肖義然，黃遠(yuǎn)英，張旭光，殷光玲

湯臣倍健股份有限公司營養(yǎng)健康研究院（廣州 510663）

活性氧（reactive oxygen species，ROS）是指生物體在有氧代謝過程生成的副產(chǎn)物，通過調(diào)節(jié)免疫功能和細(xì)胞信號維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)[1]。在正常生理?xiàng)l件下，ROS的生成和清除之間的平衡受到高度控制。在異常狀態(tài)下機(jī)體自由基水平升高或清除能力下降的過程稱為氧化應(yīng)激（oxidative stress，OS）[2]。氧化應(yīng)激通過鏈?zhǔn)椒磻?yīng)破壞DNA[3]、致使蛋白質(zhì)變性[4]，并且由于ROS的過量生物利用導(dǎo)致血管損傷引起的心血管疾病尤為常見[5]。

人體抗氧化酶系統(tǒng)中的通過超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）的含量能反映自身抗氧化能力的大小[6]。而丙二醛（malondialdehyde，MDA）則為膜脂過氧化物指標(biāo)，是氧化應(yīng)激的主要有害產(chǎn)物之一，MDA的增多對線粒體呼吸鏈和氧化還原酶類都有不同程度損害[7]。國內(nèi)外研究表明，多種抗氧化劑的補(bǔ)充可以明顯改善人體的抗氧化活性，從而預(yù)防氧化應(yīng)激[8]。近年來，聚焦通過補(bǔ)充源自中藥的抗氧化劑改善人體的抗氧化能力并預(yù)防氧化應(yīng)激損傷[9]。

姜黃素是源自于姜黃中的多酚類物質(zhì)，為姜黃的主要活性成分，具有抗氧化、抗炎的作用[10-11]，其酚羥基或β-二酮部分的CH2基團(tuán)是清除ROS的重要成分[12]。臨床試驗(yàn)證明姜黃素是具有抗癌能力的安全且耐受性良好的膳食成分[13]。以多種抗氧化劑復(fù)配可增加姜黃的生物利用度，并有效增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力[8]。

白芍是常見的中藥材，在千年以前中國就已將白芍用于治療抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)等[14]。在對白芍的主要活性成分——白芍總苷的藥理機(jī)制進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)其具備一定的抗氧化能力[15-16]，對ROS有較強(qiáng)的清除能力[17]。白芍同樣具有藥效溫和，不良藥物反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)[18]。藥理學(xué)研究顯示姜黃白芍有多條通路重合，共同發(fā)揮抗氧化、調(diào)節(jié)免疫功能等作用[19]。試驗(yàn)通過探究姜黃白芍膠囊對改善人體抗氧化能力的作用，推動(dòng)姜黃白芍共同補(bǔ)充對人體抗氧化指標(biāo)影響的研究。

1 材料與方法

1.1 樣品及試劑

1.1.1 試食樣品

姜黃白芍膠囊（廣東佰嘉藥業(yè)有限公司）。該品為硬膠囊，內(nèi)容物呈黃色粉末。規(guī)格：400 mg/粒。

1.1.2 主要儀器與試劑

日立7180全自動(dòng)生化分析儀（日本株式會(huì)社日立高新技術(shù)）；DIRUI H-300尿八項(xiàng)分析儀（長春迪瑞公司）；Sysmex-K21三分類血液分析儀（Sysmex公司）；Sysmex血細(xì)胞分析稀釋液（Sysmex公司）；KX-21全自動(dòng)血液分析儀（日本希森美康公司）；BS-800全自動(dòng)生化分析儀（深圳邁瑞公司）；DIRUI尿分析試劑帶（長春迪瑞公司）；利德曼生化試劑盒（北京利德曼生化股份有限公司）；日本協(xié)和生化試劑盒（日本協(xié)和醫(yī)藥株式會(huì)社）；日本一化生化試劑盒（日本第一化學(xué)藥品株式會(huì)社）；原丁試劑（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；德國CENTRONIC試劑（德國CENTRONIC公司）。

1.2 研究對象

按照知情與自愿原則，以滿足以下標(biāo)準(zhǔn)者，作為試驗(yàn)的受試者參與人體試食試驗(yàn)。

1.2.1 受試者納入標(biāo)準(zhǔn)

選擇人群年齡范圍在18~65歲，身體狀況良好，無明顯腦、心、肝、肺、腎、血液疾病，無長期服藥史，自愿配合試驗(yàn)的人群。

1.2.2 受試者排除標(biāo)準(zhǔn)

1) 妊娠期或哺乳期的婦女，對保健食品過敏者。

2) 合并有心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病患者。

3) 短期內(nèi)服用與本試驗(yàn)受試功能相關(guān)的物品，影響到對結(jié)果的判斷者。

4) 不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，未按規(guī)定食用受試樣品，無法判定功效或資料不全影響功效或安全性判斷者。

1.3 設(shè)計(jì)與分組

采用自身對照與組間對照試驗(yàn)設(shè)計(jì)，并嚴(yán)格按照隨機(jī)盲法試驗(yàn)的有關(guān)要求將受試者隨機(jī)分為試食組與對照組，保證各組的受試者應(yīng)不少于50例。

受試者在試驗(yàn)期間應(yīng)保持原來的生活和飲食習(xí)慣。試食組服用樣品，對照組采用空白對照，除此之外與試食組保持相同。每名受試者每日2次，每次2粒，吞服，連續(xù)服用3個(gè)月，必要時(shí)可延長至6個(gè)月。

1.4 檢測指標(biāo)

受試者各項(xiàng)檢測指標(biāo)需在試驗(yàn)的開始及結(jié)束階段各檢測1次。

1.4.1 一般情況

受試者在試食期間的精神、睡眠、飲食、大小便、血壓、心率等。

1.4.2 安全性觀察

血、尿、便常規(guī)檢查，包括紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、白細(xì)胞計(jì)數(shù)，尿、大便常規(guī)檢查。

肝、腎功能檢查，包括血清白蛋白、總蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素、肌酐、葡萄糖等。

胸透、心電圖、腹部B超檢查。

1.4.3 功效性觀察

試驗(yàn)前后丙二醛（MDA，nmol/mL）含量變化的差異及下降百分率、超氧化物歧化酶（SOD，U/mL）活力的變化及升高百分率、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px，U/mL）活力的變化及升高百分率。

式（1）~（3）中試食前均為受試者在未試食時(shí)的功效指標(biāo)情況，試食后均為受試者在完成試食后的功效指標(biāo)情況。

1.5 結(jié)果判定

在試驗(yàn)前后的自身比較和試食后的組間比較中，MDA、SOD與GSH-Px這3項(xiàng)功效指標(biāo)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可判定為該指標(biāo)陽性。結(jié)果判定均按照原國家食藥監(jiān)局下發(fā)的“關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評價(jià)方法等9個(gè)保健功能評價(jià)方法的通知（國食藥監(jiān)?；痆2012]107號）”中的“抗氧化功能評價(jià)方法”的要求進(jìn)行評價(jià)。當(dāng)MDA、SOD與GSH-Px這3項(xiàng)指標(biāo)中任2項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果為陽性，可判定該受試樣品具有抗氧化功能作用。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 25.0軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，全部數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）的形式表示。自身前后比較采用配對樣本t檢驗(yàn)，2組均數(shù)比較在方差齊、或數(shù)據(jù)經(jīng)轉(zhuǎn)換后方差齊，則采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不齊，改用秩和檢驗(yàn)。以P＜0.05為顯著性差異水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 受試者脫失率

試驗(yàn)共納入受試者113例，試食組56例、對照組57例。在試驗(yàn)過程中試食組有2例、對照組有3例未按規(guī)定參加體格檢測退出試驗(yàn)，故有效受試者試食組54例、對照組54例，共108例，2組脫失率分別為3.6%和5.3%。

2.2 試食組與對照組均衡性比較

由表1可見，試食組年齡為58.89±6.74歲，男/女為15/39，對照組年齡為59.24±3.09歲，男/女為10/44。此外，試食前試食組MDA含量、SOD活力、GSH-Px活力、年齡、性別與對照組比較，差異無顯著性（P＞0.05），表明2組試食前的功效指標(biāo)、年齡、性別具有均衡可比性。

表1 試食前2組功效指標(biāo)、年齡、性別均衡性比較

2.3 試食組與對照組一般情況比較

由表2可見：大部分受試者的一般情況良好，試食組在試食后精神狀態(tài)、飲食情況正常；腹部B超、心電圖、X射線胸部透視在試食前后均未見異常。試食前后2組的一般情況進(jìn)行自身比較顯示無顯著性差異（P＞0.05），表明樣品試食對人體一般情況無不良影響。

表2 試食前后2組一般情況比較

表3 試食前后血、尿、便常規(guī)及血生化指標(biāo)變化（±SD）

表3 試食前后血、尿、便常規(guī)及血生化指標(biāo)變化（±SD）

指標(biāo) 試食組 (n=54) 對照組 (n=54)試食前 試食后 試食前 試食后白細(xì)胞/(109·L-1) 5.32±1.11 5.60±1.03 6.09±1.41 5.74±1.53紅細(xì)胞/(1012·L-1) 4.49±0.36 4.61±0.34 4.66±0.44 4.68±0.39血小板/(109·L-1) 213.26±37.91 218.81±36.06 234.46±44.11 228.52±38.5血紅蛋白/(g·L-1) 133.63±11.34 135.15±8.96 139.85±14.39 138.15±13.8總蛋白/(g·L-1) 74.86±3.17 71.10±2.96 72.61±3.83 72.82±3.05白蛋白/(g·L-1) 47.02±3.74 46.31±2.59 45.33±2.32 45.21±2.35谷丙轉(zhuǎn)氨酶/(U·L-1) 18.31±8.11 19.37±6.06 19.00±6.05 19.87±6.22谷草轉(zhuǎn)氨酶/(U·L-1) 19.07±5.82 20.33±5.12 21.02±4.16 19.98±4.45尿素/(mmol·L-1) 5.44±1.26 5.56±0.93 5.24±1.05 5.32±0.90肌酐/(μmol·L-1) 66.65±16.01 67.11±11.21 60.74±11.56 60.93±10.35總膽固醇/(mmol·L-1) 5.28±0.63 5.15±0.50 5.25±0.88 5.21±0.76甘油三酯/(mmol·L-1) 1.29±0.54 1.32±0.44 1.29±0.47 1.26±0.38葡萄糖/(mmol·L-1) 5.20±0.64 5.32±0.43 5.22±0.57 5.21±0.74尿常規(guī) 基本正常 基本正常 基本正常 基本正常便常規(guī) 基本正常 基本正常 基本正常 基本正常

2.4 試食前后血常規(guī)、尿常規(guī)、便常規(guī)及血生化指標(biāo)

2組受試者在試食前后的血、尿、便常規(guī)及血液生化指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)（P＞0.05）。

2.5 對受試人群功效指標(biāo)的影響

2.5.1 對丙二醛（MDA）含量的影響

由表4可見：與試食前相比，試食組與對照組在試食后的MDA含量無顯著性差異（P＞0.05）；試食前后2組的MDA含量的比較同樣無顯著性差異（P＞0.05）。

表4 受試物對MDA含量的影響（±SD）單位：nmol/mL

表4 受試物對MDA含量的影響（±SD）單位：nmol/mL

分組 例數(shù) 試食前 試食后 差值 下降率/%試食組 54 7.82±0.54 7.90±0.52 -0.08±0.65 -1.39±8.28對照組 54 7.83±0.60 7.84±0.64 -0.01±0.52 -0.34±6.53注: 自身比較和組間比較P＞0.05。

2.5.2 對谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力的影響

由表5可見：與試食前相比，試食組在試食后的GSH-Px活力顯著提升（P＜0.001），而對照組在試食前后的GSH-Px活力變化不明顯（P＞0.05）；在試食前2組的組間比較中，GSH-Px活力無差異（P＞0.05），而在試食后，試食組的GSH-Px活力顯著高于對照組（P＜0.001）。

表5 受試物對GSH-Px活力的影響（±SD）單位：U/mL

表5 受試物對GSH-Px活力的影響（±SD）單位：U/mL

分組 試食組 對照組例數(shù) 54 54試食前 133.83±20.83 139.80±31.74試食后 166.04±20.88***### 142.76±31.05差值 32.20±23.27### 2.96±18.90升高率/% 26.07±21.07### 3.04±14.10注: 自身比較***P＜0.001, 組間比較###P＜0.001。

2.5.3 對超氧化物歧化酶（SOD）活力的影響

由表6可見：試食組在試食后的SOD活力顯著高于試食前（P＜0.001），而對照組在試食前后的SOD活力無明顯差異（P＞0.05）；試食前2組組間比較中，SOD活力無差異（P＞0.05），而在試食后的試食組SOD活力明顯高于對照組（P＜0.001）。

表6 受試物對SOD活力的影響（±SD）單位：U/mL

表6 受試物對SOD活力的影響（±SD）單位：U/mL

分組 試食組 對照組例數(shù) 54 54試食前 71.84±6.45 71.95±10.00試食后 77.57±4.87***### 70.75±5.97差值 5.71±6.10### -1.20±7.51升高率/% 8.50±8.82### -0.60±10.24注: 自身比較***P＜0.001, 組間比較###P＜0.001。

2.6 不良反應(yīng)觀察

由表7可見，干預(yù)過程中2組受試者均未見過敏及其他不良反應(yīng)。

表7 試食后2組在試食期間過敏及其他不良反應(yīng)情況

3 結(jié)論與討論

機(jī)體在正常生理情況下，活性氧與抗氧化劑保持動(dòng)態(tài)平衡，而活性氧過量產(chǎn)生時(shí)會(huì)對機(jī)體蛋白、脂質(zhì)和DNA造成損害，從而導(dǎo)致炎癥與氧化應(yīng)激，持續(xù)的損害會(huì)增加細(xì)胞凋亡和壞死水平，最后導(dǎo)致器官的損傷甚至死亡[20]。研究報(bào)道機(jī)體內(nèi)高含量的MDA、低活性的SOD和GSH-Px與氧化應(yīng)激的加劇顯著相關(guān)，是評估機(jī)體氧化應(yīng)激嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)[21]。試驗(yàn)結(jié)果表明，人體服用姜黃白芍膠囊后，自身的抗氧化指標(biāo)有所改善。試食組在12周的干預(yù)后進(jìn)行自身比較，GSH-Px活力平均升高32.20±23.27 U/mL（P＜0.001），升高百分率為26.07%；SOD活力平均升高5.71±6.10 U/mL（P＜0.001），升高百分率為8.50%；試食組與對照組組間比較時(shí)，結(jié)果顯示試食組干預(yù)后GSH-Px活力升高（P＜0.001）、SOD活力升高（P＜0.001），提示姜黃白芍膠囊能有效改善機(jī)體的抗氧化能力。Panahi等[22]和趙金英等[23]研究報(bào)道補(bǔ)充姜黃素和白芍可有效降低人體的氧化應(yīng)激與炎癥狀態(tài)，與試驗(yàn)結(jié)果類似。

姜黃和白芍為天然的抗氧化物質(zhì)，因其可獲性廣、毒性低、藥理活性多樣等因素[24]，為人類解決氧化應(yīng)激問題提供獨(dú)特的思路。有研究表明姜黃素可通過核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2（Nrf2）-keap1途徑調(diào)節(jié)炎癥標(biāo)志物[25]。Nrf2具有抗炎作用，且與炎癥中的氧化應(yīng)激密切相關(guān)[26]。也有研究證明姜黃素對氧化應(yīng)激的抑制可通過上調(diào)ERK/p38-MAPK通路解毒基因表達(dá)得以解釋[27]。Saraf-Bank等[28]研究姜黃素補(bǔ)充劑對健康肥胖青少年氧化應(yīng)激標(biāo)志物影響，結(jié)果顯示姜黃素補(bǔ)充劑干預(yù)10周后顯著降低了MDA水平，且能明顯增加SOD活性。同樣地，白芍作為抗氧化活性最高的3種傳統(tǒng)中藥之一[29]，在提高機(jī)體抗氧化水平并減少氧化損傷方面具有重要作用。Chen等[30]探討白芍對哮喘大鼠抗氧化和抗炎的改善作用，結(jié)果表明接受白芍干預(yù)的治療組在10 d干預(yù)后觀察到SOD活性及GSH-Px顯著高于對照組，而MDA水平呈顯著低于對照組，提示白芍具有顯著的抗氧化能力。

此外，受試者在試食姜黃白芍膠囊前后，其胸透、腹部B超、心電圖與血、尿、便常規(guī)及血生化指標(biāo)均基本在正常范圍，且試食過程中未觀察到過敏及其他不良反應(yīng)，說明該品對受試者身體健康無不良影響，其安全性與有效性同前人進(jìn)行的試驗(yàn)結(jié)果一致[28,31-32]，為該品作為安全有效具有抗氧化功能的保健食品提供臨床證據(jù)。根據(jù)原國家食品藥品監(jiān)督管理局下發(fā)的通知（國食藥監(jiān)保化[2012]107號）附件1中抗氧化功能人體試食試驗(yàn)的判定標(biāo)準(zhǔn)，判定姜黃白芍膠囊具有抗氧化功能。

綜上所述，姜黃白芍膠囊產(chǎn)品能夠有效地改善人體的抗氧化功能，具有良好的抗氧化能力和安全性。