克林生化，含量≥99.5 %，分析純），二甲基亞砜（德國(guó)默克公司，含量≥99.9 %，色譜純）。鹽酸馬普原料藥（購(gòu)自上海某公司，批號(hào)：RH243317，RH243319，RH243322）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent DB-624毛細(xì)管柱（30 m×0.53 mm，3.0 μm)；進(jìn)樣口溫度：220 ℃；氫火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度：260 ℃；升溫程序：初始溫度40 ℃（保持10 min）， 以10 ℃/min速率升溫至160 ℃（保持3 min）；分流比：5:1；載氣為高純氮?dú)?，流速?.5 ml/min；頂空進(jìn)樣量：1.0 ml，平衡溫度：80 ℃，平衡時(shí)間：30 min。

2.2 溶液制備

精密稱取甲醇191.2 mg、乙醇250.3 mg、乙醚250.2 mg、異丙醇252.5 mg、叔丁醇250.6 mg和四氫呋喃43.2 mg，置入50 ml量瓶，加適量二甲基亞砜溶劑溶解，稀釋至刻度，搖勻，得混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密移取上述混合對(duì)照品儲(chǔ)備液2 ml置入20 ml量瓶，加二甲基亞砜溶劑稀釋并定容至刻度，搖勻，得混合對(duì)照品溶液，精密移取5 ml置入20 ml頂空瓶，壓蓋密封。取鹽酸馬普替林原料藥約1.0 g，精密稱定，置入10 ml量瓶，加適量二甲基亞砜溶劑，振搖使溶解，定容至刻度，搖勻，得供試品溶液，精密移取5 ml置入20 ml頂空瓶，壓蓋密封。

2.3 線性關(guān)系、檢出限與定量限考察

精密吸取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1，0.2，0.5，1.0，2.0 ml，分別置10 ml量瓶中，加二甲基亞砜溶劑稀釋并定容至刻度，搖勻，得系列濃度混合對(duì)照品溶液。取上述溶液適量，按2.1項(xiàng)下色譜條件分析測(cè)定，記錄峰面積，以待測(cè)有機(jī)溶劑的質(zhì)量濃度（μg/ml）X為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程（結(jié)果見(jiàn)表1）。取混合對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋后，頂空進(jìn)樣分析測(cè)定，記錄不同濃度下色譜圖。以信噪比（S/N）為3時(shí)的相應(yīng)待測(cè)有機(jī)溶劑的濃度確定檢測(cè)限（LOD），信噪比（S/N）為10時(shí)相應(yīng)待測(cè)有機(jī)溶劑的濃度確定定量限（LOQ）（結(jié)果見(jiàn)表1）。

表1 6種成分的線性關(guān)系、檢出限與定量限結(jié)果

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和二甲基亞砜溶劑各5 ml，置入20 ml頂空瓶，壓蓋密封，按1.1項(xiàng)下色譜條件分析測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果表明，在該色譜條件下，各待測(cè)成分色譜峰均能達(dá)到基線分離，分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)以乙醇峰計(jì)算大于30 000，二甲基亞砜溶劑對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，溶劑峰和各待測(cè)成分色譜峰之間分離度良好（見(jiàn)圖2）。

圖2 混合對(duì)照品（A），供試品（B），空白溶劑（C）的氣相色譜圖

2.5 精密度試驗(yàn)

取5.0 ml混合對(duì)照品溶液置入20 ml頂空瓶，壓蓋密封，平行配制5份，按2.1項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，測(cè)得甲醇、乙醇、乙醚、異丙醇、叔丁醇和四氫呋喃峰面積的RSD分別為1.19 %，1.26 %，1.12 %，1.80 %，0.46 %，0.15 %（n=5），表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)與中間精密度試驗(yàn)

取鹽酸馬普替林原料藥（批號(hào)：RH243317），按2.2項(xiàng)下方法制備5份供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，甲醇、乙醇、叔丁醇和四氫呋喃未檢出，乙醚、異丙醇?xì)埩袅糠謩e為0.019 %，0.23 %，RSD分別為2.04 %，1.57 %（n=5），表明該方法的重復(fù)性良好。

另取鹽酸馬普替林原料藥（批號(hào)：RH243317），由2名分析人員在不同時(shí)間采用不同儀器，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定各溶劑殘留量，分別平行測(cè)定5份，計(jì)算10份供試品溶液殘留量的平均值。甲醇、乙醇、叔丁醇和四氫呋喃未檢出，乙醚、異丙醇?xì)埩袅糠謩e為0.02 %，0.23 %，RSD分別為2.25 %，1.34 %（n=10），表明該方法的中間精密度良好。

2.7 回收率試驗(yàn)

取鹽酸馬普替林原料藥（批號(hào)：RH243317）約0.5 g，共9份，置入20 ml頂空瓶，分別加入5 ml濃度為80 %，100 %，120 % 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，各制備3份平行樣。按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果甲醇、乙醇、乙醚、異丙醇、叔丁醇和四氫呋喃的平均加樣回收率分別為97.96 %，98.93 %，100.13 %，98.20 %，97.45 %，99.86 %，RSD分別為2.08 %，2.25 %，1.56 %，2.38 %，1.87 %，1.92 %。表明該方法用于檢測(cè)鹽酸馬普替林原料藥中的殘留溶劑準(zhǔn)確度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取混合對(duì)照品溶液5 ml置入20 ml頂空瓶，制備5份平行樣，分別于室溫下放置0，2，4，8，12 h后，按2.1項(xiàng)下色譜條件依次分析測(cè)定，測(cè)得甲醇、乙醇、乙醚、異丙醇、叔丁醇和四氫呋喃峰面積的RSD分別為1.96 %，2.04 %，2.57 %，1.75 %，1.36 %，1.81 %（n=5），結(jié)果表明，溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 耐用性試驗(yàn)

取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件分析測(cè)定，分別調(diào)整載氣流速、柱溫、進(jìn)樣口與檢測(cè)器溫度，程序升溫的初始溫度與升溫速率，選用不同品牌的色譜柱，依法測(cè)定，考察各待測(cè)成分色譜峰的分離度。結(jié)果表明，測(cè)定條件的微小變動(dòng)能滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求，該方法穩(wěn)定可靠，耐用性良好。

2.10 樣品中殘留有機(jī)溶劑的測(cè)定

取3批鹽酸馬普替林原料藥（批號(hào)：RH243317，RH243319，RH243322），按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件分析測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算有機(jī)溶劑殘留量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 鹽酸馬普替林原料藥殘留溶劑測(cè)定結(jié)果

3 討論

由于鹽酸馬普替林微溶于水，易溶于二甲基亞砜等有機(jī)溶劑，且在分析過(guò)程中，二甲基亞砜色譜峰與各待測(cè)溶劑色譜峰之間可實(shí)現(xiàn)完全分離，溶劑峰對(duì)原料藥分析測(cè)定無(wú)干擾，本文選擇二甲基亞砜為分析檢測(cè)溶劑。

本文檢測(cè)的6種有機(jī)溶劑中，甲醇、四氫呋喃為藥典規(guī)定的第二類限制使用溶劑，限度分別為0.3 %，0.072 %；乙醇、乙醚、異丙醇和叔丁醇為藥品GMP或其他質(zhì)量要求限制使用溶劑，限度為0.5 %。本試驗(yàn)測(cè)得的3批原料藥中乙醚、異丙醇的殘留量均低于藥典規(guī)定的限度要求，其余有機(jī)溶劑未檢出，原料藥殘留溶劑檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果符合中國(guó)藥典2020年版四部通則“0861 殘留溶劑測(cè)定法”標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。本文建立了一種氣相色譜測(cè)定鹽酸馬普替林原料藥中殘留溶劑的新方法，具有高效、快捷、準(zhǔn)確、便捷等優(yōu)點(diǎn)，可滿足現(xiàn)行藥典對(duì)于殘留溶劑項(xiàng)目檢測(cè)的技術(shù)要求，同時(shí)為該原料藥和相應(yīng)制劑生產(chǎn)質(zhì)量控制提供技術(shù)參考。