王麗霞 林韋康 陶春霖

免疫系統(tǒng)是機(jī)體執(zhí)行免疫應(yīng)答和免疫功能的重要系統(tǒng)，機(jī)體健康與免疫系統(tǒng)穩(wěn)定運行息息相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，在感染新冠肺炎死亡的患者中，多為免疫功能低下的老年人，因此提高自身機(jī)體抵抗力非常重要。

蜂蜜具有多種功能活性及健康益處，如抗氧化、抑菌活性、抗炎活性、免疫調(diào)節(jié)活性等。根據(jù)蜜源植物種類的不同，蜂蜜分為多種蜜種，其中桉樹蜜的抑菌效果要優(yōu)于一般蜂蜜。基于此，本文主要探索赤桉樹蜂蜜（Fewsters Farm Jarrah Honey，F(xiàn)FJH）對免疫功能低下模型小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用，以期為增強(qiáng)免疫低下人群的免疫功能及后疫情時代提高抗病能力提供營養(yǎng)支持。

一、材料與儀器

1.實驗動物。C57BL/6小鼠，雄性，SPF級，個體質(zhì)量為（20±2）g，6-8周齡，購買于北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號為SCXK（京）2019-0008。在動物適宜條件下并可自由取食和喝水，喂養(yǎng)7d用于實驗。

2.蜂蜜與試劑。赤桉樹蜂蜜（FFJH），洋妝源（上海）網(wǎng)絡(luò)科技有限公司；環(huán)磷酰胺（CTX），通化茂祥制藥有限公司；IL-2 ELISA試劑盒、TNF-α ELISA試劑盒、IFN-γ ELISA試劑盒、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）、ELISA試劑盒（LOT20200911A）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ），上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

3.主要儀器。XPR電子分析天平，梅特勒托利多科技（中國）有限公司；5804R型低溫高速離心機(jī)，德國Eppendorf公司；DK-S24電熱恒溫水浴鍋，上海精宏實驗設(shè)備公司；BIO-RAD680型酶標(biāo)儀，美國BIO-RAD公司。

二、實驗與方法

1.造模與給藥。將實驗小鼠隨機(jī)分為7組，對照組、模型組、藥物組（給藥劑量參考張喜武的研究）、市售蜂蜜組以及FFJH低、中、高劑量組，每組10只。除對照組小鼠外，均一次性腹腔注射CTX 200mg/kg，對照組注射等體積生理鹽水。藥物組（人參提取液10mL/kg）、市售蜂蜜組（10g/kg）、FFJH低劑量組（1.25g/kg）、FFJH中劑量組（5g/kg）和FFJH高劑量組（10g/kg）均從第2天開始灌胃給藥；對照組及模型組每天灌胃等體積生理鹽水，連續(xù)灌胃14d。

2.標(biāo)本采集與指標(biāo)檢測。（1）器官指數(shù)檢測。給藥結(jié)束后次日稱量各組小鼠體質(zhì)量，頸椎脫臼處死小鼠，解剖取出胸腺、脾臟、肺臟，除去血污，吸干表面水分后，放于電子分析天平上稱重。計算公式如下：

器官指數(shù)=器官重量（mg）/體質(zhì)量（g）

（2）血清細(xì)胞因子表達(dá)水平檢測。眼球取血，在4℃、4500r/min條件下，離心10min，收集上層血清。血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α水平的測定，按照試劑盒操作說明書進(jìn)行。

（3）肺組織勻漿液ACE2和AngⅡ表達(dá)水平檢測。首先制備10%的肺組織勻漿液，取適量肺組織，加入9倍磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4），勻漿后，在4500r/min條件下，離心10min收集上清，用蛋白定量后備用。ELISA操作按照試劑盒操作說明書進(jìn)行。

3.統(tǒng)計學(xué)分析。數(shù)據(jù)分析使用GraphPad Prism v.8.0統(tǒng)計軟件。組間分析使用One-way ANOVA或T-test進(jìn)行分析。P＜0.01表示具有顯著性差異。

三、結(jié)果與分析

1.FFJH對免疫抑制小鼠臟器指數(shù)的影響。如圖1a所示，與對照組相比，模型組小鼠的胸腺指數(shù)顯著降低（P＜0.01），模型建立成功；與模型組相比，藥物組、FFJH高劑量組小鼠的胸腺指數(shù)均升高（P＜0.01），說明高劑量FFJH可以減緩小鼠胸腺的萎縮程度。

如圖1b所示，與對照組相比，模型組小鼠的脾臟指數(shù)降低（P＜0.05）；與模型組相比，F(xiàn)FJH高、中、低劑量組小鼠的脾臟指數(shù)均有所升高，但差異性無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

如圖1c所示，與對照組相比，模型組小鼠的肺臟指數(shù)顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，F(xiàn)FJH高劑量組的肺臟指數(shù)顯著降低（P＜0.01）。

2.FFJH對免疫抑制小鼠血清細(xì)胞因子表達(dá)水平的影響。如圖2a所示，與對照組相比，模型組小鼠血清中的細(xì)胞因子IL-2表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）；與模型組相比，藥物組和FFJH高、中劑量組小鼠血清中的細(xì)胞因子IL-2表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）。

如圖2b所示，與對照組相比，模型組小鼠血清中的細(xì)胞因子IFN-γ表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）；與模型組相比，藥物組和FFJH高、中劑量組小鼠血清中的細(xì)胞因子IFN-γ表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）。

如圖2c所示，與對照組相比，模型組小鼠血清中的細(xì)胞因子TNF-α表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，F(xiàn)FJH高、中劑量組小鼠血清中的細(xì)胞因子TNF-α表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）。

3.FFJH對免疫抑制小鼠肺組織勻漿液ACE2和AngⅡ表達(dá)水平的影響。如圖3a所示，與對照組相比，模型組小鼠的肺組織勻漿液中ACE2表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）；與模型組相比，F(xiàn)FJH高、中小鼠的肺組織勻漿液中ACE2表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）。

如圖3b所示，與對照組相比，模型組小鼠的肺組織勻漿液中AngⅡ表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，F(xiàn)FJH高、中劑量組小鼠的肺組織勻漿液中AngⅡ表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）。

四、結(jié)論與討論

胸腺指數(shù)的變化直接反映機(jī)體細(xì)胞免疫水平的高低。IL-2、IFN-γ是具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫作用的細(xì)胞因子，也是評價機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的重要指標(biāo)。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）與非小細(xì)胞肺癌進(jìn)展有關(guān)，ACE2還可以將腎素-血管緊張素系統(tǒng)中的AngⅡ降解成血管緊張素1-7，從而發(fā)揮抗炎、抗纖維化作用。ACE2活性功能受阻將導(dǎo)致AngⅡ升高，進(jìn)一步誘導(dǎo)炎癥因子（如IL-1β、IL-6、TNF-α）、趨化因子等多種物質(zhì)的表達(dá)。

與模型組相比，小鼠按照FFJH低、中、高劑量給藥后，高劑量組小鼠的胸腺指數(shù)、肺臟指數(shù)顯著降低；FFJH高、中劑量組小鼠血清中的細(xì)胞因子IL-2表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01），IFN-γ表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01），TNF-α表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）；FFJH高、中劑量組小鼠肺組織勻漿液中ACE2表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01），AngⅡ表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）。實驗結(jié)果表明，F(xiàn)FJH可能通過改善胸腺組織結(jié)構(gòu)、調(diào)節(jié)炎癥胞因子、調(diào)節(jié)肺組織AngⅡ的表達(dá)水平而影響環(huán)磷酰胺所致免疫缺陷小鼠的免疫功能。

作者簡介：王麗霞（1986-），女，漢族，北京大興人，大學(xué)本科，研究方向為功能性食品。