李永偉 王嘉藝 劉冬梅 胡玥 劉玉春 劉心偉

［摘要］ 目的 探討親環(huán)素A（CypA）及其受體CD147在醫(yī)院獲得性銅綠假單胞菌（PA）肺炎病人中的表達(dá)及意義。

方法 收集2021年1—12月在河南省中醫(yī)院住院的罹患PA肺炎和肺炎克雷伯菌（KP）肺炎病人的臨床資料。將病人分為PA組和KP組，對(duì)兩組EDTA抗凝血進(jìn)行血常規(guī)、降鈣素原和C－反應(yīng)蛋白分析，并測(cè)定兩組血清和支氣管肺泡灌洗液中CypA和CD147水平。

結(jié)果 PA組住院時(shí)長(zhǎng)和抗菌藥物使用時(shí)長(zhǎng)顯著高于KP組（t=7.332、9.919，P＜0.05），而兩組發(fā)病年齡和性別差異無(wú)顯著性（P>0.05）。與KP組相比，PA組白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞和C－反應(yīng)蛋白水平顯著降低（t=4.438、3.982，Z=4.010，P＜0.05），而兩組降鈣素原水平差異無(wú)顯著性（P>0.05）。與KP組相比，PA組支氣管肺泡灌洗液中CypA水平顯著降低（Z=2.818，P＜0.05），而兩組血清CypA和CD147及支氣管肺泡灌洗液CD147水平差異無(wú)顯著性（P>0.05）。

結(jié)論 PA肺炎病人支氣管肺泡灌洗液中CypA相對(duì)低表達(dá)，與該菌感染慢性化存在關(guān)聯(lián)，可能是其實(shí)現(xiàn)免疫逃逸的重要機(jī)制。

［關(guān)鍵詞］ 醫(yī)療相關(guān)肺炎；銅綠假單胞菌；親環(huán)素A；basigin

［中圖分類號(hào)］ R563.19

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］ A

［文章編號(hào)］ 2096－5532（2023）02－0250－04

doi：10.11712/jms.2096－5532.2023.59.060

［開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）］

醫(yī)院獲得性肺炎是指病人入院時(shí)未發(fā)生、亦不處在潛伏感染期，在入院48 h后發(fā)生，無(wú)論是否存在機(jī)械通氣或插管，由細(xì)菌、真菌、病毒或支原體等病原體引起的各種類型的肺實(shí)質(zhì)炎癥。在重癥監(jiān)護(hù)病房中，醫(yī)院獲得性肺炎是最為常見的院內(nèi)感染類型，占比高達(dá)65%。而銅綠假單胞菌（PA）位列此類感染病原菌首位，具有耐藥性強(qiáng)、發(fā)病率和死亡率高及預(yù)后差等特點(diǎn)。PA在新陳代謝方面的靈活性，為該菌造成慢性感染奠定了基礎(chǔ)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，CD147可通過MAPK信號(hào)通路增強(qiáng)宿主對(duì)PA感染的抵抗力，而胞外親環(huán)素A（CypA）是CD147最為重要的配體，在多種病原微生物感染和宿主免疫調(diào)節(jié)過程中扮演著重要的角色。近期有研究發(fā)現(xiàn)，胞外CypA是通氣相關(guān)性肺炎發(fā)病過程中的重要炎癥遞質(zhì)。本研究旨在通過比較PA和肺炎克雷伯菌（KP）導(dǎo)致的醫(yī)院獲得性肺炎病人體內(nèi)胞外CypA和CD147及相關(guān)炎癥指標(biāo)的差異，初步探討胞外CypA和CD147在PA感染過程中的作用和意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

2021年1—12月，選取河南省中醫(yī)院收治的由PA或KP導(dǎo)致的醫(yī)院獲得性肺炎病人56例作為研究對(duì)象?？剖曳植迹褐匕Y醫(yī)學(xué)科16例，神經(jīng)外科18例，腦病科10例，急診科5例，肺病科4例，老年醫(yī)學(xué)科3例。入院診斷分布：吸入性肺炎5例，重度顱腦損傷12例，高血壓性腦出血8例，慢性阻塞性肺疾病發(fā)作期11例，支氣管擴(kuò)張3例，惡性腫瘤晚期9例，白血病粒細(xì)胞缺乏4例，呼吸心跳驟停4例。本文56例病人臨床診斷均符合醫(yī)院獲得性肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)支氣管肺泡灌洗液細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果將56例病人分為2組，其中PA組26例，KP組30例。本研究經(jīng)河南省中醫(yī)院（河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院）醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

利用醫(yī)院信息管理系統(tǒng)收集血常規(guī)、C－反應(yīng)蛋白（CRP）和降鈣素原（PCT）檢測(cè)結(jié)果，其中血常規(guī)測(cè)定使用日本Sysmex XN－3000細(xì)胞計(jì)數(shù)儀及其配套試劑，CRP測(cè)定使用上?；骺萍糛uikRead go CRP及其配套試劑，PCT的測(cè)定使用法國(guó)梅里埃mini－VIDAS全自動(dòng)免疫熒光分析儀及B.R.A.H.M.S PCT原裝試劑。常規(guī)收集兩組病人的血清和支氣管肺泡灌洗液，-80 ℃凍存?zhèn)溆谩Ｊ褂妹嘎?lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒對(duì)血清和支氣管肺泡灌洗液的CypA、CD147和白細(xì)胞介素6（IL－6）水平進(jìn)行檢測(cè)，人胞外CypA試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司，人EMMPRIN/CD147試劑盒購(gòu)自深圳欣博盛生物科技有限公司，人IL－6試劑盒購(gòu)自上海BBI生命科學(xué)有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，使用GraphPad Prism 9.0軟件輸出統(tǒng)計(jì)圖表。正態(tài)性檢驗(yàn)采用獨(dú)立樣本Kolmogorov－Smironv檢驗(yàn)。正態(tài)分布計(jì)量資料以±s表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布計(jì)量資料以P50（P25～P75）表示，兩組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組病人基線資料比較

PA組住院時(shí)長(zhǎng)和抗菌藥物使用時(shí)長(zhǎng)顯著高于KP組（t=7.332、9.919，P＜0.05），而兩組性別和年齡差異無(wú)顯著性（P>0.05）。見表1。

2.2 兩組病人感染指標(biāo)比較

與KP組相比，PA組白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞和CRP水平顯著降低（t=4.438、3.982，Z=4.010，P＜0.05），而兩組血清PCT水平差異無(wú)顯著意義（Z=0.288，P>0.05）。見表2。

2.3 兩組病人CypA、CD147和IL－6水平比較

與KP組相比較，PA組支氣管肺泡灌洗液中CypA水平顯著降低（Z=2.818，P＜0.05），而兩組血清CypA和CD147及支氣管肺泡灌洗液CD147水平差異無(wú)顯著性（Z=0.424～1.576，P>0.05）。PA組病人血清及支氣管肺泡灌洗液中IL－6水平均顯著低于KP組（t=9.525、6.818，P＜0.05）。見表3。

3 討論

PA作為醫(yī)院獲得性細(xì)菌性肺炎的重要病原菌，表現(xiàn)出對(duì)多種抗菌藥物的耐藥性，已經(jīng)被WHO列為了亟待研發(fā)新型抗菌藥物來(lái)治療的ESKAPE（Enterococcus faecium，Staphylococcus aureus，Klebsiella pneumonia，Acinetobacter baumannii， Pseudomonas aeruginosa，Enterobacter species）菌群因而備受關(guān)注。醫(yī)院獲得性PA肺炎的最顯著特征是肺部感染易慢性化、遷延不愈，導(dǎo)致病人抗感染治療周期和住院時(shí)間延長(zhǎng)，從而給病人造成沉重的生理負(fù)擔(dān)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。PA的上述致病特征，一方面與該菌存在固有耐藥性和易產(chǎn)生獲得性耐藥導(dǎo)致抗感染治療失敗有關(guān)，另一方面則與其損害宿主天然免疫功能、逃避宿主免疫反應(yīng)密切相關(guān)。因此，深入探究PA逃避宿主免疫反應(yīng)的分子機(jī)制，尋找新的治療靶點(diǎn)，對(duì)于PA相關(guān)感染的臨床治療具有重要意義。

細(xì)菌性肺炎時(shí)，病人白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、CRP和PCT水平顯著升高。本文研究結(jié)果顯示，兩組細(xì)菌性肺炎病人的上述指標(biāo)均出現(xiàn)一定程度的升高，符合細(xì)菌性肺炎的感染指標(biāo)特征，但兩組肺炎病人感染指標(biāo)的升高幅度并不相同。從白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞和CRP來(lái)看，PA組顯著低于KP組，感染程度相對(duì)較輕。然而兩組病人抗感染治療周期和住院時(shí)長(zhǎng)差異均具有顯著性，我們認(rèn)為這可能與兩種病原菌導(dǎo)致肺炎的致病特征差別有關(guān)，即PA為了維持自身在宿主中持續(xù)存在，會(huì)降低其毒力因子表達(dá)而弱化致病性，表現(xiàn)出相對(duì)較輕的感染癥狀，但會(huì)導(dǎo)致持續(xù)性、反復(fù)性感染。本文兩組病人血清PCT水平差異無(wú)顯著性，可能與肺炎得到及時(shí)有效干預(yù)，未進(jìn)一步向膿毒癥發(fā)展有關(guān)。

CypA是免疫親環(huán)素家族的關(guān)鍵成員之一，是目前已知的18種人類親環(huán)素中表達(dá)最為豐富的同工酶。在感染、氧化應(yīng)激和低氧的情況下，CypA自發(fā)分泌到細(xì)胞外成為胞外CypA，并在一些生理或者病理過程中發(fā)揮重要的作用，例如炎癥、病原體感染和復(fù)制、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移等。我們的前期研究結(jié)果顯示，在PA刺激下，作為胞外CypA重要受體的CD147表達(dá)顯著上調(diào)，但對(duì)胞外CypA的表達(dá)情況未進(jìn)行深入探究。本研究結(jié)果顯示，兩組病人血清和支氣管肺泡灌洗液中CD147水平的升高差異無(wú)顯著性，說(shuō)明細(xì)菌性肺炎時(shí)，無(wú)論外周血還是局部組織中游離CD147水平均會(huì)出現(xiàn)無(wú)差別升高，不具有病原菌種屬特異性。兩組病人外周血中CypA水平差異也無(wú)顯著性，這可能與感染局限在肺部尚未波及全身有關(guān)。大量研究證明，在感染性疾病過程中，胞外CypA會(huì)與跨膜受體CD147結(jié)合激活核因子κB，促進(jìn)炎性細(xì)胞因子IL－6的表達(dá)。IL－6是最重要的炎癥細(xì)胞因子，在宿主防御過程中發(fā)揮重要作用。IL－6可誘導(dǎo)CRP合成，促進(jìn)中性粒細(xì)胞從骨髓釋放，增強(qiáng)其殺傷病原體能力，加快病原菌的清除。本研究中兩組病人胞外CypA和IL－6、CRP、中性粒細(xì)胞均出現(xiàn)同步升高，表明胞外CypA在宿主抗細(xì)菌感染中具有重要作用，與上述結(jié)論一致。

人體針對(duì)病原菌的炎癥反應(yīng)有利于病原菌的快速清除，保護(hù)機(jī)體正常生理功能。而PA為了維持其在宿主體內(nèi)的持續(xù)生存，會(huì)形成生物被膜，降低其毒力因子的表達(dá)，逃避宿主免疫反應(yīng)，誘發(fā)低水平炎癥反應(yīng)。本研究中，與KP組相比，PA組白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、CRP、胞外CypA和IL－6均出現(xiàn)同步的相對(duì)低水平表達(dá)，而住院時(shí)長(zhǎng)和抗菌藥物使用時(shí)長(zhǎng)則呈現(xiàn)相反趨勢(shì)。推測(cè)這可能與PA通過某種途徑降低胞外CypA的表達(dá)，誘發(fā)低水平炎癥反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)免疫逃逸有關(guān)，而確切機(jī)制有待于進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，本研究初步揭示了胞外CypA及其受體CD147在宿主抗PA感染中的重要作用，胞外CypA在醫(yī)院獲得性PA肺炎病人支氣管肺泡灌洗液中的相對(duì)低表達(dá)，可能與PA弱化其毒力從而逃避宿主免疫反應(yīng)有關(guān)。但鑒于病原菌與宿主相互作用的復(fù)雜性，這一結(jié)論仍需要?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)等相關(guān)研究進(jìn)一步加以驗(yàn)證。

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（本文編輯 馬偉平）