林淑儀 楊愛君 何瑛 梁俊健 林木娣 黃浩杰

摘 要：為了探究實驗室配制的75%酒精在不同貯存溫度下的消毒效果，本文將配制好的75%酒精分別貯存在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境中30 d，觀察對比3種貯存溫度中酒精濃度的變化及其對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的消毒效果。結果表明，75%酒精在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境中貯存30 d后濃度分別下降至74.5%、73.3%和71.2%，對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌平均殺滅對數(shù)值均大于5.00，滿足規(guī)定的消毒要求。因此，75%酒精在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境中貯存30 d，其殺菌效果在可接受范圍內。

關鍵詞：75%酒精；貯存溫度；消毒效果

Abstract： In order to investigate the disinfection effect of 75% alcohol at different storage temperatures， the prepared 75% alcohol was stored at 6 ℃， 25 ℃ and 35 ℃ for 30 days respectively， and the changes of alcohol concentration and the disinfection effect on Staphylococcus aureus and Escherichia coli in three storage temperatures were detected. The results showed that the concentration of 75% alcohol decreased from 74.5%， 73.3% and 71.2% respectively， and the average killing logarithms of Staphylococcus aureus and Escherichia coli were more than 5.00. Therefore， when 75% alcohol is stored at 6 ℃， 25 ℃， and 35 ℃ for 30 days， its disinfection effect is acceptable.

Keywords： 75% alcohol; storage temperature; disinfection effect

75%酒精是一種廣泛使用的常規(guī)消毒劑[1]，具有很強的滲透能力，可穿透細胞膜，進入細菌內部，凝固蛋白質，從而起到殺菌的作用。酒精濃度過高或過低都會對殺菌消毒效果產(chǎn)生影響，酒精濃度越高，脫水能力越強，使蛋白質凝固的作用也就越強。當過高濃度的酒精與細菌接觸時，菌體表面會迅速凝固，形成一層包膜，阻止酒精繼續(xù)向菌體內部滲透，導致細菌不能被徹底殺死。如果濃度太低，酒精含水量太高，單位體積內乙醇分子含量太少，雖然可以滲透進入細菌內部，但不能將其體內的蛋白質凝固，不足以徹底殺滅細菌。綜合以上兩點，兼顧殺菌消毒能力和滲透性，70%～75%的酒精可以使菌體蛋白質脫水、變性、沉淀，不會使菌體形成包膜，而且酒精可以不斷地深入菌體內部，作用于菌體內所有的蛋白質，最后殺死細菌，殺菌比較徹底。

食品加工企業(yè)通常直接購買75%食品級酒精或用95%的食用酒精稀釋成75%酒精作消毒劑使用，75%的酒精穿透能力、作用速度最佳，但酒精具有揮發(fā)性，在使用一段時間后，酒精的消毒作用就會減弱，貯存環(huán)境的溫度直接影響酒精的揮發(fā)速度，對酒精的“有效期”影響明顯[2-4]。本文將75%酒精分別放在6 ℃、25 ℃和35 ℃的環(huán)境中存放30 d，模擬冬天室內工作間、恒溫潔凈車間和夏天室內工作間的工作場所溫度，觀察75%酒精濃度的揮發(fā)速度和消毒效果的變化。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗微生物以金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）作為細菌繁殖體中化膿性球菌的代表，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司；大腸桿菌（ATCC 25922）作為細菌繁殖體中腸道菌的代表，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司；95%的食用酒精，廣西金源生化集團；緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂、結晶紫中性紅膽鹽培養(yǎng)基，北京陸橋技術股份有限公司。

1.2 儀器與設備

溫度測量儀，德圖儀器國際貿(mào)易（上海）有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海延翌儀器儀表有限公司；酒精計（量程在0%～100%）。

1.3 試驗方法

1.3.1 75%酒精的配制與貯存

采用公式法計算

式中：A為95%酒精的總體積；B為75%酒精的總體積。所需添加純水的量C=B-A。

本試驗配制5 L 75%的酒精，根據(jù)上述的計算公式得出，需量取3 947 mL 95%酒精于5 L的容器中，往容器中加入1 053 mL純水，攪拌均勻，靜置，從中倒出220 mL液體至量筒，用酒精計和溫度測量儀測出酒精濃度和溫度，經(jīng)換算其酒精濃度為75.4%。用1 L的PP錐形瓶盛裝，分別放置在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境下貯存30 d，每日早晚各開啟一次，每次5 min，目的是模擬企業(yè)日常每天開啟容器領取75%酒精的時間。

1.3.2 酒精濃度的檢測

每日取220 mL酒精置于潔凈、干燥的250 mL量筒內，靜置數(shù)分鐘，待酒精中的氣泡完全消失后，放入潔凈、擦干的酒精計，不接觸量筒壁，平衡時間5 min，水平觀測，讀取與彎月面相切處的刻度數(shù)值，同時用溫度測量儀測定此時酒精的溫度。根據(jù)測得的酒精示值和溫度通過《酒精水溶液密度與酒精度（乙醇含量）對照表（20 ℃）》換算成20 ℃時的酒精度。同時，在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值，不應超過平均值的0.5%[5]。

1.3.3 消毒效果試驗

①菌液制備。使用已傳至3代的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌菌株接種于緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基中，于36 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)后菌液濃度應不少于1×105 CFU·mL-1。②設置“6 ℃貯存條件”“25 ℃貯存條件”和“35 ℃貯存條件”共3個組，每組3個無菌離心管，然后分別往每個無菌離心管中加入1 mL菌液和9 mL75%酒精溶液（陽性對照管用緩沖蛋白胨水替代75%酒精），振蕩均勻，分別作用0.5 min、1.0 min和2.0 min后，向混合液中加入10 mL營養(yǎng)肉湯，10 min后，取其中1 mL混勻溶液進行平板傾注，在36 ℃的電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。③根據(jù)《消毒技術規(guī)范》（2002年版），計算活菌濃度（CFU·mL-1），換算成對數(shù)值，然后計算殺滅對數(shù)值：殺滅對數(shù)值＝陽性對照組平均活菌濃度的對數(shù)值－實驗組活菌濃度的對數(shù)值。判定標準：對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的殺滅對數(shù)值均≥5.00，判為消毒合格[6]。

2 結果與分析

2.1 不同環(huán)境溫度貯存下75%酒精濃度變化檢測結果

75%酒精配制后，在PP錐形瓶容器貯存下，其酒精濃度在6 ℃、25 ℃和35 ℃的趨勢變化見圖1。6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境貯存下，酒精濃度分別從75.4%下降至74.5%、73.3%和71.2%?？偟膩碚f，貯存環(huán)境溫度越高，酒精的揮發(fā)性越強，酒精濃度下降速度越快。雖然75%酒精在不同貯存溫度環(huán)境下?lián)]發(fā)速度有所不同，但在一個月的貯存期內，酒精濃度仍在70%以上，可以達到酒精作為消毒劑的限值標準要求[7]。

2.2 不同貯存溫度下75%酒精的消毒效果對比

75%酒精配制后分別在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境下貯存30 d，在貯存期間分別選擇貯存時長0 d、7 d、9 d、15 d、20 d和30 d的6個時間段對75%酒精的消毒效果進行對比。在30 d貯存期內，75%酒精作用0.5 min、1.0 min和2.0 min都可以達到對金黃色葡萄球菌的消毒效果。其中貯存時長為30 d時，作用0.5 min后有金黃色葡萄球菌生長，但作用1.0 min和2.0 min可以100%殺滅金黃色葡萄球菌，平均殺滅對數(shù)值為8.41（見表1、表2、表3）。

75%酒精對大腸桿菌的消毒效果隨著貯存時間的延長逐漸降低，其中2.0 min的消毒效果最好，可以達到100%的殺滅率，作用1.0 min和0.5 min的消毒效果逐漸降低，但其6個貯存時長的平均殺滅對數(shù)值均≥5.00，達到規(guī)定的消毒合格要求。

3 結論與討論

研究75%酒精在不同環(huán)境溫度中貯存30 d的過程中，其酒精濃度和消毒效果的變化。結果表明，75%酒精分別在6 ℃、25 ℃和35 ℃ 3個溫度中貯存30 d后酒精濃度仍可以達到70%以上；在相同的貯存時間內，環(huán)境溫度的高低會直接影響酒精濃度揮發(fā)性的速度，溫度越高，酒精揮發(fā)速度越快。在30 d貯存期間，選擇6個不同貯存時長的75%酒精對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌分別作用0.5 min、1.0 min和2.0 min，其平均對數(shù)值均可以達到5.00以上，對細菌的殺滅效果可以達到規(guī)定的消毒要求。同時，在3個不同的貯存溫度環(huán)境中，75%酒精在每日開啟10 min情況下，貯存0 d和30 d對金黃色葡萄球菌作用1.0 min和2.0 min的滅菌作用沒有差別，但貯存30 d對金黃色葡萄球菌作用0.5 min后，有金黃色葡萄球菌生長?？梢?，75%酒精在6 ℃、和35 ℃環(huán)境中貯存30 d，仍具有較強的消毒作用，企業(yè)可以根據(jù)自身需求選擇不同的貯存時長和消毒作用時間。

通過對75%酒精的貯存溫度和消毒效果的試驗檢測，建議75%消毒酒精在30 d的保存期中，存儲溫度≤25 ℃，消毒時間≥1.0 min，既可減少配制的次數(shù)，又可以保證消毒效果。

參考文獻

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[2]王紅，廖馨涓，嚴東珍，等.75%乙醇的消毒效果及穩(wěn)定性研究[J].國際生物制品學雜志，2013，36（4）：182-184.

[3]趙小明.75%消毒酒精貯存有效期研究[J].現(xiàn)代食品，2017（16）：78-80.

[4]曹新平，施紅梅，袁景紅，等.乙醇消毒劑開啟后使用有效期的實驗研究[J].中國消毒學雜志，2018，35（3）：214-216.

[5]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 酒中乙醇濃度的測定：GB 5009.225—2016[S].北京：中國標準出版社，2016.

[6]中華人民共和國衛(wèi)生部.消毒技術規(guī)范（2002年版）[M].北京：中華人民共和國衛(wèi)生部，2002.

[7]國家市場監(jiān)督管理總局，國家標準化管理委員會.醇類消毒劑衛(wèi)生要求：GB/T 26373—2020[S].北京：中國標準出版社，2020.