米旭蕾 王可 李志偉

摘 要：針對(duì)土壤中抗生素污染日益嚴(yán)重的問(wèn)題，為了促進(jìn)土壤中抗生素監(jiān)測(cè)技術(shù)體系及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的完善，建立了一種QuEChERS結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）的分析方法。土壤樣品用10 mL 3%（體積分?jǐn)?shù)，下同）氨化乙腈提取，0.2 g PSA和0.2 g無(wú)水MgSO4凈化，流動(dòng)相為甲醇-水（1∶1，體積比，下同），ZORBAX SB-Aq（2.1 mm×150 mm，3.5 μm）色譜柱，質(zhì)譜條件為電噴霧離子源（ESI）、正/負(fù)離子掃描、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。結(jié)果表明，4種分析物在0.1～200 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）＞0.999，檢出限（LOD）為0.01～0.06 μg/kg，定量限（LOQ）為0.05～0.19 μg/kg，在3個(gè)加標(biāo)水平（0.4，8.0，40.0 μg/kg）下，平均回收率為87.23%～108.57%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=5）為0.36%～6.55%。該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、高效、靈敏，適用于土壤中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺的同步檢測(cè)，可為相關(guān)部門(mén)制定相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范提供數(shù)據(jù)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：化學(xué)分析；QuEChERS；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；土壤；氯霉素類(lèi)抗生素及其代謝物

Determination of chloramphenicol antibiotics and their metabolite in soil by UPLC-MS/MS

MI Xulei¹， WANG Ke²， LI Zhiwei¹

（1.School of Chemistry and Pharmaceutical Engineering， Hebei University of Science and Technology， Shijiazhuang， Hebei 050018， China; 2.Shijiazhuang Technology Innovation Center for Chemical Poison Detection and Risk Early Warning， Shijiazhuang Center for Disease Control and Prevention， Shijiazhuang， Hebei 050011， China）

Abstract：Aiming at the problem that antibiotic pollution in soil is becoming more and more serions， in order to

promote the improvement of antibiotic monitoring technical system and related standards， a method of QuEChERS combined with ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS） was established. The soil samples were extracted with 10 mL 3% ammoniated acetonitrile （V/V）， purified with 0.2 g PSA and 0.2 g anhydrous MgSO4， the mobile phase was methanol-water （1∶1， V/V）， the UPLC column used in the experiment was ZORBAX SB-Aq （2.1 mm×150 mm，3.5 μm）， the ion source was electrospray ion source（ESI） with positive/negative ion scanning， and the detection method was multiple reaction monitoring（MRM）.The results indicates that the linear relationships of the four analytes are good in the range of 0.1～200 ng/mL， with a correlation coefficients（r） higher than 0.999， the limits of detection （LOD） and the limits of quantitation（LOQ） are 0.01～0.06 μg/kg and 0.05～0.19 μg/kg， respectively; the average recoveries are 87.23%～108.57% at three spiked levels（0.4， 8.0，40.0 μg/kg）， the relative standard deviations （RSDs， n=5） are 0.36%～6.55%.The method is accurate， simple， efficient and sensitive， which is suitable for the simultaneous determination of chloramphenicol， sulfoxamycin， flufenicol and its metabolite florfenicol amine in soil， and provides data basis for setting relevant standards and regulations.

Keywords：chemical analysis; QuEChERS; ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; soil; chloramphenicol antibiotics and their metabolite

氯霉素類(lèi)抗生素又稱(chēng)酰胺醇類(lèi)抗生素，因具有廉價(jià)、高效、廣譜等特點(diǎn)，在畜禽養(yǎng)殖中被廣泛使用^［1］，主要包括氯霉素（CAP）、甲砜霉素（TAP）和氟苯尼考（FF）^［2］。CAP殘留會(huì)抑制人體骨髓的造血功能，引起顆粒性白細(xì)胞缺乏癥等疾病^［3］。TAP和FF是CAP的新型同類(lèi)藥物，具有良好的抗菌效果和安全性能。但人類(lèi)若長(zhǎng)期攝入TAP，會(huì)對(duì)人體的造血功能產(chǎn)生不可逆的抑制作用。TAP結(jié)構(gòu)中的羥基被氟原子取代得到FF，其具有良好的抗菌譜和活性^［4］。FF代謝產(chǎn)物復(fù)雜，其中，氟苯尼考胺（FFA）是FF的主要代謝物，也是FF在動(dòng)物體內(nèi)的殘留標(biāo)志物^［5］。土壤環(huán)境是人類(lèi)賴(lài)以生存的環(huán)境之一，人類(lèi)常常通過(guò)施用含有抗生素的糞便和廢水導(dǎo)致大量抗生素進(jìn)入土壤，造成土壤污染，對(duì)微生物、動(dòng)植物及人類(lèi)健康產(chǎn)生不同程度的毒性作用。氯霉素類(lèi)抗生素的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，在自然界中可長(zhǎng)期存在^［6］，而中國(guó)尚未規(guī)定氯霉素類(lèi)抗生素及其代謝物在環(huán)境中的最大殘留限量。因此，建立一種檢測(cè)土壤中氯霉素類(lèi)抗生素及其代謝物的分析方法十分必要。

近年來(lái)，針對(duì)氯霉素類(lèi)抗生素及其代謝物的檢測(cè)方法主要包括氣相色譜法（GC）^［7］、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS）^［8］、免疫層析法（ICA）^［9］、液相色譜法（LC）^［10］和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）^［11-12］等。其中，GC法和GC-MS法適用于分析易揮發(fā)、熱穩(wěn)定的小分子有機(jī)化合物，應(yīng)用范圍較窄^［13］；ICA法準(zhǔn)確度較差，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性的結(jié)果^［14］；LC法靈敏度較低，無(wú)法滿(mǎn)足痕量測(cè)定的要求^［13］；而LC-MS/MS法具有分離能力強(qiáng)、靈敏度高、定性定量準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適用于復(fù)雜基質(zhì)中多種抗生素的痕量分析^［15］。國(guó)內(nèi)外關(guān)于該類(lèi)藥物的檢測(cè)主要集中在牛奶^［16］、蜂蜜^［17］、魚(yú)肉^［18］、畜禽產(chǎn)品^［19］等動(dòng)物源性食品，而土壤基質(zhì)更為復(fù)雜，關(guān)于氯霉素類(lèi)抗生素及其代謝物在土壤基質(zhì)中殘留檢測(cè)的報(bào)道相對(duì)較少。胡鈺等^［20］采用固相萃取前處理技術(shù)檢測(cè)農(nóng)田土壤中氯霉素和氟苯尼考，回收率僅為46.9%～146.0%。曾芳等^［6］利用LC測(cè)定土壤中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考，首先，用乙酸乙酯提取目標(biāo)物；然后，用正己烷進(jìn)行脫脂；最后，用固相萃取柱進(jìn)行富集、凈化，該檢測(cè)方法操作步驟繁瑣，分析時(shí)間長(zhǎng)。劉虹等^［21］采用固相萃取技術(shù)檢測(cè)土壤中氯霉素，該方法的檢出限較高，為23 μg/kg。目前，關(guān)于同時(shí)檢測(cè)土壤基質(zhì)中3種氯霉素類(lèi)抗生素及其代謝物的方法未見(jiàn)報(bào)道。因此，建立操作簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、可靠的氯霉素類(lèi)抗生素及其代謝物的分析新方法，具有十分重要的意義。

QuEChERS技術(shù)在2003年由德國(guó)斯圖加特CVUA實(shí)驗(yàn)室的ANASTASSIADES等首次提出，隨后由美國(guó)農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)研究院化學(xué)家PERESTRELO等確證^［22］。該技術(shù)具有高通量、操作簡(jiǎn)便、成本低廉、溶劑消耗少等優(yōu)點(diǎn)^［23］，在檢測(cè)水果和蔬菜中農(nóng)藥殘留方面應(yīng)用較為廣泛，但在獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用相對(duì)較少。李常雄等^［24］建立了QuEChERS技術(shù)方法，同時(shí)測(cè)定水果和蔬菜中4種雙酰肼類(lèi)農(nóng)藥殘留；韓梅等^［25］建立了一種基于QuEChERS前處理技術(shù)快速檢測(cè)蔬菜中48種農(nóng)藥殘留的分析方法；DINH等^［26］開(kāi)發(fā)了QuEChERS法測(cè)定魚(yú)和蝦中27種獸藥殘留的檢測(cè)新方法。用QuEChERS技術(shù)開(kāi)展土壤中獸藥的監(jiān)測(cè)需要對(duì)提取劑、凈化劑種類(lèi)和凈化劑用量等進(jìn)行優(yōu)化，以得到更好的提取和凈化效果。本研究通過(guò)對(duì)質(zhì)譜參數(shù)、色譜條件、提取劑種類(lèi)、凈化方式等進(jìn)行優(yōu)化，以改進(jìn)的QuEChERS作為前處理技術(shù)，結(jié)合超高效液相色譜三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS），建立同時(shí)測(cè)定土壤中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺的新方法，以期為開(kāi)展土壤樣品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺殘留監(jiān)測(cè)及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

AB SCIE XExion-TRIPLE QUAD 5500型超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國(guó) AB SCIEX公司提供；VXMNAL型渦旋振蕩器，美國(guó) OHAUS 公司提供；CR21N型高速冷凍離心機(jī)，日本日立公司提供；AE240型電子天平，瑞士 Mettler Toledo 公司提供；EVAP-12型氮吹儀，美國(guó) Organomation 公司提供。

CAP，純度為98.5%，Dr. Ehrenstorfer GmbH 公司提供；TAP，F(xiàn)F，純度為99.9%，Dr. Ehrenstorfer GmbH 公司提供；FFA，純度為99.2%，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司提供；甲酸，乙酸銨（色譜純），美國(guó) Dikma 公司提供；乙腈（色譜純），德國(guó) Merck 公司提供；甲醇，色譜純，美國(guó) Fisher 公司提供；N-丙基乙二胺（PSA），美國(guó) Dikma 公司提供；C18，40～50 μm，美國(guó) Welch 公司提供；無(wú)水MgSO4，分析純，天津永大化學(xué)試劑有限公司提供；Milli-Q超純水機(jī)，美國(guó) Millipore 公司提供。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量的分析物標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解定容至10 mL，配制成1 mg/mL的各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于－20 ℃冰箱中儲(chǔ)存。分別準(zhǔn)確移取100 μL各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋至1 mL，配制成100 μg/mL的各標(biāo)準(zhǔn)中間液。分別準(zhǔn)確移取100 μL各標(biāo)準(zhǔn)中間液，用甲醇稀釋至10 mL，配制成1 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。采用土壤空白基質(zhì)液逐級(jí)稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，50.0，100.0，200.0 ng/mL，體積均為500 μL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 樣品采集與前處理

1.3.1 土壤樣品采集

土壤樣品按照《土壤環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范》（HJ/T 166—2004）的要求進(jìn)行采集、運(yùn)輸和保存。采集0～20 cm的表層土壤，除去碎石、雜草和植物根莖等雜物，裝于封口袋中。在運(yùn)輸過(guò)程中密封、避光。將樣品運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室后，自然風(fēng)干，粉碎，過(guò)0.425 mm（40目）篩，裝于封口袋中，于4 ℃避光保存。

1.3.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取5.0 g（±0.01 g）土壤樣品于50 mL離心管中，加10 mL 3%氨化乙腈，渦旋混勻20 s、振蕩2 min，以10 000 r/min離心5 min。準(zhǔn)確移取7 mL上清液，置于含有0.2 g無(wú)水MgSO4和0.2 g PSA的15 mL離心管中，渦旋20 s，以10 000 r/min離心5 min。準(zhǔn)確移取5 mL上清液，在40 ℃下氮吹干，用1 mL甲醇-水（1∶1）復(fù)溶，過(guò)0.20 μm濾膜，待測(cè)。

1.4 儀器條件

1.4.1 色譜條件

Aligent ZORBAX SB-Aq（2.1 mm × 150 mm，3.5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（50∶50）；進(jìn)樣量：3 μL；柱溫：40 ℃；流速：0.3 mL/min。

1.4.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧電離源（ESI）；掃描模式：正/負(fù)離子掃描模式；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；離子源電壓：5 500 V；離子源溫度：550 ℃；氣簾氣壓力：40 psi（1 psi相當(dāng)于6 894.757 Pa，下同）；霧化氣壓力：50 psi；輔助氣壓力：50 psi。4種分析物的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化

分別配制50 ng/mL的4種分析物標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用針泵進(jìn)樣。由于CAP，TAP和FF含有電負(fù)性較高的鹵原子和羥基，因此，在負(fù)離子模式下具有更高的靈敏度；而FFA含有氨基，因此，在正離子模式下具有更高的靈敏度^［27］，所以實(shí)驗(yàn)在正/負(fù)離子模式下進(jìn)行質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化。首先，在一級(jí)質(zhì)譜（Q1 MS）掃描模式下，獲得每種分析物的母離子；然后，在二級(jí)質(zhì)譜（Product ion，MS2）掃描模式下，獲得其碎片離子；最后，將母離子和碎片離子組成檢測(cè)離子對(duì)，在MRM模式下分別對(duì)碰撞能（CE）和去簇電壓（DP）進(jìn)行優(yōu)化，使各碎片離子獲得最佳響應(yīng)。

2.2 色譜條件優(yōu)化

2.2.1 色譜柱選擇

有研究表明，C18柱適用于氯霉素類(lèi)抗生素殘留的分析^［28］。因此，實(shí)驗(yàn)比較了Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm × 50 mm，1.8 μm）、Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（2.1 mm × 100 mm，1.8 μm）、Agilent ZORBAX SB-Aq（2.1 mm × 150 mm，3.5 μm）3種色譜柱對(duì)4種目標(biāo)物的分離效果。結(jié)果顯示，與另外2個(gè)色譜柱相比，在ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱上，4種分析物響應(yīng)偏低（見(jiàn)圖1）；在ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱上，氟苯尼考胺出現(xiàn)分裂峰（見(jiàn)圖2）；在ZORBAX SB-Aq色譜柱上，4種分析物具有較好的響應(yīng)和峰形。因此，選擇ZORBAX SB-Aq色譜柱進(jìn)行分析。

2.2.2 流動(dòng)相優(yōu)化

流動(dòng)相對(duì)目標(biāo)物的響應(yīng)、峰形和保留時(shí)間存在一定影響。首先，比較了當(dāng)以純水為水相，甲醇、乙腈為有機(jī)相時(shí)對(duì)4種目標(biāo)物分離效果的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)有機(jī)相為乙腈時(shí)，F(xiàn)FA峰形較寬，且FF和CAP未能分開(kāi)；當(dāng)有機(jī)相為甲醇時(shí)，4種目標(biāo)物具有較好的峰形、響應(yīng)值和分離度，故選擇甲醇作為有機(jī)相。以甲醇為有機(jī)相，比較了以純水、0.1%甲酸水溶液、含2 mmol/L乙酸銨的水溶液為水相時(shí)對(duì)色譜效果的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在水中加入甲酸或乙酸銨后，4種目標(biāo)物的響應(yīng)值均降低，故選擇純水作為水相。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步對(duì)甲醇和水的體積比進(jìn)行優(yōu)化，比較了當(dāng)甲醇和水的體積比分別為40∶60，50∶50和60∶40時(shí)對(duì)4種目標(biāo)物分離效果的影響。發(fā)現(xiàn)當(dāng)體積比為40∶60時(shí)，分析時(shí)間較長(zhǎng)；當(dāng)體積比為60∶40時(shí)，TAP和FF未分開(kāi)；當(dāng)體積比為50∶50時(shí)，4種目標(biāo)物的峰形和分離度均較好。綜上，實(shí)驗(yàn)最終采用體積比為50∶50的甲醇和水等度洗脫。在最佳色譜柱、甲醇水體積比1∶1流動(dòng)相條件下，得到如圖3所示的4種分析物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖。

2.3 前處理?xiàng)l件優(yōu)化

2.3.1 提取劑的優(yōu)化

根據(jù)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，實(shí)驗(yàn)考察了以乙腈、乙酸乙酯和二氯甲烷分別作為提取劑時(shí)，對(duì)4種分析物回收率的影響，結(jié)果如圖4所示。乙酸乙酯對(duì)土壤中TAP和FFA的提取效果較差，回收率僅為14.66%和1.11%，其余2種分析物的回收率均達(dá)到60%以上；當(dāng)用二氯甲烷提取時(shí)，僅FF的回收率在60%以上；當(dāng)用乙腈提取時(shí)，F(xiàn)FA的回收率偏低，僅為2.57%，其余3種分析物的回收率較高，在60.62%～91.30%之間，所以選擇乙腈作為提取當(dāng)劑。由于FFA是弱堿性化合物，在較高的pH值下具有更好的溶解性^［29］，因此，實(shí)驗(yàn)分別考察了1%，2%，3%，4% 4種不同體積比的氨化乙腈對(duì)4種分析物回收率的影響。結(jié)果顯示，隨著氨水濃度的增加，F(xiàn)FA的回收率呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，當(dāng)使用3%氨化乙腈時(shí)，CAP，TAP，F(xiàn)F和FFA的回收率最好，分別為104.88%，92.69%，101.94%和103.60%，最終選擇3%氨化乙腈作為提取劑。

2.3.2 凈化方式的優(yōu)化

PSA，C18等是QuEChERS前處理中常用的吸附劑。由于土壤中主要含有色素、脂肪等雜質(zhì)，PSA可通過(guò)陰離子交換的方式，對(duì)土壤中多種極性有機(jī)酸、脂肪酸、糖類(lèi)物質(zhì)、親脂性色素等雜質(zhì)有較好的吸附能力^［30-31］。分別比較PSA，C18，PSA加入無(wú)水MgSO4凈化劑對(duì)4種分析物回收率的影響，結(jié)果如圖5所示。當(dāng)以C18作為凈化劑時(shí)，F(xiàn)F的回收率僅為45.33%，可能由于C18對(duì)FF有吸附作用；當(dāng)使用PSA凈化時(shí)，4種分析物的回收率均在70%以上；PSA加入無(wú)水MgSO4后4種分析物的回收率為99.71%～106.90%，回收率較好，這是由于無(wú)水MgSO4可去除有機(jī)溶劑中殘留的水分，而且在吸水放熱的過(guò)程中促進(jìn)了目標(biāo)物的溶出^［32］。而且使用PSA加入無(wú)水MgSO4凈化后，回收率優(yōu)于PSA凈化時(shí)的回收率（81.50%～92.34%），故最終選擇將PSA加入無(wú)水MgSO4作為凈化劑。

實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步對(duì)無(wú)水MgSO4和PSA的用量進(jìn)行考察。首先，固定無(wú)水MgSO4的用量為0.20 g，考察PSA用量（0.05，0.10，0.20，0.30 g）對(duì)4種分析物回收率的影響。結(jié)果如圖6所示。首先，在不同PSA用量下，4種分析物的回收率隨著PSA用量的增加呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，當(dāng)PSA用量達(dá)到0.20 g時(shí)，4種分析物的回收率較好，在93.20%～102.37%之間，所以選擇0.20 g PSA凈化；然后，當(dāng)PSA用量為0.20 g時(shí)，考察無(wú)水MgSO4的用量（0.10，0.20，0.30 g）對(duì)4種分析物回收率的影響，結(jié)果如圖7所示。隨著無(wú)水MgSO4用量的增加，TAP和FFA的回收率先升高后降低，CAP的回收率逐漸降低，當(dāng)無(wú)水MgSO4用量為0.20 g時(shí)，4種分析物均有較好的回收率。綜上所述，選用0.20 g PSA加入0.20 g無(wú)水MgSO4進(jìn)行凈化，4種分析物的回收率總體最好，為86.68%～101.03%。

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

使用電噴霧離子源的主要限制因素是基質(zhì)中共提取物質(zhì)對(duì)分析物的信號(hào)抑制或增強(qiáng)^［33］?；|(zhì)效應(yīng)（ME，matrix effect）是指分析物的離子化受共提取物的影響，從而導(dǎo)致分析物的響應(yīng)值出現(xiàn)增強(qiáng)或減弱的現(xiàn)象^［34］。實(shí)驗(yàn)分別用土壤空白基質(zhì)溶液和純?nèi)軇┲苽錁?biāo)準(zhǔn)曲線，按照式（1）計(jì)算ME值。當(dāng)ME值在80%～120%之間時(shí)，認(rèn)為基質(zhì)效應(yīng)較小，可忽略；ME值小于80%，認(rèn)為有較強(qiáng)的基質(zhì)抑制作用^［35］。計(jì)算得到4種分析物的基質(zhì)效應(yīng)分別為42.63%，49.91%，50.37%和53.56%，說(shuō)明具有較強(qiáng)的基質(zhì)抑制效應(yīng)。因此，采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線，以精準(zhǔn)定量，減小誤差。

ME=（基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率/溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率）×100%。（1）

2.5 方法學(xué)驗(yàn)證

2.5.1 線性關(guān)系、檢出限與定量限

對(duì)“1.2”部分配制的不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行檢測(cè)，以各分析物質(zhì)量濃度（X，ng/mL）和峰面積（Y）為線性方程的橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)，得到相應(yīng)的線性方程和相關(guān)系數(shù)（r）。用3倍信噪比和10倍信噪比計(jì)算各分析物的檢出限（LOD）和定量限（LOQ）。如表2所示，4種分析物的相關(guān)系數(shù)（r）均在0.999以上，表明方法線性關(guān)系良好。LOD為0.01～0.06 μg/kg，LOQ為0.05～0.19 μg/kg，方法靈敏度較高。

2.5.2 加標(biāo)回收率與精密度

取空白土壤樣品，加標(biāo)回收試驗(yàn)分別在0.4，8.0，40.0 μg/kg下進(jìn)行，每個(gè)量平行測(cè)定5次。如表3所示，4種分析物的平均加標(biāo)回收率在87.23%～108.57%之間，RSD值在0.36%～6.55%之間，表明建立的方法準(zhǔn)確度和精密度良好，能夠滿(mǎn)足對(duì)土壤中4種分析物進(jìn)行定量分析的要求。

2.6 實(shí)際樣品測(cè)定

采集12份養(yǎng)殖場(chǎng)土壤、11份菜地土壤共23份樣品，在最佳優(yōu)化條件下對(duì)上述樣品進(jìn)行檢測(cè)。其中，在1份養(yǎng)殖場(chǎng)和2份菜地的土壤中均檢測(cè)到FFA，質(zhì)量濃度分別為6.34，4.12和14.92 μg/kg，另外，20份樣品中4種分析物均低于各自的檢出限。

3 結(jié) 語(yǔ)

本研究建立了一種QuEChES結(jié)合UPLC-MS/MS同步測(cè)定土壤中CAP，TAP，F(xiàn)F及其代謝物FFA的新方法。通過(guò)對(duì)質(zhì)譜參數(shù)、色譜條件和前處理?xiàng)l件的優(yōu)化，確立了最佳檢測(cè)條件：樣品經(jīng)3%氨化乙腈提取，0.2 g PSA加入0.2 g無(wú)水MgSO4凈化，以甲醇-水（1∶1）為流動(dòng)相，經(jīng)ZORBAX SB-Aq色譜柱分離，采用電噴霧離子源正/負(fù)離子掃描，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行檢測(cè)。方法學(xué)驗(yàn)證表明，本方法具有準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、高效、靈敏等優(yōu)點(diǎn)，適用于大批量土壤樣品中3種氯霉素類(lèi)抗生素及其代謝物的定性定量分析。所建立的方法對(duì)開(kāi)展土壤中氯霉素類(lèi)抗生素及其代謝物的監(jiān)測(cè)、評(píng)價(jià)提供了技術(shù)支持，同時(shí)為相關(guān)部門(mén)制定相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范提供了數(shù)據(jù)依據(jù)。本研究?jī)H建立了土壤中氯霉素類(lèi)抗生素及其代謝物的檢測(cè)方法，今后需完善該方法在水等其他基質(zhì)中的應(yīng)用效果。

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