柯昌虎, 嚴(yán) 慧, 陳琴華, 黃慧敏, 昝繼斌, 何曉東

乳腺癌是危害全球女性健康的最常見癌癥,骨轉(zhuǎn)移是疾病復(fù)發(fā)的最常見部位,約75%的晚期乳腺癌患者會(huì)發(fā)生骨轉(zhuǎn)移。目前,乳腺癌骨轉(zhuǎn)移被認(rèn)為是難以治愈的,患者的5年生存率僅為20%～30%[1]。臨床上,乳腺癌骨轉(zhuǎn)移繼發(fā)的并發(fā)癥包括疼痛、病理性骨折、脊髓壓迫、惡性高鈣血癥等,對(duì)患者的生存預(yù)后及生活質(zhì)量產(chǎn)生負(fù)面影響,對(duì)個(gè)人和社會(huì)造成重大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[2]。乳腺癌骨轉(zhuǎn)移常用的治療方法包括抗腫瘤全身療法、骨靶向藥物等,目的在于減緩骨吸收,降低骨骼相關(guān)事件的風(fēng)險(xiǎn)[3],但骨轉(zhuǎn)移瘤最終會(huì)對(duì)治療產(chǎn)生耐藥性,疾病也隨之發(fā)展。近年來(lái),中醫(yī)藥治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移取得了顯著的效果且在臨床中的應(yīng)用也越來(lái)越廣泛[4-5]。乳腺癌骨轉(zhuǎn)移屬于中醫(yī)學(xué)“骨痹”“骨瘤”范疇?！饵S帝內(nèi)經(jīng)·素問(wèn)》:“腎主骨,生髓”“腎其充在骨”[6]。《醫(yī)經(jīng)精義》:“腎藏精,精生髓,髓生骨,故骨者腎之所合也”[7]。由此可見,乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生與腎密切相關(guān)?！端貑?wèn)·逆調(diào)論》:“腎不生則髓不能滿,故寒甚至骨也”[6]。《外臺(tái)秘要》:“若勞傷腎水,不能榮骨而為腫瘤”[8]。強(qiáng)調(diào)骨轉(zhuǎn)移的病因由“腎衰”所起,為腎氣虧損、陰陽(yáng)失調(diào)所致,故溫補(bǔ)腎陽(yáng)是逆轉(zhuǎn)病機(jī)的關(guān)鍵。蛇床子味辛、苦,性溫,歸腎經(jīng),具有溫腎壯陽(yáng)之功。補(bǔ)骨脂味辛、苦,性溫,歸腎、脾經(jīng),具有溫腎助陽(yáng)之功。蛇床子-補(bǔ)骨脂是溫腎的常用藥對(duì),源自《太平圣惠方》卷九十八“補(bǔ)骨脂丸”,共濟(jì)補(bǔ)腎養(yǎng)陽(yáng)、強(qiáng)力健肌之效。在臨床應(yīng)用中,顧氏外科以扶正先安未受邪之地,臨證習(xí)用中藥蛇床子、補(bǔ)骨脂、附子、淫羊藿、杜仲、狗脊溫腎助陽(yáng)生髓,治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者[9]。劉勝教授認(rèn)為乳腺癌骨轉(zhuǎn)移當(dāng)扶正祛邪,溫腎壯骨,多用蛇床子、補(bǔ)骨脂、肉蓯蓉等溫而不燥、補(bǔ)腎生髓之品,以壯骨通陽(yáng)[10]。現(xiàn)代藥理研究表明,蛇床子-補(bǔ)骨脂能夠減輕乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的程度,從多環(huán)節(jié)抑制骨轉(zhuǎn)移骨質(zhì)損傷,配伍引經(jīng)藥可以增強(qiáng)其下調(diào)裸鼠上肢骨轉(zhuǎn)移灶中趨化因子配體12(chemokine ligand 12,CXCL12)、趨化因子受體4(chemokine receptor 4,CXCR4)的表達(dá)水平,對(duì)上肢骨轉(zhuǎn)移產(chǎn)生治療作用[11]。溫腎壯骨方(蛇床子、補(bǔ)骨脂和制附子)可以通過(guò)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)和白細(xì)胞介素6(interleukin 6,IL-6)介導(dǎo)的Jagged1/Notch信號(hào)通路減輕乳腺癌骨轉(zhuǎn)移[12];可以通過(guò)調(diào)節(jié)TGF-β1/Smads信號(hào)抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells,BMSC)誘導(dǎo)的乳腺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和骨轉(zhuǎn)移[13]。盡管在臨床上蛇床子-補(bǔ)骨脂作為藥對(duì)常用于乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的治療,但其治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的物質(zhì)基礎(chǔ)及分子機(jī)制尚待明確。本研究通過(guò)構(gòu)建蛇床子-補(bǔ)骨脂的有效成分-乳腺癌骨轉(zhuǎn)移靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò),利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討其可能治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1蛇床子-補(bǔ)骨脂活性成分及作用靶點(diǎn)的篩選 以“蛇床子”為檢索詞,檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP;https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php),以口服生物利用度(oral bioavailability,OB)≥30%和類藥性(drug-likeness,DL)≥0.18兩項(xiàng)控制指標(biāo)篩選蛇床子成分[14],并檢索文獻(xiàn)[15-16]補(bǔ)充活性成分。以“補(bǔ)骨脂”為檢索詞,檢索中藥分子機(jī)制的生物信息學(xué)分析工具(Bioinformatics Analysis Tool for Molecular Mechanism of Traditional Chinese Medicine,BATMAN-TCM;http://bionet.ncpsb.org.cn/batman-tcm/),以Score cutoff=20和P<0.05兩個(gè)指標(biāo)作為篩選條件獲取補(bǔ)骨脂候選成分。將兩個(gè)藥物的成分進(jìn)行合并去重,在有機(jī)小分子生物活性數(shù)據(jù)庫(kù)(PubChem,https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)查找成分的SMILES格式,并導(dǎo)入Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.swisstargetprediction.ch/)獲取靶點(diǎn),選取Probability>0的靶點(diǎn)。

1.2乳腺癌骨轉(zhuǎn)移疾病相關(guān)靶點(diǎn)的篩選 以“乳腺癌骨轉(zhuǎn)移”為檢索詞,在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org/)和在線人類孟德爾遺傳(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM)數(shù)據(jù)庫(kù)(https://omim.org/)中篩選乳腺癌骨轉(zhuǎn)移相關(guān)靶點(diǎn),其中GeneCards根據(jù)Relevance score大小順序篩選前500個(gè)靶點(diǎn)。

1.3活性成分-疾病共有靶點(diǎn)的篩選 在Venny 2.1在線平臺(tái)(https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html)分別錄入蛇床子-補(bǔ)骨脂與乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的靶點(diǎn),繪制韋恩圖,獲取藥物和疾病的共有靶點(diǎn)。

1.4藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 使用Cytoscape 3.8.2軟件,構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”可視化網(wǎng)絡(luò),使用Network Analyzer功能以節(jié)點(diǎn)自由度(degree)為指標(biāo)進(jìn)行分析。

1.5蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將共有靶點(diǎn)上傳至STRING數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.string-db.org/),設(shè)置交互作用score>0.4的靶點(diǎn),并將TSV文件導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2軟件繪制蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)。

1.6GO功能分析和KEGG通路富集分析 在DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)(https://david.ncifcrf.gov/)進(jìn)行GO功能分析與KEGG通路富集分析,以P<0.05為閾值,探討蛇床子-補(bǔ)骨脂治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的生物學(xué)過(guò)程和信號(hào)通路。

2 結(jié)果

2.1蛇床子-補(bǔ)骨脂主要活性成分及作用靶點(diǎn)的篩選結(jié)果 通過(guò)TCMSP共獲得蛇床子的活性成分19個(gè),并通過(guò)文獻(xiàn)查閱補(bǔ)充1個(gè)活性成分:蛇床子素(osthol)。在BATMAN-TCM中共收集到補(bǔ)骨脂活性成分29個(gè)。取Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)中Probability>0的靶點(diǎn),去重并剔除無(wú)靶點(diǎn)的成分,最終得到42個(gè)活性成分,對(duì)應(yīng)618個(gè)作用靶點(diǎn)。其中豆甾醇(stigmasterol)為蛇床子和補(bǔ)骨脂的共有成分。

2.2疾病靶點(diǎn)的檢索及活性成分-疾病共有靶點(diǎn)的篩選結(jié)果 使用GeneCards、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)篩選乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的靶點(diǎn)。GeneCards中取前500個(gè)靶點(diǎn),OMIM中獲得169個(gè)靶點(diǎn),合并去重后共獲得654個(gè)靶點(diǎn)。使用Venny在線工具對(duì)蛇床子-補(bǔ)骨脂靶點(diǎn)和乳腺癌骨轉(zhuǎn)移靶點(diǎn)進(jìn)行分析,得到共有靶點(diǎn)99個(gè)。見圖1。

圖1 蛇床子-補(bǔ)骨脂和乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的靶點(diǎn)匹配韋恩圖

2.3藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將共有靶點(diǎn)進(jìn)行反相匹配,去除補(bǔ)骨脂香豆雌烷B(bavacoumestan B)和正三十烷(triacontane)2個(gè)無(wú)對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的成分。將蛇床子-補(bǔ)骨脂其余40個(gè)活性成分與共有靶點(diǎn)信息輸入Cytoscape 3.8.2軟件中,繪制蛇床子-補(bǔ)骨脂“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”相互作用的網(wǎng)絡(luò)圖,見圖2。對(duì)網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行拓?fù)浞治?degree排名前12位的成分見表1,其可能是蛇床子-補(bǔ)骨脂治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵活性成分。

表1 蛇床子-補(bǔ)骨脂的關(guān)鍵活性成分信息表(Top 12)

2.4蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 在STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中錄入蛇床子-補(bǔ)骨脂和乳腺癌骨轉(zhuǎn)移共有靶點(diǎn),物種設(shè)定為“Homo sapiens”,選取置信度>0.4的網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù),游離靶點(diǎn)2個(gè),得到蛇床子-補(bǔ)骨脂治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的靶點(diǎn)蛋白相互作用信息數(shù)據(jù),導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2中進(jìn)行可視化分析,結(jié)果見圖3。degree排名前10位的靶點(diǎn)見表2,其可能在乳腺癌骨轉(zhuǎn)移治療中具有重要的調(diào)控作用。

表2 蛇床子-補(bǔ)骨脂的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)(Top 10)

網(wǎng)絡(luò)中共有97個(gè)節(jié)點(diǎn),1 645條邊,degree平均值為33.9175,大于平均自由度值靶點(diǎn)的有44個(gè)

2.5GO功能分析結(jié)果 利用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行GO功能分析,結(jié)果獲得607條生物學(xué)過(guò)程,其中生物過(guò)程(biological process,BP)456條,主要涉及蛋白質(zhì)自磷酸化、激酶活性的正調(diào)節(jié)、凋亡過(guò)程的負(fù)調(diào)控、肽基酪氨酸磷酸化、蛋白質(zhì)磷酸化等;細(xì)胞組分(cell component,CC)64條,主要涉及受體復(fù)合物、核質(zhì)、細(xì)胞核、高分子復(fù)合物、質(zhì)膜等;分子功能(molecular function,MF)87條,主要涉及跨膜受體蛋白酪氨酸激酶活性、腺嘌呤核苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)結(jié)合、蛋白酪氨酸激酶活性、蛋白激酶活性、相同蛋白結(jié)合等。分別選取BP、CC、MF的前10個(gè)條目進(jìn)行氣泡圖展示,見圖4。提示蛇床子-補(bǔ)骨脂通過(guò)調(diào)控多種生物學(xué)過(guò)程對(duì)乳腺癌骨轉(zhuǎn)移產(chǎn)生作用。

其中橫軸為富集因子,縱軸為GO功能名稱

2.6KEGG通路富集分析結(jié)果 對(duì)篩選的基因進(jìn)行KEGG通路富集分析,共獲得147條信號(hào)通路,主要涉及癌癥途徑(54個(gè)靶點(diǎn))、內(nèi)分泌抵抗(25個(gè)靶點(diǎn))、磷脂酰肌醇3激酶-絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-kinase-serine/threonine protein kinase,PI3K-Akt)信號(hào)通路(35個(gè)靶點(diǎn))、癌癥中的蛋白聚糖(28個(gè)靶點(diǎn))、EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥(20個(gè)靶點(diǎn))、癌癥中的微小RNA(30個(gè)靶點(diǎn))、癌癥中的中心碳代謝(18個(gè)靶點(diǎn))、催乳素信號(hào)通路(17個(gè)靶點(diǎn))、細(xì)胞衰老(21個(gè)靶點(diǎn))、細(xì)胞凋亡(20個(gè)靶點(diǎn))、糖尿病并發(fā)癥中的晚期糖基化終產(chǎn)物-晚期糖基化終產(chǎn)物受體(advanced glycation end products-receptor for advanced glycation end products,AGE-RAGE)信號(hào)通路(18個(gè)靶點(diǎn))、Ras信號(hào)通路(24個(gè)靶點(diǎn))、絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信號(hào)通路(26個(gè)靶點(diǎn))、乳腺癌(20個(gè)靶點(diǎn))等。選擇前20條進(jìn)行氣泡圖展示,見圖5。提示蛇床子-補(bǔ)骨脂的作用靶點(diǎn)分布于不同的通路中,可通過(guò)多種通路達(dá)到治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的作用。

其中橫軸為富集因子,縱軸為通路名

3 討論

3.1《黃帝內(nèi)經(jīng)》:“正氣存內(nèi),邪不可干”[17]?！鹅`樞·海論》:“髓海有余,則輕勁多力,自過(guò)其度”[18]。腎充養(yǎng)骨骼,腎實(shí)則骨有生氣,骨髓生化有源?！鹅`樞·經(jīng)脈篇》:“足少陰氣絕,則骨枯。少陰者,冬脈也。伏行而濡骨髓者也,故骨不濡”。腎虛而骨失養(yǎng),百病叢生[18]。“邪之所湊,其氣必虛”,損傷正氣,耗竭腎精,無(wú)以充髓養(yǎng)骨,以致毒邪乘虛而入,凝結(jié)于骨而成骨轉(zhuǎn)移[19]。乳腺癌骨轉(zhuǎn)移病位在骨,其發(fā)生為骨之“正氣不足”,病機(jī)多為本虛標(biāo)實(shí),選方用藥常不離益腎。蛇床子和補(bǔ)骨脂均屬于溫腎中藥,共奏補(bǔ)腎壯骨,是臨床上廣泛應(yīng)用于乳腺癌及乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的治療藥物。相關(guān)研究表明,蛇床子活性成分蛇床子素可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡,以及乳腺癌骨轉(zhuǎn)移過(guò)程中成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞和癌細(xì)胞的相互作用,顯著減少小鼠的骨轉(zhuǎn)移,并降低了乳腺癌轉(zhuǎn)移的總腫瘤負(fù)擔(dān)[20]。補(bǔ)骨脂可以通過(guò)線粒體途徑誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡[21]。同時(shí),蛇床子-補(bǔ)骨脂藥對(duì)配伍常作為復(fù)方的組方要件,組方不同則產(chǎn)生不同的臨床療效。例如,乳腺術(shù)后骨轉(zhuǎn)方具有溫腎健脾、通絡(luò)止痛的功效,主要用于乳腺癌骨痛的治療;溫腎壯骨方具有壯骨通陽(yáng)的功效,主要用于乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的治療。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)蛇床子-補(bǔ)骨脂治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的機(jī)制進(jìn)行了分析探討。

3.2通過(guò)TCMSP、BATMAN-TCM進(jìn)行成分查找,筆者從蛇床子-補(bǔ)骨脂中篩選出香葉木素、異補(bǔ)骨脂二氫黃酮、補(bǔ)骨脂甲素、O-乙酰異蛇床素、補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚、美花椒內(nèi)酯、歐芹素、蛇床子素等活性成分。其中香葉木素為天然黃酮類化合物,可以通過(guò)活性氧(reactive oxygen species,ROS)及p53介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑抑制MCF-7細(xì)胞的增殖及促進(jìn)其凋亡[22];亦可通過(guò)細(xì)胞周期阻滯和線粒體介導(dǎo)的內(nèi)在凋亡途徑對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞產(chǎn)生抗增殖和促凋亡作用[23]。乳腺癌細(xì)胞分泌可溶性因子,加速破骨細(xì)胞分化,導(dǎo)致溶骨性骨轉(zhuǎn)移的形成,香葉木素可以抑制破骨細(xì)胞分化和骨吸收功能,從而起到阻止脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的骨溶解模型小鼠骨量丟失的作用[24]。補(bǔ)骨脂甲素屬于二氫黃酮類化合物,具有抑制乳腺癌細(xì)胞增殖的作用[25]。蛇床子素是天然香豆素類化合物,可以抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和侵襲,并誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡,在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均顯示其可通過(guò)下調(diào)整合素α3/整合素β5(integrin α3/integrin β5,ITGα3/ITGβ5)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移[15];也可通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯、線粒體功能障礙和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制人乳腺癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展[26];還可以通過(guò)上調(diào)抑癌基因G蛋白質(zhì)γ7(G protein gamma 7,GNG7)抑制乳腺癌進(jìn)展[27]。

3.3經(jīng)蛇床子-補(bǔ)骨脂和乳腺癌骨轉(zhuǎn)移靶點(diǎn)交集篩選出EGFR、Akt1、SRC、STAT3、Jun、CCND1、CASP3、ESR1、ERBB2、TNF等共有靶點(diǎn)。其中,EGFR常在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中過(guò)度表達(dá),蘇氨酸654(threonine 654,T654)處EGFR磷酸化的增加與上皮間質(zhì)、遷移和侵襲以及轉(zhuǎn)移的增加相關(guān)[28]。EMT是促進(jìn)癌細(xì)胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移的重要生理過(guò)程,Akt1可以通過(guò)降解磷酸化依賴性Twist1來(lái)抑制乳腺癌EMT[29]。在癌癥的進(jìn)程中,SRC可以與核受體及其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用,促進(jìn)多個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄,從而增強(qiáng)癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、腫瘤血管生成和EMT[30]。CCND1位于11號(hào)染色體長(zhǎng)臂11q13.3處,編碼細(xì)胞周期蛋白D1蛋白,乳腺癌中CCND1拷貝數(shù)的增加與高組織病理學(xué)分級(jí)、高增殖和Luminal B亞型相關(guān)[31]。ESR1的激活突變可引起轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞的內(nèi)分泌抵抗,ESR1突變與雌激素受體表達(dá)和高增殖活性有關(guān),并影響約14%的乳腺癌雌激素受體陽(yáng)性骨轉(zhuǎn)移[32]。TNF-α在癌癥的發(fā)展過(guò)程中具有兩面性,高劑量誘導(dǎo)顯著的抗癌作用,而生理和病理水平的TNF-α可能與癌癥促進(jìn)、腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移有關(guān),且TNF-α通過(guò)激活c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-Jun N-terminal protein kinase,JNK)/c-Jun信號(hào)通路誘導(dǎo)MCF-7乳腺癌細(xì)胞中干擾素誘導(dǎo)蛋白10(interferon-induced protein 10,IP-10)的表達(dá)[33]。

3.4經(jīng)GO功能分析獲取蛋白質(zhì)自磷酸化、激酶活性的正調(diào)節(jié)、凋亡過(guò)程的負(fù)調(diào)控、肽基酪氨酸磷酸化、受體復(fù)合物、核質(zhì)、細(xì)胞核、高分子復(fù)合物、跨膜受體蛋白酪氨酸激酶活性、ATP結(jié)合、蛋白酪氨酸激酶活性、蛋白激酶活性等生物學(xué)過(guò)程。經(jīng)KEGG通路富集分析獲取癌癥途徑、內(nèi)分泌抵抗、PI3K-Akt、癌癥中的蛋白聚糖、癌癥中的微小RNA、癌癥中的中心碳代謝、催乳素、Ras、MAPK等信號(hào)通路。其中PI3K-Akt-mTOR是一種參與細(xì)胞增殖、侵襲、遷移、凋亡、葡萄糖代謝和DNA修復(fù)的信號(hào)通路,與癌癥和骨溶解的發(fā)展密切相關(guān),抑制PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路可以抑制乳腺癌生長(zhǎng)和乳腺癌誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成[34]。在大鼠乳腺癌骨轉(zhuǎn)移模型中,PI3K-Akt信號(hào)通路還參與了骨癌痛的中樞敏化,提示其在骨癌痛發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用[35]。催乳素-催乳素受體可以顯著影響乳腺癌骨轉(zhuǎn)移,且催乳素受體還可以調(diào)節(jié)乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的腫瘤微環(huán)境,從而誘導(dǎo)溶解性破骨細(xì)胞的形成[36]。Ras通路參與細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)、細(xì)胞存活和凋亡、代謝和運(yùn)動(dòng)的信號(hào)分子活化,在MDA-MB-231細(xì)胞中敲減剪接因子3b亞基1(splicing factor 3b subunit 1,SF3B1),通過(guò)Ras、MAPK等信號(hào)通路抑制細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力,促進(jìn)細(xì)胞凋亡[37]。另外,RNA SLIT2增強(qiáng)子通過(guò)調(diào)節(jié)P38 MAPK/c-Fos信號(hào)通路抑制乳腺癌骨轉(zhuǎn)移[38]。

綜上所述,本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)蛇床子-補(bǔ)骨脂治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的物質(zhì)基礎(chǔ)和分子機(jī)制進(jìn)行探索,從分子水平對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行系統(tǒng)分析,蛇床子-補(bǔ)骨脂中的香葉木素、蛇床子素等有效成分可以作用于EGFR、Akt1、SRC、STAT3、Jun等靶點(diǎn),通過(guò)多途徑治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移,從而為蛇床子-補(bǔ)骨脂的臨床應(yīng)用和機(jī)制研究提供了依據(jù)。