陳柏合,羅滔,劉波,蔡仕寧 （. 遵義醫(yī)科大學珠海校區(qū)機能實驗室，廣東 珠海 5904；. 遵義醫(yī)科大學珠海校區(qū)病理生理學教研室，廣東 珠海 5904）

機能學實驗是將生理學、病理生理學和藥理學三門學科的相關實驗有機融合而成的一門獨立的實驗課程，該課程是用實驗手段研究動物或人體的機能活動規(guī)律及其在病理狀態(tài)或藥物干預下的變化，是醫(yī)學基礎課程體系的重要組成部分。在泌尿系統(tǒng)實驗學習中，探討影響尿液生成的因素和觀察利尿藥物的作用是目前機能實驗教學中應用比較廣泛的一個實驗，其直接的教學目的是使學生熟悉并掌握尿生成的過程（包括腎小球濾過、腎小管和集合管的重吸收與分泌）以及尿生成的影響因素。實驗最重要的環(huán)節(jié)是導尿，即采用恰當?shù)牟骞芗夹g把尿液從家兔膀胱里導出來。目前應用較為廣泛的插管技術有輸尿管插管法、膀胱插管法、尿道插管法、膀胱內(nèi)輸尿管插管法。輸尿管插管法能夠精準導尿，是導尿的理想選擇，但在實際操作過程中，由于家兔雙側輸尿管較細且卷曲，游離輸尿管時易造成輸尿管損傷；同時，輸尿管切口大小不容易控制，多次反復插管會損傷輸尿管，常導致創(chuàng)傷性無尿[1]。尿道插管法是從尿道進入膀胱導尿，但是受性別的影響，雄性和雌性家兔的尿道口構造各有不同，且未生育與已生育的雌性家兔尿道口也有不同[2]，雌性家兔尿道插管難度較大，不易掌握，且容易導致創(chuàng)傷性血尿甚至無尿，無法滿足多批次實驗教學要求[2]。而膀胱內(nèi)輸尿管插管法需要使用特殊的輸尿管插管，通過膀胱切口進入尋找膀胱內(nèi)輸尿管出口，然后進行插管，技術難度甚于輸尿管插管，而且膀胱內(nèi)的輸尿管插管更容易造成堵塞，影響插管成功率[3]。對比上述三種插管技術，膀胱插管法是最適用的，其中蕈樣膀胱插管是最常用的膀胱插管，但是由于普通蕈樣膀胱插管導管直徑相對粗大，不利于導尿，因此改良蕈樣膀胱插管，使其適用于家兔尿生成實驗成為了導尿的關鍵。經(jīng)過思考研究，本團隊用簡單的工具制作改良蕈樣膀胱插管導管用于家兔尿生成實驗，并收集了232名同級臨床、影像專業(yè)學生對改良蕈樣膀胱插管技術導尿效果的反饋，學生反映導尿效果較好?，F(xiàn)將該技術的應用報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗動物：健康新西蘭大白兔10只，雌雄不限，體質量2.0~2.5 kg，SPF級繁殖飼料和滅菌水飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度20~26 ℃，濕度40%~70%。

實驗試劑：生理鹽水、25%氨基甲酸乙酯溶液、50%葡萄糖溶液、0.01%去甲腎上腺素溶液、0.1%呋塞米溶液。

實驗器械：哺乳類動物器械1套（手術刀、手術剪、眼科剪、手術鑷、眼科鑷、止血鉗、皮鉗、玻璃分針、三通管等）、恒溫水浴槽、嬰兒秤、兔臺、注射器（20 mL、10 mL、5 mL、1 mL）、靜脈輸液器、靜脈注射器、手術絲線、改良蕈樣膀胱插管導管、皮膚縫合針、紗布、集尿杯等。

1.2 方法

1.2.1 稱重、麻醉和固定 取家兔1只，置于嬰兒秤稱重后經(jīng)耳緣靜脈注射25%氨基甲酸乙酯溶液3~4 mL/kg，仰臥位固定在兔臺上。家兔角膜反射減弱或消失、四肢肌張力減弱或消失、疼痛反射消失后停止麻醉，拔出注射管并用三通管連接于注射針，三通管另一端連接靜脈輸液器和生理鹽水，調節(jié)注射速度為2滴/秒，持續(xù)給予生理鹽水靜脈滴注。注射部位用膠布固定，后期通過三通管實現(xiàn)靜脈給藥。

1.2.2 改良蕈樣膀胱插管導管制作 將一次性注射器的帽蓋剪除細端形成開放管口，剪除后的細端連接一次性1 mL注射器的針頭接口部分，最后連接剪除頭皮針的靜脈注射細管。改良蕈樣膀胱插管導管包括注射器帽蓋形成的膀胱插管導管以及靜脈注射細管形成的導尿管。

1.2.3 膀胱插管 在家兔恥骨聯(lián)合上緣約1 cm橢圓形區(qū)域備皮，手術刀作約5 cm的縱向切口，沿腹白線剪開腹直肌，暴露膀胱。用溫熱的生理鹽水濕潤紗布墊在暴露的膀胱下，找到左右兩側輸尿管，隨后用手術絲線穿過兩側輸尿管下方，輕輕提起膀胱向腹部方向翻轉，絲線結扎尿道與膀胱連接處，防止尿液從尿道排出。用單線穿過手術縫合針，在膀胱無血供區(qū)域進行荷包縫合，輕提荷包縫合中心區(qū)域剪開小口，注意開口不要超過荷包縫合區(qū)域范圍，插入膀胱插管導管，拉線結扎插管導管和膀胱，用溫熱的生理鹽水濕潤紗布覆蓋膀胱，見圖1。膀胱插管導管末端用膠布固定于集尿杯中，以便觀察及計算每分鐘尿滴數(shù)。

圖1 家兔膀胱插管圖

1.3 觀察指標

觀察并記錄膀胱插管成功后每分鐘尿滴數(shù)，每隔2 min記錄1次尿量，一共記錄3次，取平均值。完成3次尿滴數(shù)記錄后（6 min后）先靜脈注射50%葡萄糖溶液2 mL/kg，然后注射0.1%呋塞米溶液0.5 mL/kg，最后注射0.01%去甲腎上腺素溶液0.2 mL/kg。每種藥物注射后觀察15~20 min，待藥物干預作用基本消失后再進行下一種藥物的注射，記錄每種藥物注射后的每分鐘尿滴數(shù)，間隔5 min記錄1次尿量，一共記錄3次，取平均值。

1.4 統(tǒng)計學分析

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析，以均數(shù)±標準差（）表示，組間比較采用兩樣本t檢驗。P<0.01為差異具有顯著統(tǒng)計學意義。

2 結果

與給藥前尿量相比，50%葡萄糖、0.1%呋塞米給藥后家兔尿量均明顯增加，0.01%去甲腎上腺素給藥后家兔尿量明顯減少，差異均有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.01），見表1。

表1 3種藥物對家兔尿量生成的影響（n=10，滴/分）

3 討論

尿液的生成包括3個基本過程，即腎小球濾過、腎小管和集合管的重吸收以及腎小管和集合管的分泌。尿生成的過程主要受神經(jīng)和體液等因素調節(jié)。參與神經(jīng)調節(jié)的腎交感神經(jīng)興奮可釋放去甲腎上腺素，通過增加腎小管對水和鈉的重吸收，從而使尿量減少。在體液因素中，腎小管溶質濃度、滲透壓、循環(huán)血量以及激素水平可通過不同途徑影響尿生成。高濃度葡萄糖可增加腎小管溶質濃度，使管內(nèi)滲透壓增加，影響水分重吸收，從而使尿量增加；呋塞米是一種高效的利尿劑，主要作用于髓袢升支粗段，通過抑制Na+-K+-2Cl-同向轉運體抑制NaCl的重吸收和尿液的濃縮，從而達到利尿效果。

家兔尿生成實驗的技術難點為導尿，相對于其他常用的插管方式，膀胱插管法具有操作簡單、導尿效果佳的優(yōu)勢。除了制作改良蕈樣膀胱插管導管，本團隊還在常規(guī)膀胱插管法基礎上進行了2點細節(jié)上的改進：①實現(xiàn)膀胱插管的前提條件是膀胱保持充盈狀態(tài)，因此一般術前會持續(xù)給予家兔靜脈滴注生理鹽水，但這會改變正常尿量的計算，因此本團隊參考多項研究[4-9]改變了實驗觀察項目，即對比50%葡萄糖、0.1%呋塞米和0.01%去甲腎上腺素給藥前后的尿量變化，探討這3種藥物對尿生成的影響；②充盈的膀胱因為膀胱肌牽張發(fā)射器容易受到刺激引起逼尿肌收縮、尿道括約肌擴張，從而使尿液瞬間排空，為了避免這種情況的發(fā)生，本團隊在膀胱充分暴露后先結扎尿道，再進行荷包縫合，從而保證了膀胱插管的順利完成。

本團隊實驗室采用改良蕈樣膀胱插管技術進行家兔尿生成實驗2年以上，隨堂收集了232名同級臨床、影像專業(yè)學生對改良蕈樣膀胱插管技術導尿效果的反饋，學生反映該插管方法的導尿效果顯著。改良蕈樣膀胱插管導管部分摩擦力比玻璃、塑料等其他材質的膀胱插管導管大，結扎線不易滑落；同時，靜脈注射器形成的導管直徑小，有利于尿液以尿滴形式從管口滴出，便于計算每分鐘尿滴數(shù)；除此以外，經(jīng)過改良的膀胱插管成本低，制作簡單，可推廣使用。