◎ 吳愛金

（桂平市公共檢驗檢測中心，廣西 桂平 537200）

由于按照《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》（NY/T 761—2008）標準檢測有機磷農(nóng)殘時，存在水果、蔬菜基質(zhì)給農(nóng)殘分析結(jié)果帶來干擾的問題，對分析結(jié)果精準性帶來影響，這種因果蔬樣品基體物質(zhì)帶來的影響和干擾，就是基質(zhì)效應(yīng)。而在生物檢測中，常見的色譜、質(zhì)譜或者色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測時，基質(zhì)效應(yīng)較為常見。按照基質(zhì)給檢測信號帶來的響應(yīng)值不同的特點，基質(zhì)效應(yīng)可分為增強和減弱兩種效應(yīng)。因此，在本研究中，將通過基質(zhì)影響實驗，優(yōu)化NY/T 761—2008的抽樣檢測方法。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

花菜、蘿卜、土豆、蒜苗和蘋果，從梧州市選取市場銷售的陰性果蔬樣品，即果蔬中沒有檢出有機磷農(nóng)藥；丙酮、乙腈、氯化鈉和農(nóng)藥標準溶液（9種，分別是甲胺磷、甲基對硫磷、敵敵畏、樂果、氧樂果、馬拉硫磷、三唑磷、毒死蜱和倍硫磷）。氣相色譜儀、氮吹儀、臺式高速冷凍離心機、振蕩器、電子天平、可調(diào)移液器、勻漿機、瓶口分液器、超純水機、超聲儀、烘箱以及冰箱[1]。

1.2 實驗方法

1.2.1 試樣處理

根據(jù)NY/T 761—2008 標準的抽樣方法，抽取水果和蔬菜樣品，將其縮分切碎后，置于勻漿機打碎，成為待測試樣，并封裝在聚乙烯自封袋中，在-20 ℃環(huán)境下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 配制標準溶液

本研究的標準溶液均為100 μg·mL-1；標準儲備液為10 μg·mL-1。精準移取標準溶液1.00 mL（濃度為100 μg·mL-1）到10 mL 容量瓶中，再添加丙酮稀釋到刻度后，搖勻備用。在配制其他系列標準溶液濃度時，在1.00 μg·mL-1的標準濃度下，取標準溶液200 μL（濃度為10 μg·mL-1），溶劑為基質(zhì)液1 800 μL；在0.50 μg·mL-1的標準濃度下，從上一級標準溶液取1 000 μL（濃度為1.0 μg·mL-1），溶劑為基質(zhì)液1 000 μL；在0.20 μg·mL-1的標準濃度下，從上一級標準溶液取800 μL（濃度為0.5 μg·mL-1），溶劑為基質(zhì)液1 200 μL；在0.05 μg·mL-1的標準濃度下，從上一級標準溶液取500 μL（濃度為0.20 μg·mL-1），溶劑為基質(zhì)液1 500 μL；在0.02 μg·mL-1的標準濃度下，從上一級標準溶液取400 μL（濃度為0.05 μg·mL-1），溶劑為基質(zhì)液600 μL。其中，基質(zhì)液是從多種不同的陰性水果中提取的基體，再將其分別溶解到含有丙酮的溶液中獲取[2]。

1.2.3 有機磷農(nóng)藥前處理

稱取5.0 g 處理后的樣品，置于50 mL 離心管，再添加10 mL 乙腈，搖勻后，置于振蕩器振蕩5 min，待混合充分后，置于離心機離心處理4 min（離心機轉(zhuǎn)速4 000 r·min-1）。再取上清液10 mL，將其置于含有氯化鈉（1.0 g·L-1）的離心管（50 mL），置于振蕩器振蕩5 min，再置于離心機離心處理4 min（離心機轉(zhuǎn)速4 000 r·min-1）。取上清液2 mL，將其置于2 mL離心管中，利用氮吹儀在75 ℃下蒸發(fā)近干后，添加1 mL 丙酮于2 mL 離心管中，將其充分均勻振動后，用0.22 μm的濾膜，將其過濾到2 mL進樣瓶中，備測[3]。

1.2.4 氣相色譜條件

本試驗色譜柱為Agilent DB-1（30 m×250 μm，0.25 μm）。柱溫最初為150 ℃，保持2 min 后，按照8 ℃·min-1的速度升高到250 ℃，再保持5 min。色譜柱的流量為2 mL·min-1。進樣口和檢測器的溫度分別為220 ℃與250 ℃。采用火焰光度檢測器與磷濾光片。氫氣、空氣、氮氣的流速分別為75 mL·min-1、100 mL·min-1、100 mL·min-1，采取不分流進樣的方式進樣[4]。

1.2.5 計算定量結(jié)果

在試樣中，被測的農(nóng)殘按照質(zhì)量分數(shù)計算，單位為mg·kg-1，計算公式為

式中：ρ為標準溶液農(nóng)藥質(zhì)量濃度，μg·mL-1；A為標準溶液被測農(nóng)藥峰面積；AS為農(nóng)藥標準溶液被測農(nóng)藥峰面積；V1為溶劑提取總體積，mL；V2為用于檢測吸取的溶劑提取體積，mL；V3為樣品溶液的定容體積，mL；m為試樣質(zhì)量，g。

1.2.6 基質(zhì)影響實驗

將5 類陰性果蔬樣品均勻制樣后，添加濃度一致（0.20 mg·kg-1）的9 種不同有機磷農(nóng)藥，按照上述試驗方法進行加標回收試驗。

1.2.7 基質(zhì)干擾消除實驗

本研究結(jié)合以上每種有機磷農(nóng)藥在每種果蔬中的基質(zhì)效應(yīng)，選擇基質(zhì)匹配標準溶液標準法開展基質(zhì)干擾消除實驗。選擇蘿卜和蘋果作為樣品，將二者按照1.2.3 所示方法提取陰性空白基質(zhì)，分別選取丙酮（以下簡稱BTO）、含有蘋果基質(zhì)的丙酮（以下簡稱BT1）、含有蘿卜基質(zhì)的丙酮（以下簡稱BT2）作為溶劑標準曲線，標準溶液的濃度從大到小分別為1.00 mg·kg-1、0.50 mg·kg-1、0.20 mg·kg-1、0.05 mg·kg-1和0.02 mg·kg-1，將得到的標準曲線斜率作為縱向坐標，將不同農(nóng)藥作為橫向坐標，制圖后分析蘋果、蘿卜基質(zhì)對上述9 種有機磷農(nóng)藥帶來的基質(zhì)效應(yīng)[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 基質(zhì)影響實驗結(jié)果

將5 類陰性果蔬樣品均勻制樣后，添加濃度一致（0.20 mg·kg-1）的9 種不同有機磷農(nóng)藥，按照上述試驗方法和表1 所示的標準添加回收率進行試驗。

表1 果蔬有機磷農(nóng)藥加標回收率表（單位：%）

由表1 可知，每一種有機磷農(nóng)藥在不同果蔬樣品的基質(zhì)效應(yīng)表現(xiàn)的強度均不同，且每一種果蔬樣品中的每一種有機磷農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)影響也不同，按照有機磷農(nóng)藥加標回收率范圍，得到每種農(nóng)藥對每種果蔬的基質(zhì)效應(yīng)影響水平，具體結(jié)果如下。①蒜苗中由于含有硫化物，因此整體回收率較高。②敵敵畏的加標回收率偏低，這與其沸點只有74 ℃有關(guān)，前處理時的氮吹溫度為75 ℃，因此會導(dǎo)致?lián)p失。③回收率較低的農(nóng)藥分別為甲基對硫磷、馬拉硫磷、毒死蜱和倍硫磷，即基體效應(yīng)影響較低。④強基質(zhì)效應(yīng)的農(nóng)藥分別為樂果、氧樂果、三唑磷，即對測定結(jié)果有較大影響。⑤甲胺磷的基質(zhì)效應(yīng)無明顯規(guī)律。

2.2 基質(zhì)干擾消除實驗結(jié)果

根據(jù)圖1 得到的農(nóng)藥在果蔬（蘋果與蘿卜）中的基質(zhì)效應(yīng)。再往蘋果和蘿卜的陰性樣品添加濃度為0.2 mg·kg-1的9 種有機磷混合標準（n=2），再分別添加陰性基質(zhì)的標準曲線對回收率進行計算，得到表2所示結(jié)果。

圖1 農(nóng)藥在果蔬（蘋果與蘿卜）中的基質(zhì)效應(yīng)圖

表2 9 種有機磷農(nóng)藥在蘋果和蘿卜中的加標回收率表（單位：%）

由表2 可知，在標準溶液中加入陰性基質(zhì)后，校準的曲線結(jié)果能確保加標回收率在81%～111%，而只有氧樂果的回收率較低，敵敵畏由于氮吹問題在回收率方面有波動，因此基質(zhì)匹配標準溶液校準中，能在有機磷農(nóng)殘測定時應(yīng)用氣相色譜法，有效消除基質(zhì)干擾。

3 結(jié)論

綜上，本文對農(nóng)藥在果蔬中的基質(zhì)效應(yīng)研究是基于目前檢測標準的基礎(chǔ)上進行的改進和優(yōu)化，利用氣相色譜法按照基質(zhì)給檢測信號帶來的響應(yīng)值不同的特點對抽樣檢測方法進行優(yōu)化和完善，使檢測效率更高，結(jié)果更加精準。