雷小文 顏語(yǔ) 吳麗娟 李秋粉 李建軍 鐘云平 黎觀紅

摘要：為探討飼糧中添加蚯蚓液對(duì)高溫環(huán)境下肉雞生長(zhǎng)性能和腸道屏障功能的影響，選取21日齡健康狀況良好、體質(zhì)量相近的817肉公雞288羽，隨機(jī)分成4個(gè)處理組，每個(gè)處理組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12羽雞，肉雞飼養(yǎng)于夏季高溫環(huán)境中。4個(gè)處理組飼糧分別添加0.0%（對(duì)照組）、0.5%、2.0%、3.5%蚯蚓液，試驗(yàn)期為21d。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，飼糧添加3.5%蚯蚓液顯著提高肉雞平均日采食量（P<0.05），并有提高平均日增質(zhì)量的趨勢(shì)（P=0.095）。與對(duì)照組相比，飼糧添加0.5%和2.0%蚯蚓液顯著提高肉雞回腸黏膜總抗氧化力和過(guò)氧化氫酶活性（P<0.05），顯著降低回腸黏膜丙二醛水平（P<0.05）。與對(duì)照組相比，飼糧添加2.0%蚯蚓液顯著提高肉雞回腸絨毛高度（P<0.05），飼糧添加蚯蚓液顯著降低肉雞血清二胺氧化酶、D-乳酸和內(nèi)毒素水平（P<0.05），顯著提高空腸和回腸黏膜sIgA水平（P<0.05）。以上結(jié)果表明，飼糧添加蚯蚓液可不同程度地提高高溫環(huán)境下肉雞生產(chǎn)性能和小腸黏膜抗氧化能力，緩解高溫環(huán)境對(duì)肉雞小腸黏膜屏障功能的損傷。

關(guān)鍵詞：高溫；蚯蚓液；肉雞；生產(chǎn)性能；腸道屏障功能

中圖分類號(hào)：S831.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2023）10-0163-05

家禽是熱敏感動(dòng)物，極易受高溫應(yīng)激而影響其生產(chǎn)性能。腸道是應(yīng)激反應(yīng)的靶器官，極易受到高溫應(yīng)激、環(huán)境缺氧等因素的影響，造成黏膜損傷，進(jìn)而引起腸道細(xì)菌易位和內(nèi)毒素侵入機(jī)體并引起其他組織器官功能變化或損傷［1］。國(guó)內(nèi)外研究揭示，高溫應(yīng)激導(dǎo)致家禽腸道黏膜屏障結(jié)構(gòu)和功能損傷，影響其對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)正常的消化吸收功能，并提高對(duì)病原菌的易感性，最終導(dǎo)致其生產(chǎn)性能下降［2-3］。蚯蚓富含蛋白質(zhì)、脂肪、維生素和微量元素，且含有多種核苷酸、蚯蚓素、蚯蚓堿、琥珀酸、膽堿、膽甾醇等活性物質(zhì)［4］。蚯蚓液，又分蚯蚓自溶液、蚯蚓提取物等。蚯蚓體內(nèi)含有的蛋白水解酶如纖溶酶等，在高溫等特定條件下，可使蚯蚓自身溶解成液體，這種自溶方法提取率一般為75%以上［5］。研究表明，蚯蚓液可改善家禽的生長(zhǎng)性能，提高家禽免疫能力［6-7］。然而，蚯蚓及其制品在緩解肉雞熱應(yīng)激損傷研究還未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)旨在探究熱應(yīng)激條件下飼糧中添加蚯蚓液對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能和小腸屏障功能的影響，為蚯蚓產(chǎn)品在緩解肉雞熱應(yīng)激損傷方面提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1蚯蚓液的制備

蚯蚓品種為大平2號(hào)與大平3號(hào)，養(yǎng)殖周期為15d。收集成熟的蚯蚓制備蚯蚓液，蚯蚓液的制備參照雷小文等的方法［8］。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選用健康良好的15日齡817肉公雞350羽，常規(guī)飼養(yǎng)以及免疫，飼喂至21日齡，選取健康，體質(zhì)量相近288羽，隨機(jī)分成4個(gè)處理組，蚯蚓液添加量分別為0.0%（對(duì)照組）、0.5%、2.0%、3.5%，每個(gè)處理組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12羽雞，飼養(yǎng)至42日齡。試驗(yàn)于2020年江西省南昌市江西農(nóng)業(yè)大學(xué)畜禽飼養(yǎng)基地進(jìn)行，飼養(yǎng)期間處于南昌夏季高溫（2020年8月10—31日，共21d），每日09：00—17：00的平均溫度為33.4℃。

1.3試驗(yàn)飼糧與飼養(yǎng)管理

本試驗(yàn)采用玉米-豆粕型飼糧，參考我國(guó)《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NT/T33—2004）推薦的營(yíng)養(yǎng)水平進(jìn)行配制（表1）。試驗(yàn)采用4層籠養(yǎng)飼養(yǎng)法，乳頭式自動(dòng)飲水，所有試驗(yàn)雞均自由采食和飲水。試驗(yàn)前對(duì)雞舍和周圍環(huán)境進(jìn)行嚴(yán)格消毒。采用連續(xù)光照、自然通風(fēng)。每天定時(shí)清理食槽，清理糞盤(pán)并消毒，雞羽按正常免疫程序進(jìn)行。

1.4樣品采集與制備

在42日齡時(shí)，肉雞提前禁食12h，期間自由飲水，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1羽肉雞，翅靜脈采血10mL，3000r/min離心8min，分離血清，-20℃保存?zhèn)溆谩２裳罅⒓磾囝i處死，剖開(kāi)腹腔，采集空腸、回腸中段4cm，采用DEPC水洗凈內(nèi)容物，置于裝有10%甲醛溶液中固定，用于制作腸道切片。采集空腸和回腸中下段，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗干凈內(nèi)容物，刮取腸黏膜并置于凍存管中，迅速放入液氮罐中，后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5測(cè)定指標(biāo)與方法

1.5.1生長(zhǎng)性能

分別在肉雞21日齡、42日齡的08：00對(duì)每組每重復(fù)雞稱空腹質(zhì)量，每天記錄每個(gè)重復(fù)飼糧的飼喂量和剩余量，計(jì)算平均日采食量（ADFI）、平均日增質(zhì)量（ADG）和料質(zhì)量比（F/G）。

1.5.2小腸黏膜抗氧化指標(biāo)的測(cè)定

分別取空腸、回腸腸段，快速刮取腸黏膜，放入凍存管于-20℃冰箱保存。采用生理鹽水制備10%組織勻漿，離心取上清進(jìn)行抗氧化指標(biāo)的檢測(cè)，采用BCA法測(cè)定上清液的蛋白濃度。采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定總抗氧化能力（T-AOC）、過(guò)氧化氫酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量。

1.5.3小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的測(cè)定

將固定好的腸道樣品經(jīng)脫水-透明-浸蠟-石蠟包埋-切片（5μm厚）-染色（蘇木精-伊紅，HE染色），最后通過(guò)光學(xué)顯微鏡拍照并觀察切片，利用MoticImagesAdvanced3.2圖像軟件測(cè)量絨毛高度（VH）和隱窩深度（CD）并計(jì)算絨毛高度和隱窩深度比值（V/C）。

1.5.4血清二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸（D-LA）和內(nèi)毒素（LPS）含量的測(cè)定

采用南京建成生物工程研究所的試劑盒，并嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定DAO活性、D-LA和LPS含量。

1.5.5小腸黏膜分泌型IgA（sIgA）含量的測(cè)定

空腸和回腸黏膜sIgA含量采用上海酶聯(lián)生物科技有限公司的試劑盒并用ELISA法測(cè)定，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS22.0軟件中的one-wayANOVA過(guò)程進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncans法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著，0.05

2結(jié)果與分析

2.1飼糧添加蚯蚓液對(duì)高溫環(huán)境下肉雞生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，與對(duì)照組相比，飼糧中添加3.5%蚯蚓液顯著提高高溫環(huán)境下21～42日齡肉雞平均日采食量（P<0.05）。飼糧添加蚯蚓液對(duì)高溫環(huán)境下，21～42日齡肉雞的料質(zhì)量比無(wú)顯著影響（P>0.05），但有提高平均日增質(zhì)量趨勢(shì)（P=0.095）。

2.2飼糧添加蚯蚓液對(duì)高溫環(huán)境下肉雞小腸黏膜抗氧化能力的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，飼糧添加0.5%蚯蚓液極顯著提高高溫環(huán)境下肉雞回腸黏膜T-AOC水平（P<0.01），添加0.5%、2.0%和3.5%蚯蚓液均極顯著提高高溫環(huán)境下肉雞回腸黏膜CAT活性（P<0.01），添加0.5%和2.0%蚯蚓液顯著降低高溫環(huán)境下肉雞回腸黏膜中MDA含量（P<0.05）。與對(duì)照組相比，飼糧添加不同含量蚯蚓液對(duì)空腸黏膜MDA含量、T-AOC水平和CAT活性均無(wú)顯著影響（P>0.05）。

2.3飼糧添加蚯蚓液對(duì)高溫環(huán)境下肉雞小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，飼糧中添加不同含量蚯蚓液對(duì)高溫環(huán)境下肉雞空腸的絨毛高度、隱窩深度和V/C值均無(wú)顯著影響（P>0.05），對(duì)高溫環(huán)境下肉雞回腸隱窩深度和V/C值無(wú)顯著影響（P>0.05），飼糧添加2%蚯蚓液顯著提高高溫環(huán)境下肉雞回腸絨毛高度（P<0.05）。

2.4飼糧添加蚯蚓液對(duì)高溫環(huán)境下肉雞血清DAO、D-LA和LPS含量的影響

由表5可知，與對(duì)照組相比，飼糧中添加不同含量蚯蚓液顯著降低高溫環(huán)境下肉雞血清中D-LA的水平（P<0.05），極顯著降低高溫環(huán)境下肉雞血清中DAO和LPS的水平（P<0.01）。

2.4飼糧添加蚯蚓液對(duì)高溫環(huán)境下肉雞小腸黏膜sIgA含量的影響

由表6可知，飼糧添加不同含量的蚯蚓液均極顯著提高高溫環(huán)境下肉雞空腸黏膜sIgA含量（P<0.01），飼糧添加0.5%蚯蚓液極顯著提高高溫環(huán)境下肉雞回腸黏膜sIgA含量（P<0.01）。

3討論

肉雞是熱敏感動(dòng)物，全身覆蓋羽毛，且皮膚表層缺乏汗腺，極易遭受高溫應(yīng)激。研究表明，高溫應(yīng)激引起肉雞采食量下降、飼料轉(zhuǎn)化率降低，損傷腸道黏膜屏障結(jié)構(gòu)和功能，影響其對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)正常的消化吸收功能，并增加對(duì)病原菌的易感性，最終導(dǎo)致生產(chǎn)性能下降［9-10］。高溫應(yīng)激成為影響肉雞養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)效益的重要因素之一。由于養(yǎng)殖實(shí)踐中的技術(shù)限制和經(jīng)濟(jì)成本等原因，營(yíng)養(yǎng)干預(yù)成為緩解肉雞高溫應(yīng)激的重要手段［11］。蚯蚓是我國(guó)重要的中藥材之一，蚯蚓富含多種生物活性物質(zhì)。筆者所在課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加蚯蚓液可提高番鴨和寧都黃雞生產(chǎn)性能［7-8］。本研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加3.5%蚯蚓液顯著提高高溫環(huán)境下21～42日齡肉雞平均日采食量，并有提高日增質(zhì)量的趨勢(shì)，但對(duì)飼料轉(zhuǎn)化率無(wú)顯著。由于熱應(yīng)激會(huì)激活下丘腦-垂體-腎上腺軸，繼而影響攝食中樞與消化道交感神經(jīng)，最終導(dǎo)致采食量下降［12］，而蚯蚓液本身富含“鮮味氨基酸”谷氨酸，可提高飼糧適口性，對(duì)生產(chǎn)性能具有一定的改善作用。

在熱應(yīng)激條件下，機(jī)體產(chǎn)生過(guò)量活性氧，機(jī)體抗氧化穩(wěn)態(tài)失衡，導(dǎo)致氧化應(yīng)激［13］，機(jī)體氧化應(yīng)激導(dǎo)致體內(nèi)自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化物大量累積，SOD作為抗氧化酶系的第一道防線，首先將其催化同時(shí)生成H2O2，而后CAT與GHS-Px再對(duì)SOD的催化產(chǎn)物進(jìn)行清除。MDA是自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)的氧化終產(chǎn)物，具有細(xì)胞毒性，能夠反映機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化程度。蚯蚓液富含SOD、CAT及過(guò)氧化物酶（POD），具有較強(qiáng)的抗氧化作用，對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化物及自由基具有清除作用［14］。本試驗(yàn)在飼糧中添加蚯蚓液，相較于對(duì)照組，顯著降低了熱應(yīng)激肉雞回腸黏膜中MDA水平，顯著提高了回腸中T-AOC水平。同時(shí)，添加蚯蚓液均能顯著提高回腸黏膜中CAT酶活，這與周億金等的研究結(jié)果［15］一致。這些研究結(jié)果表明，蚯蚓液可通過(guò)提高腸道抗氧化能力，減少高溫環(huán)境下肉雞機(jī)體自由基與脂質(zhì)過(guò)氧化物的產(chǎn)生，從而提高腸道健康。

腸道既是機(jī)體的消化器官，又是重要的免疫器官，同時(shí)又是熱應(yīng)激主要的靶器官之一。研究表明，熱應(yīng)激損害腸道黏膜組織形態(tài)，絨毛萎縮變短、隱窩深度增加、消化和免疫功能受損［16-17］。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加2%蚯蚓液能顯著提高42日齡肉雞回腸黏膜小腸絨毛長(zhǎng)度，這表明飼糧中添加蚯蚓液能在一定程度上緩解高溫環(huán)境下肉雞回腸黏膜結(jié)構(gòu)損傷。腸道黏膜的完整性對(duì)于上皮細(xì)胞的正常功能和防止腸腔內(nèi)有害致病菌進(jìn)入血液循環(huán)至關(guān)重要。內(nèi)毒素（LPS）是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁中的一種高致病性成分，在應(yīng)激條件下高濃度LPS存在于腸腔中，當(dāng)腸道屏障受損時(shí)釋放到血液［18］。體循環(huán)中LPS濃度的增加表明腸道屏障功能受損［17］。D-LA是腸道細(xì)菌的產(chǎn)物，腸道菌群失衡導(dǎo)致D-LA過(guò)度產(chǎn)生，在機(jī)體腸道黏膜屏障受損時(shí)，腸道黏膜通透性增加，使得血液中D-LA水平升高［19］。DAO主要存在于小腸絨毛，DAO可通過(guò)受損的腸道屏障進(jìn)入血液［20］。因此，血清LPS、D-LA和DAO濃度通常被用來(lái)作為評(píng)價(jià)腸黏膜屏障完整性和通透性的標(biāo)志物。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧添加蚯蚓液顯著降低高溫環(huán)境下肉雞血清D-LA水平，極顯著降低熱應(yīng)激肉雞血清中DAO和LPS水平，由此表明，蚯蚓液可改善高溫環(huán)境下肉雞腸道黏膜結(jié)構(gòu)，緩解高溫應(yīng)激引起的腸道屏障損傷。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加蚯蚓液能顯著提高高溫環(huán)境下肉雞空腸和回腸黏膜重要防御因子sIgA水平。提示飼糧中添加蚯蚓液可顯著提高高溫應(yīng)激條件下肉雞腸道免疫功能，提高肉雞抗應(yīng)激能力。

4結(jié)論

綜上所述，飼糧中添加蚯蚓液可不同程度地提高高溫環(huán)境下肉雞生產(chǎn)性能和小腸黏膜抗氧化能力，改善高溫環(huán)境下肉雞腸道黏膜結(jié)構(gòu)和免疫功能，緩解高溫環(huán)境對(duì)肉雞小腸黏膜屏障功能的損傷。

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